生物化学05第五章课件核酸化学

1、第五章 核酸化学第一节 核酸的概述 第二节 核苷酸 第三节 核酸的结构 第四节 核酸的提取、分离和测定 第五节 核酸的变性、复性与杂交 第一节 核酸的概述1染色体和基因2核酸第一节 核酸的概述（染色体和基因1）在生物细胞核中存在着一种能被碱性染料着色的螺旋集缩体，它是由核酸、 组蛋白、非组蛋白等组成，称此物质为染色体。经典遗传学认为，染色体和基因（遗传因子）间有平行现象，基因存在于染色体上，基因在遗传中具有完整性，随染色体的分裂、配对而进行独立的分配。 第一节 核酸的概述（染色体和基因2）第一节 核酸的概述（染色体和基因3）复制分开第一节 核酸的概述（1核酸的发现）1868年，从外科绷带上的脓

2、细胞的细胞核中分离得到一种含磷较高的酸性物质，称之为核素。（nuclein）核素实质是一种核糖核蛋白。瑞士科学家 F.Miescher1889年，Altmann首先制备了不含蛋白的核酸制品，并引入“核酸”这一名词。20世纪20年代测定了核酸的化学组成，并将核酸分为DNA和RNA。1943年，E .Chargaff的工作：嘌呤：嘧啶=1：1，由此推理出碱基配对的理论。1944年，Avery的肺炎双球菌转化实验，证明遗传物质即为DNA。1953年，Watson-Crick建立了DNA的双螺旋结构模型。遗传密码的阐明、核酸内切酶的发现、核酸的合成与分析技术、基因重组技术等的建立形成了分子生物学的基本

3、完整体系。第一节 核酸的概述（2核酸的研究史）第一节 核酸的概述（核酸的种类）核糖核酸（ribonucleic acid-RNA） 转移RNA(transfer RNA-tRNA) 信使RNA(messenger RNA-mRNA) 核糖体RNA（ribosomal RNA-rRNA）脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid- DNA）第一节 核酸的概述（核酸的分布）真核生物原核生物 DNA细胞核（95%）线粒体、叶绿体（5%）核质区（拟核） RNA细胞质（75%）线粒体、叶绿体（15%）细胞核（10%）细胞质第一节 核酸的概述（核酸的功能）DNA功能：遗传信息的载体，负责遗传

4、信息的贮存和发布。RNA功能：三者共同参与遗传信息的表达。 第一节 核酸的概述（核酸的组成）核酸核苷酸磷酸核苷戊糖碱基水解核蛋白蛋白质这样看核酸是一种高聚核苷酸，它的基本结构单位是核苷酸。第二节 核苷酸(总）1核糖2碱基3核苷4核苷酸5多磷核苷酸（ATP）核苷核酸核苷酸碱基许多个戊糖磷酸第二节 核苷酸(1戊糖）组成核酸的戊糖有两种 组成DNA 组成RNA第二节 核苷酸(2碱基1）核酸中的碱基分两类：（1）嘧啶碱：胞嘧啶（C） 尿嘧啶（U） 胸腺嘧啶（T）（2）嘌呤碱：腺嘌呤（A） 鸟嘌呤（G）尿嘧啶 U胸腺嘧啶 T胞嘧啶 CDNA特有RNA特有 嘧啶环第二节 核苷酸(2碱基2嘧啶1）第二节 核

5、苷酸(2碱基2嘧啶2）NNHNH2O 胞嘧啶Cytosine(C)NHNHOO 尿嘧啶Uracil(U)NHNHOO胸腺嘧啶Thymine(T)注意与书上图画法的区别第二节 核苷酸(2碱基3嘌呤1）鸟嘌呤 G腺嘌呤 A 嘌呤环第二节 核苷酸(2碱基3嘌呤2）NNNHNNH2腺嘌呤Adenine(A)NHNNHNONH2鸟嘌呤Guanine(G)注意与书上图画法的区别第二节 核苷酸(3核苷1）核苷是一种糖苷，由戌糖和碱基缩合而成糖与碱基之间以糖苷键相连接。糖的第一位上的碳原子（C1）与嘧啶碱的第一位上的氮原子（N1）或嘌呤碱的第九位上的氮原子（N9）相连，所以糖与碱基间的连键是N-C键，一般称之

