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文档简介

1、第二节血液分析仪检验参数和临床应用一、检验参数:临床报告参数(红、白细胞、血小板等)、异常报警或研究参数、仪器内部监测参数3类 7/20/20221结果显示数据散点图直方图报警7/20/20222报警项目WBC异常WBC Abn Scattergram WBC散点图异常NRBC Abn Scattergram NRBC散点图异常Neutropenia 嗜中性粒细胞减少Neutrophilia 嗜中性粒细胞增加Lymphopenia 淋巴细胞减少 Lymphocytosis 淋巴细胞增加Monocytosis 单核细胞增加 Eosinophilia 嗜酸性粒细胞增加Basophilia 嗜碱性粒

2、细胞增加 Leukocytopenia 白细胞减少Leukocytosis 白细胞增加 NRBC present 有核红细胞增加 7/20/20223WBC怀疑: Blasts? 原始细胞 Immature Gran? 未成熟粒细胞Left Shift? 左移Atypical Lympho?不典形淋巴细胞Abn Lympho/L-Blasts? 异常淋巴/原始淋巴 NRBC 有核红细胞 RBC Lyse resistance 红细胞溶解不全 7/20/20224RBC/RET异常: RBC Abn Distribution 红细胞粒子分布异常Dimorphic Population 双峰红细胞

3、RET Abn Scattergram RET 散射图异常 Reticulocytosis RET增加Anisocytosis 红细胞大小不均 Microcytosis 小红细胞症Macrocytosis 大红细胞症Hypochromia 低血红蛋白症 Anemia 贫血Erythrocytosis 红细胞增多症7/20/20225RBC/RET怀疑:RBC Agglutination 红细胞凝聚Turbidity/HGB Interference? 乳糜/HGBIron Deficiency? 缺铁性贫血 HGB Defect? HGB异常Fragments? 碎片 7/20/20226PL

4、T报警信息PLT异常:PLT Abn Scattergram 血小板散射图异常 PLT Abn Distribution 血小板直方图异常Thrombocytopenia 血小板减少Trombocytosis 血小板增加PLT怀疑:PLT Clumps? 血小板凝集PLT Clumps(S) 血小板凝集 7/20/20227常见特殊符号的说明(+) 表示超出检测范围( - ) 表示仪器不能辨别和分类( * ) 表示受干扰因素影响,结果可信度降低( & ) 表示结果受到修正(WBC & /PLT &)( ) 表示超出线性范围7/20/20228报警信息说明一般报警项目当WBC0.10X109/L

5、时,不显示WBC五分类结果当WBC 40.0g/dL and MCH 40pg and RBC 40.0g/dL and MCH 40pg实例讲解7/20/202228浑浊/HGB 干扰 ?原因: MCHC 365g/L (22.8mmol/L)可能原因:溶血 HCT 假性减低 建议重新采血脂血 HGB 假性增高. 1:5稀释标本 RBC冷凝集 HCT 轻度假性减低 加温 37 C 实例讲解7/20/202229铁缺乏?MCHC 310g/L and MCV 15.0%RDW-CV 15.0% and MCV 75flHGB 异常实例讲解7/20/202230红细胞溶血不全?原因: RBC抗溶

6、实例讲解7/20/202231红细胞溶血不全?原因:乳糜微滴实例讲解7/20/202232NRBC ?有核红细胞?原因:有核红细胞和淋巴细胞/影细胞边界区域数目大于设定值实例讲解7/20/202233WBC 异常散点图原因:1. 界标上的细胞数量超限2. 该细胞群在 WBC/BASO 散点图上无法分开。3. 5 分类无法计算 WBC (Ly# + Mo# + Eo# + Baso#) 100% 80 (研究参数) 2. DIFF-IG% 0.8 % (研究参数) 实例讲解7/20/202236Left Shift ?左移?原因:1. DIFF_Left Shift # 2002. DIFF_L

7、eft Shift % 4%Ne/EoLy/Ne 2Lym/GstLy/Mo2Ly/Mo2Ly/BaMo/Ne1Ne/GstMo/EoLS实例讲解7/20/202237Atypical Lympho ?不典型淋巴?原因: Atyp. Lymph 区域 100Atyp. Lymph 区域 1 % 实例讲解7/20/202238Abn Lympho/L-Blast ?异淋/原始淋巴细胞?原因: Ly/Mo 2 交接面细胞数量过多 若“Blast?” 出现, “ABN Lympho/Blast?” 不显示.Ne/EoLym/GstLy/Mo2Ly/Mo2Ly/BaMo/Ne1Ne/GstMo/Eo实

