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文档简介
1、第一章畜禽血液和病料采集(cij)技术 Kgbm/L0XR* 第一节 畜禽血液采集(cij)技术 ySVD 一、要求(yoqi): Rr )+M3 1、所有采血用具均应事先以消毒、干燥处理; 4bT9 2、采血部位要进行剪毛、清拭并按常规进行消毒(先碘酊后酒精)。 &gXh:. 3、怀疑传染病时,采血过程要防止到处流散,检后的残余血液及所用器皿要进行消毒处理。 0zn+ 4、需抗凝的要加入抗凝剂。常用的抗凝剂有: ,+yD9 双草酸盐抗凝剂: TgbpLk0= 草酸钾0.6克;草酸铵1.2克;蒸馏水加至100毫升;溶解后,吸取0.5毫升,加入供采血用的试管或小瓶中,置干燥箱内(温度不能超过80
2、),烘干备用(实际含草酸盐10毫克,可供5毫升全血抗凝用) mDB 枸橼酸钠 6mg可使1ml血液不凝固,或配成3.8%的溶液。适用于血钙的测定和血沉测定时的抗凝。 mB?x_6#d9 乙二胺四乙酸二钠(EDTA二钠)每10毫克可使5毫升全血抗凝;或配成10%的溶液,每2滴可使5毫升全血抗凝。 Fw; .e! 肝素对血中有机成分和无机成分测定均无影响,多用于科研。常用肝素钠配成1ml内含1mg (0.1%)的水溶液,取0.1ml分装于小试管或小青霉素瓶中,在80以下烤干后备用,可使510ml血液不凝固。 nIx! 5、需分离血清的血液(不抗凝),试管要静置、斜放,便于血清晰出。 HgI!q)
3、6、注意安全。 Wa_qD zw0w.V 二、家禽血样的采集 zdMmpQF (一)鸡翅内侧静脉采血 dUI5,3* 1、器械准备:酒精棉球;小试管或细塑料管,试管架;镊子;配57针尖的一次性注射器。 wQkM:=t5 2、保定:手提保定。助手一手抓住两只鸡腿,一手抓鸡翅根部,以拇指按压静脉管。 TJ|Jv8js 3、部位确定:鸡翅内侧腋静脉,肉眼可见。 ZL MHcc 4、操作:助手抓住鸡翅根部,以拇指按压静脉管,使之充盈。术者左手大拇指捏住鸡翅内侧,余四指捏住鸡翅外侧,展平鸡翅,右手持针,沿血管方向,于血管傍先刺入皮下,然后再斜刺向血管,抽取血液(此法避免拔针后出血过多)。也可直接刺向血管
4、,抽取血液(采用此法,拔针后要用干棉球按压数分钟止血)。或者将鸡翅摆平,直接先将静脉用针刺破,待血液流出后,用细塑料管利用虹吸的原理吸取血液,事毕,用火将细塑料管一头封闭。 $pGT1oFE (二)鸡心脏采血 sDYjPOa 方法1 U|(+-R8Z 操作要点:鸡左侧向上横卧保定,拔去胸上部部分羽毛,寻找由胸骨走向肩胛的皮下大静脉,心脏约在该静脉的分支下侧,有时用食指可摸到心脏跳动。用酒精消毒后,以碘酊标记部位。针头(7)刺入时,如触及胸骨可稍拔出,使针头稍向右偏,避开胸骨,再将针头向里刺入,边刺边抽动活塞,若刺入心脏,便有血液涌入注射器,术毕,局部消毒。 .n-#A 方法2 Kz,_bo 操