6、为N-糖苷键。蛋白质与糖连接时，天冬酰氨的氨基与半羧醛羟基间形成的为N-糖苷键第二节 核苷酸(3核苷2）糖与碱基之间以C-N糖苷键连接第二节 核苷酸(4核苷酸1）核苷中的戌糖羟基被磷酸酯化，就形成核苷酸作为DNA或RNA结构单元的核苷酸分别是5-磷酸-脱氧核糖核苷和5-磷酸-核糖核苷第二节 核苷酸(4核苷酸2）磷酸碱基戊糖第二节 核苷酸(4核苷酸3）H2O碱基磷酸戊糖糖苷键脂键第二节 核苷酸(4核苷酸4）M-单(D-二；T三） ；P-磷酸RNA的名称为某（单、二、三）苷酸，DNA在某（单、二、三）前加脱氧两字。如AMP称腺苷磷酸(或腺苷酸），dAMP称为脱氧腺苷磷酸（脱氧腺苷酸）。八种核苷酸如

7、下表所示第二节 核苷酸(5多磷核苷酸1）参与核酸生物合成的直接原料不是一磷酸核苷酸，而是三磷酸核苷酸，如ATP （三磷酸腺苷酸）。ATP上的磷酸残基用、来编号。ATP含有两个高能磷酸酯键（P），其水解时释放出的能量为7.3千卡/克分子（普通磷酸酯键为2千卡/克分子）。ATP在细胞能量代谢中起着及其重要的作用。 第二节 核苷酸(5多磷核苷酸2）(腺嘌呤核糖核苷三磷酸)O-POO-NNNNNH2OHHOHHOHHOCH2O-POO-O-POO-三磷酸腺苷 (ATP)第三节 核酸的结构一、DNA的结构 二、RNA的结构 一、DNA的结构1(总）（一）DNA的的碱基组成 （二）DNA的一级结构 （三）

8、DNA的二级结构 （四）DNA的三级结构 （一）DNA的碱基组成碱基组成的规律：1A=T，G=C A+G=C+T2没有组织和器官的特异性3具有种的特异性4年龄、营养状态和环境的改变不影响DNA的碱基组成（二）DNA的一级结构1各核苷酸残基沿多核苷酸链排列的顺序叫核酸的一级结构。连接键：3，5一磷酸二酯键连接起来的直线形或环形分子。DNA没有侧链。脱H2O脂键相连3，5-磷酸二酯键首尾3553连接键（二）DNA的一级结构3(线条缩写)DNA线条缩写:戊糖5-磷酸PA核苷酸53首端末端PPPPPP A G C T G C OH3-OH 核苷酸顺序又称碱基顺序，是蛋白质与核酸结构的生物语言。硷基（二

9、）DNA的一级结构4(字母简写)DNA字母简写: 5 A P G P C P T P G P C P 3 或 5 A G C T G C 3（二）DNA的二级结构1(总)1DNA双螺旋结构模型的要点 2双螺旋结构的稳定因素3DNA双螺旋的不同类型 （二）DNA的二级结构2公认的为1953年watson和crick提出的DNA双螺旋结构模型（二）DNA的二级结构3此模型的建立主要基于两方面的根据（1）碱基组成A=T，C=G，并证明A与T之间可生成两个氢键，而C与G之间三个氢键。（2）X衍射结构分析：不同来源的DNA纤维具有相似的X光衍射图谱。1DNA双螺旋结构模型要点1（1）（1）DNA分子是由

10、两条方向相反的平行的多核苷酸链构成。即p5-糖3-p的结构与p3-糖5-p的结构相对;两条链的糖磷酸主链都是右手螺旋，有一共同的螺旋轴。1DNA双螺旋结构模型要点1（2）螺旋表面有一条大沟和一条小沟大沟小沟1DNA双螺旋结构模型要点2（1）（2）两条链由碱基间的氢键相连，碱基对与螺旋轴垂直,与糖环平面垂直;碱基在糖环的内侧，磷酸基在糖环的外侧；相邻碱基对平面间的距离是0.34nm，相邻核苷酸彼此相差360，双螺旋的每转有10对核苷酸，每转高3.4nm。1DNA双螺旋结构模型要点3（3）碱基成对有一定的规律： A-T，C-G或T-A，G-CA与T之间为二个氢键，C与G之间为三个氢键双螺旋DNA分

