第三章 工业发酵菌种(共17页)

1、PAGE PAGE 26发酵(f jio)工业微生物菌种微生物发酵工业是利用微生物的生长和代谢活动生产各种有用物质的现代工业，它是以培养微生物进行发酵为主。而在这个过程中，优良的菌种是一个现代化的发酵工业必不可少的，最为重要的环节(hunji)。其他如先进的生产工艺和先进的设备，则是为了更充分发挥优良菌种的性能而设计的。第一节 工业(gngy)微生物菌种的分离和选育第二节 工业微生物菌种的改良第三节 发酵工业中菌种的退化第四节 工业微生物菌种的保藏第五节 工业微生物菌种的扩大培养第一节 工业微生物菌种的分离和选育 一般来说，从自然界直接分离到的菌种，不能立即适应实际的生产需要，只有通过选育，才

2、能提高代谢产物的产量、改进产品质量直至简化工艺。在微生物发酵工业中生产菌种的选育方法有： 微生物菌种的分离和选育 菌种的改良第一节 工业微生物菌种的分离和选育 一、微生物菌种的选育 二、微生物常规育种 三、根据代谢的调节机理选择高产突变菌株一、微生物菌种的选育 从自然界分离新菌种一般包括以下几个步骤：1、采样2、增殖培养3、纯种分离4、性能测定1、采样 采样地点的确定要根据筛选的目的、微生物的分布概况及菌种的主要特征与外界环境关系等，进行综合、具体地分析来决定。如果不了解某种生产菌的具体来源，一般可以从土壤中分离。、确定(qudng)选好地点 取离地面(dmin)515cm处的土壤(trng)

3、几十克，盛入预先消毒好的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，记录采样时间、地点、环境情况等，以备查考。 、尽快分离 一般土壤中芽孢杆菌、放线菌和霉菌孢子忍耐不良环境能力较强，不太容易死亡。但一般应尽快分离。 、酵母菌或霉菌类微生物采样 酵母菌或霉菌类微生物，它们对碳水化合物的需要量比较多，一般又喜欢偏酸环境，所以在普通植物花朵、瓜果种子及腐植质等上面比较多。2、增殖培养 收集到的样品，如含有所需的菌种较多，可直接进行分离。如果样品含有所需要的菌种很少，就要设法增加该菌种的数量，进行增殖（富集）培养。 富集培养：富集培养就是指利用不同微生物之间的生命活动特点的不同，制定出特定的环境条件，使仅仅适应于这种条

4、件的微生物旺盛生长，从而使其在群落中的数量大大增加的微生物的分离方法。人们能够利用这种方法很容易地从自然界中分离到所需要的特定微生物。富集的条件可根据所需分离的微生物特点从物理、化学、生物及综合多个方面进行选择，如温度、紫外线、高压、光照、氧气、营养等许多方面。3、纯种分离 通过增殖培养还不能得到微生物单一的纯种，有必要进行分离纯化，来获得纯种。这是因为生产菌种在自然条件下通常是与各种菌混杂在一起的。纯种的分离方法很多，常用的有划线法和稀释法。划线法、划线法是将含有菌样的样品在固体培养基表面作有规则的划线培养。 扇形划线法、 方格划线法 平行划线法等 菌样经过多次从点到线的稀释，最后经培养得到

5、单菌落。稀释(xsh)法。是通过不断(bdun)地稀释使被分离的样品分散到最低限度，然后吸取一定量注入平板，使每一微生物都远离其他微生物而单独生长成为菌落，从而得到纯种、两种方法(fngf)的比较、两种方法的比较划线法简单较快； 稀释法在培养基上分离的菌落单一均匀，获得纯种的机率大，特别适宜于分离具有蔓延性的微生物。为了提高筛选的工作效率，除增殖培养时应控制增殖条件外，在纯种分离时，培养条件对筛选结果影响也很大，一般可通过：控制营养成分调节培养基PH添加抑制剂改变培养温度通气条件热处理等来提高筛选效率。4、生产性能的测定、初筛、复筛由于纯种分离后，得到的菌株数量非常大，如果对每一菌株都作全面或

