医学精品课件农药快速检测技术上传

1、农药残留快速检测技术2021/7/15 星期四1 一、国内农残快速检测的现状及意义 二、常用的农药残留快速检测方法 三、农残快速检测方法的介绍 四、农残快速检测方法的注意事项目录2021/7/15 星期四2（一）现状现状1：起步晚、意识淡薄、缺乏宣传。现状2：投入少、检测力量薄弱、缺乏有效的数据信息监管。 现状3：地区之间、部门之间、单位之间差异极大一、国内农残快速检测的现状及意义2021/7/15 星期四3（二）快速检测实施的必要性农残超标的主要原因： 一是生产者不严格按农药安全使用准则的要求进行生产,使用违禁农药或使用量和安全期掌握不好。 二是施药器具喷洒的均匀性欠佳,易导致局部给药超量所

2、致。 由于高毒、高残留的有机磷农药如：对硫磷、甲基对硫磷、乐果、氧乐果、敌敌畏及甲胺磷等占据了杀虫剂产量的70以上，并且其中70以上的中毒事故都是由有机磷农药引起的。一、国内农残快速检测的现状及意义2021/7/15 星期四4（二）农药残留快速检测技术的意义 农药残留快速检测技术是保障农产品质量安全的重要技术支撑。 农药残留快速检测技术在鲜活农产品现场监测、市场准入、进入口岸贸易、快速筛查等工作中发挥着越来越重要的作用。一、国内农残快速检测的现状及意义2021/7/15 星期四5生化检测生物检测化学比色酶抑制法免疫分析法发光菌检测法敏感家蝇检测法速测卡速测仪 主要为酶免疫法二、常用的农药残留快

3、速检测方法2021/7/15 星期四6方法检测对象国内外对比化学检测技术有机磷灵敏度低酶抑制检测技术有机磷和氨基甲酸酯国内假阳性、假阴性率高，几十余家生产厂商，多种速测卡，速测仪，GB/T 5009.199-2003;NY/T 448-2001国外 测定样品和农药种类有限，欧美作为普查农药残留和田间实地检测的基本手段；AOAC官方方法 964.17免疫分析法有机磷、氨基甲酸酯、硫代氨基甲酸酯类、有机氯类、三嗪类、拟除虫菊酯类和酰酯类等几十种农药国内研究活跃，但未有整正推广使用的商品化产品国外技术成熟，灵敏度高，FAO推荐方法，美国USAD、EPA、AOAC制定了评定标准，但经认证的有限，经EP

4、A认证的免疫试剂盒约有4个厂家的26种试剂盒；EPA方法4010、EPA方法 4015 EPA方法3030等生物传感器有机磷、氨基甲酸酯国内处于研究阶段 国外电导型生物传感器、光寻址电位型传感器、安培型传感器，处于研究和应用阶段，并未广泛推广使用2021/7/15 星期四7GB/T 5009.199-2003蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测NY/T 448-2001蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法二、我国的农药残留快速检测方法2021/7/15 星期四8小知识 依据中华人民共和国标准化法的规定，按照适用范围将我国的标准划分为国家标准、行业标准、地方标准和企业标准4个

5、层次。 二、我国的农药残留快速检测方法2021/7/15 星期四9国标和行标方法比较国标方法行标方法标准编号GB/T 5009.199-2003NY/T 448-2001适用范围原理酶抑制原理比色波长412nm4103nm取样方法去掉泥土，剪成1cm见方不锈钢管取样器叶片：至少8-10片果菜：从表皮至果肉1-1.5cm处取样量1g叶菜类2g非叶菜类4g有机磷和氨基甲酸酯类农药全部部分2021/7/15 星期四10国标和行标方法比较国标方法行标方法缓冲液pH8磷酸缓冲液5mLpH8磷酸缓冲液20mL酶乙酰胆碱酷酶0.1mL丁酰胆碱醋酶50uL显色剂二硫代二硝基苯甲酸和碳酸氢钠0.1mL二硫代二硝

6、基苯甲酸50uL底物硫代乙酰胆碱0.1mL碘化硫代丁酰胆碱50uL2021/7/15 星期四11国标和行标方法比较国标方法行标方法提取时间1-2min需提取液的量2.5mL3mL培养温度3737-38培养时间至少15min30min结果判定抑制率50%为合格抑制率70%为合格2021/7/15 星期四12三、方法介绍 本标准适用于蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速筛选测定。（一）适用范围（以GB/T5009.199-2003中酶抑制率法为例）2021/7/15 星期四13有机磷或氨基甲酸酯类农药乙酰胆碱显色剂黄色物质温度、pH、胆碱酯酶等一定条件胆碱乙酰+三、方法介绍（以GB/T500

7、9.199-2003中酶抑制率法为例）水解412nm测定一定时间内的吸光度（二）原理2021/7/15 星期四14原理：在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，抑制率与农药浓度成正相关关系。正常情况下，酶（胆碱酯酶）催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用农药残毒速测仪于412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率判断样品中是否存在有机磷或氨基甲酸酯类农药残留。三、方法介绍2021/7/15 星期四15三、方法介绍GDYN-308S农药残留速测仪提取瓶（三）仪器配套箱超声提取仪2021/7/15 星期四16移液