11、子整个长度的直径相同，为2nm1DNA双螺旋结构模型要点3双螺旋DNA分子整个长度的直径相同，为2nm1DNA双螺旋结构模型要点4（4）一个链的碱基顺序确定后，则另一条链必有相对应的碱基顺序。碱基互补原则具有极重要意义，DNA复制、转录、反转录等过程的分子基础都是碱基互补配对。2双螺旋结构的稳定因素1（1）氢键（2）离子键及范德华力（3）碱基堆积力2双螺旋结构的稳定因素2（1）氢键：两条链间碱基的相互作用，A与T之间为二条氢键，C与G之间为三条氢键。氢键作用力很弱，但DNA分子中存在大量氢键，因此氢键为一重要稳定因素。（2）离子键及范德华力：DNA分子中磷酸基因在生理条件下解离，使DNA成为一

12、种多阴离子，这有利于它与带正电荷的其它阳离子基团发生静电作用，这样减少双链间的静电排斥，有利于双螺旋的稳定。（3）碱基堆积力：目前普遍认为堆积碱基间的疏水作用是稳定DNA结构的更重要的因素。大量碱基层层堆积，两相邻碱基的平面十分贴近，于是使双螺旋结构内部形成一个强大的疏水区，与介质中的小分子隔开，有利于互补碱基之间氢键的形成。3DNA双螺旋的不同类型1B型DNA（BDNA）:在相对湿度为92%时,所得到的DNA钠盐纤维。A型DNA（ADNA）:在相对温度低于75%时，获得的DNA钠盐纤维。此外还有ZDNA等。3DNA双螺旋的不同类型2（四）DNA的三结构 当研究某些小病毒、线粒体、叶绿体及某些

13、细菌中分离出来降解的DNA时，发现它们的双螺旋二级结构还可进一步紧缩成闭链环状或开链环状以及麻花状等，这是DNA形成的三级结构。松弛形解链环形负超螺旋二、 RNA的分子结构1（一）RNA一级结构（二）RNA的碱基组成（三）RNA的类型（四）RNA的二级结构 （一）RNA一级结构由几十个至几千个AMP，GMP，CMP和UMP四种核苷酸借磷酸二酯键相连的多核苷酸链，其中不含侧链。 （二）RNA的碱基组成含腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、和尿嘧啶四种碱基，尚含有多种“稀有碱基”和特殊形式的核苷。其中以各种甲基化的碱基和“假尿嘧啶核苷”尤为丰富。假尿苷这些不寻常的成分可能与tRNA的生物学功能有一定的关系（三

14、）RNA的类型（ rRNA 1）含量：75-80%存在：与蛋白质结合成核蛋白的形式，存在于细胞质的核蛋白体中。功能：以核蛋白体的形式在蛋白质生物合成中提供合适的工作场所。分子量:它的分子量都比较大，大肠杆菌核糖体中有三类rRNA（它们的沉降系数分别为5S、16S、23S）；动物细胞核糖体rRNA有四类（5S 、 5.8S 、 18S和28S）。（三）RNA的类型（ rRNA 2）大肠杆菌5SRNA的结构（三）RNA的类型（tRNA）含量：约占1015%存在：tRNA溶于“胞液”部分中，它们以自由状态或以氨基酸结合状态而存在。分子量：都较小。功能：蛋白质的生物合成中起选择性运输原料（氨基酸）的作

15、用，因此把tRNA叫受体RNA 。（三）RNA的类型（mRNA1）含量:占总RNA的5%存在：在细胞核中以DNA为模板被合成以后，可能暂存于核仁内，也可能立即转移到胞质中，并以每分子mRNA与几个或几十个核蛋白体结合成串珠样的多核蛋白体形式而存在。特点：一般都很不稳定，代谢活跃，更新迅速，寿命较短，种类很多。功能:在蛋白质生物合成中起传递遗传信息的作用，故也叫信息RNA（iRNA）。（三）RNA的类型（mRNA2）真核单顺反子5 -末端有“帽子”3 -末端有polyA片段原核多顺反子5 -末端无“帽子”3 -末端 无polyA片段顺反子： mRNA上具有翻译功能的核苷酸顺序。polyA片段：指

16、10-200个多聚腺苷酸，这与mRNA顺利通过核膜进入胞浆有关，也与mRNA从细胞核转移到核糖体的过程有关，也有人认为与病毒侵染性有关。 “帽子”结构： 5-末端的G被甲基化，通过焦磷酸与另一个发生了核糖上甲基化的核苷酸以5、 5-磷酸二酯键相连,此结构对mRNA的翻译活性是重要的。 （三）RNA的类型（mRNA3）（四）RNA的二级结构1(总)（1）由四臂四环组成（2）叶柄是氨基酸臂（3）有反密码环（4）左臂连接（D环）（5）右侧有一个TC环（6）含有修饰碱基tRNA的三叶草型结构特点（总）D环反密码环TC环可变环（四）RNA的二级结构2(1)（1）tRNA一般由四臂四环组成。分子由A-U、