8、例讲解7/20/202239PLT 异常分布1. PL (%) 10 % 2. PU (%) 40 % 3. PDW-SD 无法计算4. PDW 20fl5. P-LCR 45% and MPV 13fl and PU 24fl6. PU 20%PLPU100 %20 %10 fl20 fl30 fl40 fl12 fl7/20/202240PLT 异常散点图原因:WBC-碎片# 20: PLT 值无效7/20/202241PLT Clumps (s)凝集原因:1. PLT# 60 x109/L 且 PDW 20 fl 或 PL(%) 9%或 PU (%) 20%或 P-LCR 45% and

9、 MPV 13fl and PU24fl 当 PLT-Clumps ?出现时, PLT-Clumps (s) ?不提示. 7/20/202242PLT-I 和 PLT-O 转换规则PLT-I 由 PLT-DC 直方图获得PLT-IPLT-OPLT-O 由RET (PLT-O) 散点图获得7/20/202243PLT-I 和 PLT-O 转换规则出现碎片和大血小板的标本,直方图曲线发生变化,PLT-UD异常在RET散点图中, RBC和 PLT-O 散点图上区分不清楚7/20/202244转换条件1、RL(%)10%2、PL(%)9% 3、PU(%)39%4、PU23fland PU(%)20%5

10、、存在细胞碎片6、存在红细胞聚集7、PU%13% and PLT35fl45% and PLT-I#80 x109/L8、PLT-I115%7/20/202245PLT-I 和 PLT-O 转换规则PLT-IPLT-O在WBC 碎片或大血小板病例中:PLT-IPLT-O在RBC 碎片病例中:7/20/202246PLT-I 和 PLT-O 转换规则PLT-I, 低可信度PLT-O,低可信度PLT 计数无效PLT-I报告PLT-O报告NoNoYesYes7/20/202247异型淋巴细胞实例讲解7/20/202248异型淋巴细胞7/20/202249异型淋巴细胞实例讲解7/20/202250CM

11、L实例讲解7/20/202251CML实例讲解7/20/202252AML-M2实例讲解7/20/202253AML-M2实例讲解7/20/202254AML-M4实例讲解7/20/202255AML-M4实例讲解7/20/2022567/20/2022577/20/202258红细胞散点图 280g/L410g/L60fL120fL7/20/202259第四节 血细胞分析仪性能评价与全面质量控制7/20/202260 一、血液分析仪校准及性能评估稀释效应:线性分析总重复性批内精密度批间精密度携带污染可比性准确性标本老化(sample ageing):静脉采血后,观察随时间增加测定结果变化量干

12、扰试验参见CNAS-GL19医学实验室质量和能力认可准则在临床血液学检验领域的指南进行实例讲解7/20/202261稀释效应:线性检测实验方案:选取一份接近预期上限的高值全血样本(H),分别按100%、80%、60%、40%、20%的比例进行稀释,每个稀释度重复测定3次,计算均值。将实测值与理论值作比较(偏离应小于10%),计算 y=ax+b,验证线性范围。 合格要求:a值在10.05范围内,相关系数r0.975实例讲解7/20/202262HGB稀释度第一次第二次第三次均值理论值20%54535353.33 52.27 40%99989898.33 104.53 60/p>

13、0.67 156.80 80%204204205204.33 209.07 100%260261263261.33 261.33 a0.9987 r0.9991 实例讲解7/20/202263批内精密度(批内变异系数CV)试验方案:取低、中、高三份标本,每份标本连续测定20次,算CV值参数WBCRBCHGBHCTMCVPLT判定标准CV3.0%1.5%1.0%1.5%1.0%4.0%实例讲解7/20/202264携带污染率实验方案:根据ICSH的血细胞分析仪评价指南,取高浓度血液样本,混合均匀后连续测定三次,测定值分别为H1、H2、H3;再取低浓度血液样本,连续测定3次,测定值分别为L1、L2

14、、L3。按公式计算携带污染率(L1L3)(H3L3)携带污染率 =100%参数WBCRBCHGBHCTPLT要求1.0%1.0%1.0%1.0%1.0%实例讲解7/20/202265可比性:仪器或参考方法之间结果的比对实验方案:准备10份新鲜血样本,浓度覆盖生物参考区间,整个实验应该在样本老化之前完成。在基准仪器和比对仪器上检测这10份样本,计算比对仪器和基准仪器之间的结果偏差百分比比对的偏差范围在下表的范围内(1/2CLIA88)为满足要求,10份标本中8份满足要求为比对合格。参数WBCRBCHGBHCTMCVPLT偏差%7.50%3.00%3.00%3.00%3.00%12.50%实例讲解

15、7/20/202266准确性:仪器校准试验方案:校准物:SCS-1000 LOT NO:73240525 EXP.DATE:2007.12.24校准物(测6至11次,取第一次结果)的均值与定值间的偏差应达到表中的偏差要求(此偏差要求是卫生部临检中心之规定),否则调校准系数或调整仪器,再做校准实验确认实例讲解7/20/202267参数WBCRBCHGBHCTMCVPLT单位(109/L)(1012/L)g/LL/L(fL)(109/L)定值6.7574.717143.441.587.66185.0 16.81 4.69 143 41.2 87.8 182 26.72 4.74 141 41.6