8、器电子台秤不锈钢取样器三、方法介绍搅拌棒比色瓶2021/7/15 星期四17结果判定样品测量样品处理空白测量（ 四）实验流程（以小天鹅GDYN-308S农药残留速测仪为例）试剂配制样品处理空白测量样品处理空白测量样品处理空白测量样品测量样品处理空白测量样品测量样品处理空白测量空白测量空白测量空白测量样品处理空白测量样品处理空白测量样品处理样品测量空白测量样品处理样品测量空白测量样品处理三、方法介绍2021/7/15 星期四181、试剂配制农残试剂配制方法 农残试剂（一）： 取塑料方瓶，将一包固体+500mL蒸馏水。 农残试剂（二）： 一支真空玻璃瓶（5mL）转移至标有农残试剂二的塑料瓶中。 农

9、残试剂（三）： 一支塑料管（试剂三）加入到25mL农残试剂（一），混匀。 农残试剂（四）： 一支塑料管（试剂四）加入到25mL蒸馏水，混匀。 实验用水：去离子水、蒸馏水或者纯净水三、方法介绍2021/7/15 星期四19 农残试剂（二）、（三）、（四）必须在冰箱0 4中避光保存，且从冰箱中取出后，其温度必须达到室温后方可使用。采用双重保护技术，酶试剂在04下保质期为1年，在室温下保质期为15天。三、方法介绍2021/7/15 星期四202、空白测量 比色瓶中+（一）1.00ml +（二） 50l +（三）50l，摇 匀，放入第一通道中，计时3分钟（手动）按向上键。 加入试剂（四）50l， 倒计

10、时3分钟（自动） ， 仪器显示A值，空白测量完毕。 要求A大于0.100。若小于则增加（二）用量或者增加显色时间。 三、方法介绍2021/7/15 星期四213、样品处理 样品提取瓶+2.0克待测样品+10.0ml（一）。 超声提取3分钟，取出。 三、方法介绍2021/7/15 星期四22（1）样品处理: 选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，对于叶菜（如菠菜、油菜、白菜等）样品，将叶片部分（包括茎部）切成1cm左右见方碎片；对于果实蔬菜（如黄瓜、豆角等）样品，用水果刀顺皮削下一片，然后切成1cm左右见方碎片。三、方法介绍2021/7/15 星期四23辛辣样品的处理： 选取有代表性的蔬菜样品

11、，冲洗掉表面泥土，对于叶菜（如韭菜、韭黄、大葱等）样品，将叶片部分切成2cm左右长的小段；对于辣椒、生姜等样品，将可食部分切成1cm左右见方碎片，对于大蒜，将蒜扒皮后整瓣提取。三、方法介绍2021/7/15 星期四24（2）样品提取 用电子台秤称取2.0g样品于提取瓶中，用移液器加入10.0ml农残试剂一，用搅拌棒将样品压入页面下。然后将提取瓶放入超声提取仪中提取3min（在超声提取仪中预先加入500ml蒸馏水）。用移液器移取1.00ml样品提取液于比色瓶中，至于多功能固定架上备用。三、方法介绍2021/7/15 星期四25辛辣样品的提取： 用电子台秤称取2.0g样品（大蒜取2瓣）于提取瓶中，

12、用移液器加入10.0ml农残试剂一，再加入50微升辛辣物质干扰专用消除试剂，用搅拌棒将样品压入页面下，将样品提取瓶置于比色瓶固定架上静置5min，提取液用滤纸过滤于干净并干燥的玻璃提取瓶中，弃去几滴初滤液后再滤出5ml以上，将盛有滤液的玻璃提取瓶放入沸水浴（水浴锅）中加热5min，取出冷却至室温后作为待测液。用移液器移取待测液1.00ml于比色瓶中。三、方法介绍2021/7/15 星期四26（3）、样品测量 比色瓶中+待测液1.00ml +（二） 50l +（三）50l 摇匀，放入仪器中，按向下键。 倒计时10分钟（自动） 加入（四） 50l ，放回仪器中，按继续健。 倒计时3分钟（自动）。

13、仪器显示测量的结果抑制率。 （国标限量为50）。 三、方法介绍2021/7/15 星期四27（4）、结果判定按国标（GB/T5009.199-2003） 抑制率 50时，结果为阳性。 （含有有机磷或氨基甲酸酯类农药） 此结果若出现2次以上，上报有关部门进行处理。 三、方法介绍2021/7/15 星期四28（五）、干扰及解决办法 含有植物次生物质： 葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番 茄汁液对酶有影响，容易产生假阳性。 含色素较高浓度的蔬菜： 桔子、豆角、黄瓜等含有的色素，对比色测定有影响。 解决办法：可采取整株（体）浸提，以刚好浸没为准。三、方法介绍2021/7/15 星期四29（六）结果表述1、结果计算三、方法介绍2021/7/15 星期四30按国标（GB/T5009.199-2003） 抑制率 50时，结果为阳性。 （含有有机磷或氨基甲酸酯类农药） 此结果若出现2次以上，上报有关部门进行处理。 2、结果判定 结果以酶被抑制的程度(抑制率)表示。三、方法介绍2021/7/15 星期四31四、注意事项1.样品放置时间应与空白对照溶液放置时间一致才有可比性。2、阳性结果的样品需要重复检验2次以上。3、对阳性结果的样品，可用其他方法进一步确定具体农药品种和含量。4、标准NY/T 4482001使用的丁酰胆碱酯酶对甲基对硫磷、乐果、毒死蜱、二嗪磷