17、G-C碱基对构成的双螺旋区叫做臂；不能配对部分叫环。叶子臂123（四）RNA的二级结构2(2)（2）三叶草的叶柄叫做氨基酸臂，它包括3，端接受氨基酸的部位CpCpAOH载运氨基酸（四）RNA的二级结构2(3)（3）位于氨基酸臂对面的反密码环含有组成该tRNA反密码子的三个核苷酸。反密码子环 反密码子（四）RNA的二级结构2(4)（4）左臂连接一个二氢尿嘧啶环（D环），环上含有二氢尿嘧啶。D环（四）RNA的二级结构2(5)（5）右侧有一个TC环（含有T C顺序，代表假尿苷）和一个可变环，不同tRNA的可变环上核苷酸的数目变化较大。TC（四）RNA的二级结构2(5)（6）tRNA分子中含有修饰碱基

18、，但多少不等。在某些位置上的核苷酸对于所有的tRNA都是同样的，或变化很少叫做不变核苷酸。稀有碱基（五）RNA的三级结构1tRNA的三级结构:倒写的L字母氨基酸的接受端3，-端-CCA反密码子（五）RNA的三级结构2tRNA的三级结构2第四节 核酸的提取、分离和测定一、RNA的分离提取二、DNA的提取和分离 三、核酸含量的测定 一、RNA的分离提取1目前最常用的为酚提取法：即用缓冲液饱和的酚溶液直接处理组织或细胞，以除去其中的蛋白质和DNA若加入适量十二烷基硫酸钠或其它去污剂可进一步抑制核糖核酸酶，并使蛋白质去除得更加干净。将得到的RNA提取液用乙醇反复沉淀数次，溶解后进行透析，再冷冻干燥。提

19、取不同种类的RNA时，也可将各种亚细胞部分事先分开（因为不同种类的RNA存在于细胞中的不同部位），然后分别从核蛋白体中提取rRNA，从多核蛋白体中提取mRNA，从去除这些成分及其它颗粒后的细胞液中提取tRNA。一、RNA的分离提取21密度梯度离心法22柱层析法3凝胶电泳法一、RNA的分离提取3(1)离心管中放30% - 5%的蔗糖溶液。欲分离RNA溶液放在蔗糖溶液面上。经高速离心数小时后，分子大小不同的RNA即分散于不同密度的蔗糖部位中。应用啡啶溴红氯化铯密度梯度平衡超离心，可分开不同构象的DNA、RNA和蛋白质。1密度梯度离心法15蔗糖10蔗糖20蔗糖30蔗糖一、RNA的分离提取3(2)1密

20、度梯度离心法2石蜡油蛋白质开环形及线性DNA闭环形质粒DNARNA用垂直转头65000转6h，角转头45000转36h，离心后，蛋白质在最上面，RNA沉淀在底部，超螺旋DNA沉淀较快，开链或环形DNA沉淀较慢。此法分离的DNA纯度较高，可供DNA重组等实验用。如需更纯品，可再进行一次氯化铯密度梯度离心。一、RNA的分离提取42柱层析法常用的支持体为二乙胺乙基（DEAE）纤维素（离子交换），葡聚糖凝胶等（凝胶过滤）因为核酸和核苷酸是两性电解质，在一定的pH值条件下各解离基团的解离情况不同，即有与蛋白质相似的等电点（南大P147）。一、RNA的分离提取53凝胶电泳法不同种类的RNA分子所带电荷与其

21、质量之比都非常接近，故用一般电泳方法不易分开。若以某些凝胶为支持体进行电泳，由于凝胶的分子筛作用可影响不同RNA的泳动速度，则可得到较好的分离效果。 二、DNA的提取和分离0. 14mol法:处理方法结果浓NaCl溶液（1-2M）提取组织中的核蛋白稀释至0. 14mol 后DNA核蛋白的沉出RNA核蛋白则不沉出浓NaCl溶解DNA核蛋白氯仿或酚除去其中的蛋白质乙醇沉淀提取溶液中的DNA 蔗糖密度梯度离心法 分开各种DNACSCl或Cs2SO2浓溶液的密度梯度离心法 分开单股和双股DNA三、核酸含量的测定1紫外吸收：嘌呤碱与嘧啶碱有共轭双键，使碱基核苷、核苷酸和核酸在240290nm紫外波段有一