6、精确的性能测定，工作量就特别繁杂。因此可适当简化，一般采用两步法经过多次重复筛选，直至获得13株较好的菌株，供发酵条件的摸索和生产试验，进而作为育种的出发菌株。这种直接从自然界分离得到的菌株称为野生型菌株。以区别于用人工育种方法得到的变异菌株。一、微生物菌种的选育 二、微生物常规育种 三、根据代谢的调节机理选择高产突变菌株二、微生物常规(chnggu)育种一）、微生物诱变(yu bin)育种的机理 1、突变(tbin)的概念 2、诱变育种的主要环节 3、诱变育种的优缺点1、突变的概念微生物中可遗传的特性发生的变化称为变异，也叫突变。这种突变是微生物产生变种的根源，同时也是育种的基础。根据突变发

7、生的原因可以分为1）、自然突变自然突变是指在自然条件下出现的基因突变。 2）、诱发突变诱发突变是指用各种物理和化学因素人为地使诱变对象细胞内的遗传物质发生变化。人工诱变能提高突变频率和扩大变异谱，它的缺点则是缺乏定向性。2、诱变育种的主要环节、处理悬浮液 用合适的诱变剂处理大量而分散的微生物细胞悬浮液（细胞或孢子），在引起绝大多数的细胞致死的同时，使存活个体中DNA结构变异频率大幅度提高；、选育优良菌株 用合适的方法淘汰负效应变异株，选出极少数性能较优良的正变异株，以达到培育优良菌株的目的。3、诱变育种的优缺点1）、优点（1）、菌种的特性方面、提高菌株的生产能力；、改进产品的质量；、 扩大品种

8、；、简化工艺。（2）、育种的方法方面、速度快；、收效显著；、方法简便 由于上述特点，在育种工作和生产实践中都得到了广泛的应用。 目前，发酵工业中的生产菌，绝大部分都是经过诱变的改良菌种。2）、缺点、诱变育种缺乏定向性；、工作量大；、诱变因素对某些菌种的作用(zuyng)不明显；、对已是高产(o chn)菌株进一步要提高产量仍较困难。三）、诱变育种程序(chngx)的要点1、出发菌株的选择、从自然界分离得到野生型菌株；、通过生产选育的菌株； (即由自发突变经筛选得到的菌株)、已经诱变过的菌株。 (这类菌株作为出发菌株较为复杂)2、菌悬液制备要求、一般采用生理状态一致的单细胞或 孢子进行诱变处理；

9、 （用选择法或诱导法使微生物同步生长）、一般处理细菌的营养细胞；(采用生长旺盛的对数期，变异率较高而且重现性好)、一般处理霉菌的孢子悬浮液；(因为霉菌的菌株往往是多核)、一般处理刚刚成熟时的放线菌孢子 (此时的变异率比较高)、细菌和放线菌的处理浓度为108个/ml; 真菌的处理浓度为106个/ml.3、前培养一般在诱变处理前，将细胞在添加有嘌呤、嘧啶等碱基的培养基中培养2060分钟，再进行诱变处理，效果很好。4、诱变剂的选择 能诱发基因突变并使突变率提高到超过自然突变水平的物理、化学因子都称为诱变剂 物理诱变剂 化学诱变剂、物理诱变剂主要有各种射线，如X射线、-射线、射线、射线和超声波等。其中

10、紫外线应用最广。 因为紫外线的光谱正好与细胞内的核酸的吸收光谱相一致，因此在紫外光的作用下，能使DNA链断裂、DNA分子内和分子间发生交联，从而导致菌体的遗传性状发生改变。、化学诱变剂化学诱变剂的种类非常的多，常用的有 甲基磺酸乙酯（EMS） 亚硝基胍亚硝酸等 它们作用于微生物细胞后，能够特异地与某些基团起作用，即引起遗传物质的原发性损伤和细胞代谢方式的改变，失去亲株原有的特性(txng)。并建立新的性状。5、变异菌株的分离(fnl)和筛选 通过诱变处理后，在微生物群体中会出现各种突变型的个体，但其中多数是负突变体。因此要全力(qunl)选出适合人们需要的优良菌株，一般分为初筛、复筛两个阶段。

11、初筛以量为主，复筛以质为主。 1） 、初筛方法 、根据形态变异淘汰低产菌株 某些菌落形态与生产性能有直接的相关性，可以在平皿上直接筛选。 如在灰黄霉素生产菌的选育中，菌落暗红色变深者的，产量就提高。由此做为指标性状可以直接筛选。、根据平皿反应直接挑取高产菌株所谓平皿直接反应就是指每个菌落产生的代谢产物与培养基内的指示物作用后的变色圈或 透明圈等，可以表示菌株的生产活力的高低，因此，可以作为初筛的标志性状。2）、复筛方法营养缺陷型的筛选方法、营养缺陷型筛选、淘汰野生型菌株、营养缺陷型菌株检出几个重要的概念 a、基本培养基 b、完全培养基 c、补充培养基 d、野生型 e、营养缺陷型 f、原养型a、