5、作要点:鸡仰卧保定,鸡头部朝向术者,拔去胸上部少许羽毛,用手指在胸骨上方、嗉囊下方摸得一凹窝,右手持针(7),自胸骨上方凹窝斜向前下方心脏方向(鸡的左侧、术者的右侧)刺入,边刺边抽动活塞,若刺入心脏,便有血液涌入注射器,术毕,局部消毒。 q2vE;z Kb 注意:此法(含方法1、2)采血后,多会引起鸡只死亡,仅适用于淘汰鸡的采血。 1H)mJVIKkB (三)鸡头部静脉窦采血 H:Bri 1、器械准备:酒精或碘酊棉球;小试管,试管架;镊子;配57短针尖的一次性注射器。 0D X_ *f 2、保定:助手一手抓鸡的两只腿,一手抓鸡的两翅,使头部向上。术者左手食指和中指夹住鸡喙,大拇指压住颈上部,以
6、此固定头部。 vqf$( 3、部位确定:鸡头后部,枕骨大孔为刺入点。 cbL_ 4、操作:鸡只如上述方法确切保定后,枕骨大孔部少许拔毛,消毒,术者右手持针,自枕骨大孔进针,针头对准喙尖,约与颈椎纵轴成45角,刺入约0.50.8cm(视鸡只大小),刺入静脉窦后,针头感觉无阻力,抽取血液,术毕消毒。 )VwxH:s 注意:此法采血后,亦会引起鸡只死亡,故适用于淘汰鸡的采血。苗鸡采血亦可用此法。 zM0NRERi 6eoB? 5、适量采样。采集样品的数量要满足诊断检测的需要,并留有余地,以备必要时复检使用。 )Q)qz$h 6、样品处理。采集的样品应一种样品一个容器,立即密封,根据样品的性状检验要求
7、的不同,作暂时的冷藏、冷冻或其它处理。供病毒学检验的样品,数小时内要送到实验室,只作冷藏处理,超过数小时的要冷冻处理,(冻结方法:可将样品放入-30冰箱内冻结,然后再装入有大小冰块或干冰的冷藏瓶(箱)内运送,亦可将装入样品的容器放入隔热保温瓶内,再放入冰块,然后按100冰块加入食盐约35克,立即将隔热保温瓶瓶口塞紧。瓶内温度可达-21左右)。供细菌学检验或血清学检验的样品,冷藏送实验室即可。装样品的容器应贴上标签,标签要防止因冻结而脱落,标签标明采集的时间、地点、号码和样品名称,并附上发病、死亡等相关资料,尽快送实验室。 !-gU0 7、安全采样。既要保护采样人员,以要防止病原外泄,还要防止样
8、品受到污染。 Bq0 T 0, 8、样品包装。主要是密闭,防止样品损坏、污染和外泄等意外发生。 h 3、血清学检验样品。用作血清学检验的样品不加抗凝剂或脱纤处理。为保障血清质量,一般情况下,空腹采血较好。采集的血液贴上标签,室温静置待凝固后送实验室,并尽快将自然析出的血清或经离心分离出的血清吸出,按需要分装,再贴上标签冷藏保存备检。较长时间才检验的,应冻结保存,但不能反复冻融,否则抗体效价下降。作血清学检验的血液,在采血、运送、分离血清过程中,应避免溶血,以免影响检验结果。采集双份血清检测比较抗体效价变化的,第一份血清采于发病的初期并作冻结保存,第二份血清采于第一份血清后34周,双份血清同时送
9、实验室。 4、寄生虫检验样品。因不同的血液寄生虫在血液中出现的时机及部位各不相同,因此需要根据各种血液寄生虫病的特点,取相应时机及部位的血液制成血涂片,送实验室。 rIb+c=|F 三、组织样品的采集 7#8Gn=g 组织样品一般由扑杀动物或病死尸体剖中采集。从尸体采样时,先剥去动物胸腹部皮肤,以无菌器械将腹腔打开,根据检验目的和生前疫病的初步诊断,无菌采集不同的组织。 rGBzPu 1、病毒检验样品。作病毒检验的组织,必须以无菌技术采集,组织应分别放入灭菌的容器内并立即密封,贴上标签,放入冷藏容器立即送实验室。如果时间较长,可作冻结状态运送,也可将组织块浸泡在PH7.4左右的乳汉液或磷酸缓冲