22、强烈的吸收峰，最大吸收值在260nm附近。不同核苷酸有不同的吸收特性，所以可以用紫外分光光度计定量及定性测定。三、核酸含量的测定2对待测样品是否纯品可用260nm与280nm的OD值，从OD260/280的比值即可判断。纯的DNA的比值应为1.8，纯RNA为2.0，如样品中含杂蛋白，测量比值明显下降。通常1OD值相当于50g/ml双螺旋DNA或40g/ml单螺旋DNA（或RNA）或20g/ml寡核苷酸计算。不纯的样品可用琼脂糖凝胶电泳分离出区带后，经啡啶溴红染色可粗略估计其含量。琼脂糖凝胶电泳图三、核酸含量的测定2第五节 核酸的变性、复性与杂交一、变性二、复性三、杂交四、核酸序列分析一、变性1

23、定义：指核酸双螺旋区氢键断裂，变成单链，它并不涉及共价键（磷酸二酯键）的断裂。变性因素：热变性、酸碱变性等。一、变性2一、变性3（Tm值1）通常把DNA的双螺旋结构失去一半时的温度称该DNA的溶点或溶解温度，用Tm表示，DNA的Tm值一般在70850C之间。变性的相对量温度0C60801001.01.21.41.60TmTmTm100%Poly d(A-T)Poly d(G-C)DNA一、变性3（Tm值2）Tm值的大小与下列因素有关： （1）DNA的均一性 （2）G-C含量 （3）介质中的离子强度一、变性3（Tm值3）影响Tm值大小的因素1（1）DNA的均一性：一般均一性越高，Tm值的变动范围

24、越小。（2）G-C含量：G-C含量越高，Tm值越大，Tm与G-C含量成正比关系。因为G-C比A-T更稳定（氢键）。Tm与所含G-C的多少的关系，可用经验公式计算不同DNA的Tm： （GC）(Tm69.3)2.44一、变性3（Tm值4）Tm与所含G-C的多少有关影响Tm值大小的因素2一、变性3（Tm值5）（3）介质中的离子强度：一般离子强度较低，DNA的Tm值也较低，范围也越窄。温度0C70801001.21.41.5901.11.3 A 2600.010.020.050.20.10.51.0影响Tm值大小的因素3大肠杆菌DNA在不同KCl浓度下的Tm二、复性1定义：变性DNA在适当条件下，又可

25、使两条彼此分开的链重新缔合成双螺旋结构。高温变性缓慢冷却热复性二、复性2DNA复性后，许多物化性质又得到恢复，生物活性可以得到部分恢复。但将热变性的DNA骤然冷却，不能复性，只有缓慢冷却时才可以复性。高温变性缓慢冷却热复性急速冷却复性失败二、复性3（影响因素）1DNA浓度：浓度高时，两条互补链彼此相碰的机会增加，易于复性。2温度：加热变性的DNA，当温度超过Tm后，如迅速冷却到低温时不能复性，但当溶液维持在Tm以下的较高温度时， 则可复性，一般比Tm低250C左右时最佳。3DNA片段大小的影响：大的线状单链，其扩散速度受到妨碍，减少了互补链的碰撞机会。三、核酸的杂交1概念：两种来源不同，具有互

26、补碱基序列的多核苷酸片段在溶液中冷却时，可以再形成双螺旋结构，称为杂交作用。DNA和DNA杂交以及DNA和RNA杂交在核酸技术中占有十分重要的地位。三、核酸的杂交2 （一）核酸研究的主要工具酶（二）核酸的杂交技术（一）核酸研究的主要工具酶1核糖核酸酶类（RNA酶类）2脱氧核糖核酸酶类（DNA酶）3非专一性核酸酶类1核糖核酸酶类（RNA酶类1） （1）牛胰RNA酶（RNaseA或RNaseI） （2）RNA酶T1（RNaseT1）1核糖核酸酶类（RNA酶类2） 专一作用RNA，而不作用于DNA;其分子量14,000，最适pH7.0-8.2，十分耐热;具有高度的专一性，作用点为嘧啶核苷3，磷酸与其