16、87.8 183 36.64 4.68 142 41.1 87.8 180 46.57 4.70 142 41.3 87.9 182 56.63 4.71 142 41.4 87.9 185 66.78 4.73 143 41.5 87.7 180 MEAN(均值)6.69 4.71 142.17 41.4 87.8 182.0 SD0.094 0.023 0.753 0.187 0.075 1.897 CV1.40%0.49%0.53%0.45%0.09%1.04%偏差(%) (均值-定值)100/定值0.97%0.18%0.86%0.36%0.18%1.62%偏差要求1.50%1.00%1

17、.00%2.00%1.00%3.00%结论(是否需要校准)不需校准不需校准不需校准不需校准不需校准不需校准校准系数(定值/均值)100.98%100.18%100.87%100.36%99.84%101.65%仪器原有校准系数107097898.81041000970 新的校准系数1070 978 98.81041000970 说明实例讲解7/20/202268标本老化 标本老化(sample ageing)是指随着静脉标本采集后时间的增加,测定结果的变化量。 应采集10份标本,其中5份为正常个体,5份为影响各种分析参数的异常个体。标本分别贮存在室温和4,并在0、30min、1h、2 h、3

18、h、4 h、5 h、6 h、12 h、24 h、48 h和72h内检测。以百分率或以绝对值-时间作图,观察被检测参数的变化。 7/20/202269白细胞分类计数性能评价 项目内容(1992年, NCCLS发布NCCLS-H20文件 )计数方法每张血涂片应计数200个白细胞,如白细胞减少,应同时增加血片数量血片检查限定量检验人员每天按每张涂片分类计数200个细胞计,不超过1525张考核用血片标本标本1:含分叶核中性粒细胞、杆状核中性粒细胞、正常淋巴细胞、异型淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞标本2:含少量有核红细胞标本3:含少量未成熟白细胞评价方案标本制备、比较分类计数不准确度和不

19、精密度、临床灵敏度、统计学方法7/20/202270二、全面质量控制(一)、质量保证包括:检验分析前、中、后3个阶段。患者、医师、护士、工勤、检验5方面人员的交接配合。仪器、试剂和报告发送传输的多项硬件条件。 7/20/202271分析前质量保证技术人员的要求:有合格检验人员 仪器安装条件:有合适的检测环境 仪器的验收、仪器的校准、仪器的比对 :有合格的血液分析仪及合格的配套试剂 校准物、质控物和标本的要求:有合格的检测标本及配套试剂仪器参考值的设置 各种标准操作程序 (standard operation procedure ,SOP)分析前7/20/202272分析前的质量控制具体措施1.

20、人员培训与考核2.静脉抗凝血。EDTA2K 150g/L 10ul抗凝0.5-1.0ml血,细胞24小时,分类6小时,形态2小时内稳定。3.不能放冰箱,最好真空管采血4.使用厂家配套试剂5.周围环境对仪器的影响。温度、湿度、电、空气污染等6.仪器校正。最好的校正液是经ICSH推荐参考方法定值的新鲜人血液。如SYSMEX SCS-1000.7.质控液是一种用于常规工作中与被测标本一起测定,以核查分析过程(或仪器)准确性的物质,一般是人工微粒制品或醛化的人血细胞。 分析前7/20/202273血液样本采集SOP分析前7/20/202274血液样本采集SOP分析前7/20/202275血液样本采集S

21、OP分析前7/20/202276血液样本采集SOP分析前7/20/202277分析中质量保证仪器使用室内质控 标本检测 仪器保养分析中7/20/202278分析中质控具体措施1.仪器开机,本底测试通过2.质控物通过:Westgard多质控规则判断3.标本检测:X-B分析(MCV、MCH、MCHC)4.参加室间质控:如每年的卫生部使间质评活动5.人工对可疑标本进行复检。学会分析直方图、散点图以及数据与临床、影响因素等。6.复核标准参见Coulter或XE-2100协作小组23条标准 分析中7/20/202279血液项目分析SOP分析中7/20/202280血液项目分析SOP分析中7/20/202

22、281血液分析仪器SOP 分析中7/20/202282血液分析仪器SOP分析中7/20/202283血液分析仪器SOP分析中7/20/202284血液分析仪器SOP分析中7/20/202285血液分析仪检测结果显微镜涂片复检规则 2005年,国际血液学组织提出了显微镜复检的41条建议性标准P113-1142008年我国制定23条显微镜复检规则分析中7/20/202286国际血液分析仪检测结果以手工涂片复查真阳性标准 涂片镜检阳性:发现异常形态细胞涂片镜检阳性:发现异常类型细胞红细胞形态异常:2/中等量或更多;或发现疟原虫原始细胞:1个血小板形态异常(巨大血小板):2/中等量或更多晚幼粒细胞:2