10、肉汤保护液内,并按每毫升保护液加入青霉素、链霉素各1000IU,然后放入冷藏容器内送实验室。 %36xDn ? 2、细菌检验样品。供细菌检验的组织样品,应新鲜并以无菌技术采集。如遇尸体已经腐败,某些疫病的致病菌仍可采集于长骨或肋骨,从骨髓中分离细菌。采集的所有组织分别放入灭菌的容器内并立即密封,贴上标签,放入冷藏容器立即送实验室。 S0$|/Sr 四、粪便样品的采集 .UyE|t4 1、病毒检验样品。分离病毒的粪便必须新鲜。少量采集时,以灭菌的棉拭子从直肠深处或泄殖腔粘膜上蘸取粪便,并立即投入灭菌的试管内密封,或在试管内加入少量PH7.4的保护液再密封。贴上标签冷藏送实验室。 r8k(LW 2
11、、细菌检验样品。作细菌检验的粪便,最好在动物使用抗菌药物之前,从直肠或泄殖腔粘膜上采集,采样方法与供病毒检验的相同。可投入无菌缓冲盐水或肉汤的指形管内,贴上标签冷藏送实验室。 qA*B 3、寄生虫检验样品。粪便样品应选取新排出的或直接从直肠内采得,以保持虫体或虫体节片及虫卵的固有形态,一般寄生虫检验的粪便用量较多。采得的粪便以冷藏不冻结状态送实验室。 qT O6I5u e3MU6 第三节几种畜禽疫病的样品采集 Ts iJK 一、禽流感的样品采集、保存和运输 P$o-a 病毒主要在呼吸道粘膜细胞内增殖。 RNIXQns-=S (一)病禽 N(/)e 1、至少从5只濒死禽采集样品。样品包括:泄殖腔
12、拭子和气管拭子(置于缓冲液中)各5个(小珍禽可采集新鲜粪便);气管和肺的混样5个,肠管及内容物的混样5个;肝、脾、肾和脑等组织样品(不能混样)各5个。 ?vXgHDsT 采集方法:1)泄殖腔棉拭子:将棉拭子插入肛门并旋转,使粪便沾在拭子上,后放在运输缓冲液中。2)气管棉拭子:活鸡采样时,将棉拭子插入活鸡的气管内,轻轻擦拭气管壁并放入缓冲液中。死亡动物采气管样品时,可在肺和气管离体情况下进行采集,应将棉拭子插入较深部位用力擦拭,并按上述方法将棉拭子放在运输缓冲液中。3)粪便样品:可从活禽市场采取新鲜粪便,用棉拭子沾取粪便,并将采好的样品放在运输缓冲液中。 Dc9uq5l 2、分别采集至少10个病
13、鸡的血样(急性发病期血清)。采集10只病禽的血样,使用一次性采血器,心脏或翅静脉采血,每只禽采血样2ml3ml,经离心或自然析出血清后,将血清移到指形管中。封好口,贴好标签。不同禽只的血样不能混合。 Q PH=s (二)病死禽 MqmQ52HR 无发病禽时,可从死亡不久的病禽采样,采样要求同病禽。 AU84kV= 棉拭子单独放入容器,容器中盛放含有抗菌素的PH值为7.07.4的PBS液。抗生素的选择视当地情况而定,组织和气管拭子悬液中加入青霉素(20001UmL)、链霉素(2 mgmL)、庆大霉素(50gmL)、制霉菌素(100001UmL)。但粪便和泄殖腔拭子所用的抗生素浓度应提高5倍。加入抗生素后pH值应调至7.4。 &(F c .3m (三)样品的保存和运输 TbA O-d# 1、血样要单独存放,不能混合。 R|; BO:S1 2、样品应密封于塑料袋或瓶中,置于有制冷剂的容器中运输,容器必须密封,防止渗漏。 y3YKH( 新城疫病毒存在于病鸡所有器官、体液、分泌物和排泄物,以脑、脾和肺含毒量最高,骨髓含毒时间最长。 X2w)J?p
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