27、他核苷酸之间的连键，生成3，嘧啶核苷或以3，嘧啶核苷酸结尾的寡核苷酸（南大P152）。PPPPPP C(U) B G A(G) B C OHRNaseIRNaseI（1）牛胰RNA酶（RNaseA或RNaseI）：1核糖核酸酶类（RNA酶类3） 比RNaseI更具有专一性，其作用点为鸟嘌呤核苷3，-磷酸与其他核苷酸之间的连键，产物为3， -鸟苷酸或以其结尾的寡核苷酸。其分子量较小，耐酸耐热。PPPPPP C(U) B G A(G) B C OHRNaseIRNaseIRNaseT1（2）RNA酶T1（RNaseT1）2脱氧核糖核酸酶类（DNA酶1）（1）牛胰脱氧核糖核酸酶（DnaseI）（2）

28、牛胰脱氧核糖核酸酶（DNaseII）（3）限制性内切酶(限制酶) 2脱氧核糖核酸酶类（DNA酶2）（1）牛胰脱氧核糖核酸酶（DnaseI）：此酶无碱基专一性，它切断双链DNA或单链DNA成为以5，磷酸为末端的寡核苷酸，平均长度为四个核苷酸，需Mg2+，最适pH7-8。（2）牛脾脱氧核糖核酸酶（DNaseII）：也无碱基专一性，降解DNA成为以3，磷酸为末端的寡聚核苷酸，平均长度为六个核苷酸，最适pH4-5，需0.3mol/L的Na+激活。Mg2+可以抑制此酶的活性。2脱氧核糖核酸酶类（DNA酶3-1）是1979年，Arber、Smith和Nathams等人在细菌体内发现的一类对DNA具有极高碱

29、基专一性的内切酶。是DNA顺序测定，基因分离和基因体外重组等研究中十分重要的工具酶。这类酶主要降解外源的未经特殊修饰的DNA，但不降解自身细胞的DNA。一般识别顺序包含4-6个碱基对。（3）限制性内切酶(限制酶)2脱氧核糖核酸酶类（DNA酶3-2） 大多数限制性内切酶的识别顺序具有回文结构（反向重复序列）。（3）限制性内切酶(限制酶)2T T A G C A C G T G C T A AA A T C G T G C A C G A T T反向重复3，5，3，5，2脱氧核糖核酸酶类（DNA酶3-3）大多数酶切割后形成粘末端（3）限制性内切酶(限制酶)3G A A T T CC T T A A

30、 G3，5，3，5，EcoRIG A A T T CC T T A A G3，5，3，5，+粘性末端粘性末端2脱氧核糖核酸酶类（DNA酶3-4）少数酶切割后形成平整末端（3）限制性内切酶(限制酶)3G T Py Pu A CC A Pu Py T G3，5，3，5，HindII平整末端G T Py Pu A CC A Pu Py T G3，5，3，5，+3非专一性核酸酶类1（1）蛇毒磷酸二酯酶（2）牛脾磷酸二酯酶3非专一性核酸酶类2（1） 对RNA、DNA都有作用，是从核苷酸链的3，羟基端开始，逐个切开5， 核苷酸与相邻核苷酸之间的酯键，得到5，核苷酸。（1）蛇毒磷酸二酯酶PPPH2O OHP

31、PP OH OH+3非专一性核酸酶类2（2） 可作用RNA和DNA，是从5，-羟基端开始，逐个切开3，-核苷酸与相邻核苷酸之间的酯键，得3，核苷酸。PPPH2O OH+（2）牛脾磷酸二酯酶PP OHPPP OH（二）核酸的杂交技术1意义：核酸杂交可以在液相或固相上进行，是基因工程和分子生物学的重要技术之一。是鉴定阳性重组体、筛选基因、确定DNA的同源性、研究基因定位、组建DNA的物理图谱、研究DNA的间隔顺序等的有效手段。原理:核酸（DNA）的变性和复性的性质，也就是在带有互补顺序的同源单链间的配对过程中，DNA单链可重新形成双链，DNA单链也可与RNA互补成为杂交分子。因此有DNA类、DNA-RNA类两种杂交。如把已知序列的分子预先用放射性同位素（32P）标记（称为探针，Probe），即可用其识别或“钓出”另一分子中的同源部分。（二）核酸的杂交技术2Southern 印迹法:利用上述原理，1975年英国分子生物学家E.M.Southern首先发明的一种杂交 “印迹法”。此法是将凝胶上的DNA片段转移到硝酸纤维素膜上后，再进行杂交具体方法参见北大P352,353。（二）核酸的杂交技术3（1）1将DNA样品经限制性内切酶降解后，用琼酯糖凝胶电泳进行分离2将胶浸泡在碱