23、个血小板凝块:偶见或时而可见中幼粒/早幼粒细胞:1个Dhle 小体:2/中等量或更多非典型淋巴细胞:5个中毒颗粒:2/中等量或更多有核红细胞:1个空泡:2/中等量或更多浆细胞:1个分析中7/20/202287血液分析仪器结果审核规则(1)超过检测线性:WBC440109/L、RBC8.01012/L、Hb250g/L、PLT1000109/L、Ret23%或Ret#0.72109/L (2)WBC、RBC、Hb、PLT:无结果或结果不全 (3)WBC:3.0109/L或30.0109/L (4)PLT:80109/L或1000109/L,或血小板直方图异常或与以往相差太大,手工记数 (5)Hb

24、:70g/L或180g/L (6)MCV:75fl或105fl(成人) (7)MCHC:380g/L (8)MCHC:300g/L,且MCV80fl (9)RDW:首次结果22% (10)DC:无结果或结果不全 (11)Neut#:1.0109/L或20.0109/L (12)Lym#:5.0109/L(13)Monp#:1.5109/L (14)Eos#:2.0109/L(15)Baso#:0.5109/L(16) IP Message:白细胞异常散点图(17) IP Message:未成熟粒细胞 (18 IP Message:核左移(19) IP Message:异形淋巴细胞?异常淋巴细胞

25、或原始细胞 (20) IP Message:原始细胞 (21) IP Message:有核红细胞 (22)CBC+DC:新生儿标本 (23) CBC+DC:血液病标本分析中7/20/202288血液分析仪器结果审核记录分析中7/20/202289血液细胞镜检记录分析中7/20/202290分析后质量保证 实验室内结果分析 临床情况作相关分析 定期临床对话记录和报告难以解释的检测结果 分析后7/20/202291血液分析仪室内质控方法实例讲解:温附一临检中心现行方案全血质控物:e-Check或5C.具体参照CNAS-GL19医学实验室质量和能力认可准则在临床血液学检验领域的指南进行中国合格评定国

26、家认可委员会(英文缩写:CNAS)。实例讲解7/20/202292CNAS-GL19血液分析仪室内质量控制的要求质控品的选择:推荐使用配套质控品,使用非配套质控品时需评价其质量和适用性。质控品的浓度水平:至少使用2 个浓度水平(正常和异常水平)的质控品。质控项目:申报认可的所有检测项目均需开展室内质量控制。实例讲解7/20/202293血液分析仪室内质量控制的要求质控频度:需通过检测质控物,检查血常规检验的精密性,宜根据实验室检验标本的数量定期实施,质控最少次数,仪器每次开始运转时做1次正常和异常水平的质控,结果在2s以内,才可检测标本;超过3s为失控,不可检测标本 。质控方法:宜使用Leve

27、y-Jennings 质控图。 实例讲解7/20/202294Levey-Jennings质控图或类似的质量控制记录宜包含以下信息检测质控品的时间范围质控图的中心线和控制界线仪器/方法名称质控品的名称、浓度水平、批号和有效期试剂名称和批号每个数据点的日期操作人员的记录实例讲解7/20/202295质控图中心线的确定血常规检查的质控物测定宜在每天的不同时段,一般上午测4次,下午测4次,至少检测3 天,至少使用10 个检测数据,求其均值为质控图的中心线靶值。标准差的确定:通过一段时间的反复检测确定室内质量控制的标准差,标准差的计算方法参见GB/T20468-2006。一般用上月的实测SD为本月SD

28、.首月用连续20天实测的数据算出SD値。实例讲解7/20/202296质控分析报告失控报告:包括失控情况的描述、核查方法、原因分析、纠正措施及纠正效果的评价等内容。月质控分析报告:质控数据的管理原则上每月统计1 次,至少保存二年记录的检查:血液学检验部门的负责人(或由负责人指定的授权人)宜至少每月对室内质量控制的记录进行检查并签字。实例讲解7/20/202297室内质量控制结果分析分析各类误差的性质随机误差固有的,无法消除。系统误差影响实验结果准确性频率最高的误差。抗凝剂、比率、试剂、仪器、操作者等。过失误差系统误差的特殊形式,主要是人为因素。实例讲解7/20/202298偶然性失控-显性质控原因:更换试剂,标本质量,样本混匀,微孔半堵孔实例讲解7/20/202299漂移和趋向性失控-隐性失控连续5个点为失控,系统误差。实例讲解7/20/2022100X-B质量控制原理浮动均值法Dr.Bull分析176

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