12、基本培养基 (MM minmimal medium) 仅能满足某种微生物的野生型菌株生长需要的 最低成分组合培养基，又称为基本培养基。用符号表示。 b、完全培养基 (CM，complete medium) 凡是可以满足一切营养缺陷型菌株营养需要的天然或半组合培养基。用符号+表示。c、补充培养基 (SM，supplementa medium) 凡是只能满足相应的营养缺陷型生长(shngzhng)需要的组合培养基。用符号A 或B表示。d、野生型 从自然界分离到任何微生物在其发生营养(yngyng)缺陷突变前的原始菌株。e、营养(yngyng)缺陷型 野生型菌株经诱变处理后，由于发生了丧失某种酶合成

13、能力的基因突变类型，这种类型称为营养缺陷型。只能在加有该酶合成产物的培养基中才能生长。f、原养型 一般指营养缺陷型突变株经修复（回变）或重组后产生的菌株类型。其营养要求与野生型相同。、营养缺陷型筛选诱变经过中间培养淘汰野生型检出营养缺陷型确定生长谱等步骤中间培养的目的是减少以后筛选中再产生分离子，其培养基用完全培养基或补充培养基，并且培养过夜。、淘汰野生型菌株 在诱变后的存活个体中，营养缺陷型的比例一般较低，通常只有百分之几至千分之几。通过抗生素法或菌丝过滤法就可以淘汰为数众多的野生型菌株，从而达到“浓缩”营养缺陷型的目的。抗生素法菌丝过滤法差别杀菌法饥饿法等如果当诱变后的缺陷型数量较大时，也

14、可省去中间培养法和影印接种法。以便得到浓缩的缺陷型菌株。抗生素法 A、青霉素法主要适用于细菌。其原理是青霉素能抑制细菌细胞壁的生物合成，因而能杀死生长繁殖着的细菌，但不能杀死休眠状态的细菌。如果将诱变后的细菌培养在含有青霉素的基本培养基中，就可淘汰大部分生长繁殖活跃的野生型细胞，从而达到“浓缩”营养缺陷型细胞的目的。 B、制霉菌素法 适合于真菌。制霉菌素可与真菌细胞膜上的甾醇作用，从而引起细胞膜的损伤。因为它只能(zh nn)杀死生长繁殖着的酵母或霉菌，所以也可用于淘汰相应的野生型菌株和“浓缩(nn su)”营养(yngyng)缺陷型菌株。菌丝过滤法 菌丝过滤法是利用在基本培养基中，野生型的孢

15、子能发芽成菌丝，而营养缺陷型的孢子则不能原理进行筛选的方法。适合于丝状生长的真菌或放线菌。将诱变后的孢子在基本培养基中培养一段后，再用擦镜纸等合适的滤纸过滤，就可去除大部分的野生型个体，从而达到“浓缩”目的。、营养缺陷型的检出检出营养缺陷型的方法很多 A. 夹层培养法 B. 限量补充培养法 C. 逐个检出法 D. 影印接种法经过了平皿初筛、确定了营养缺陷型或其他标记的变异性状 进行发酵试验，检查其生产性状 经过生长性状比较，再做平行试验比较，并结合生产的其他因素考虑，就可确定用于生产或进一步改良的诱变菌株，进行保藏或扩大试验，直至用于生产。三、根据代谢的调节机理选择高产突变株 一）、微生物代谢

16、调节的主要途径 二）、育种方法一）、微生物代谢调节的主要途径1、酶合成诱导2、酶合成阻遏3、酶活力的调节二）、育种方法1、选育不需要诱导物的组成型产生菌2、筛选抗反馈阻遏和抗反馈抑制突变株3、选育营养缺陷型4、筛选负突变菌株的回复突变株5、选育条件抗性突变株6、筛选细胞膜通透性改变的突变株7、筛选(shixun)抗生素抗性突变株1、选育不需要(xyo)诱导物的组成型产生菌 通过诱变，使调节基因发生(fshng)突变，不产生有活性的阻遏蛋白，或者操纵基因发生突变不再能与阻遏物相结合，就可获得组成型的突变株。2、筛选抗反馈阻遏和抗反馈抑制 突变株 如调节基因发生突变，使产生的阻遏蛋白 失活，不能与

17、末端代谢产物结合，或操纵基因发生突变，使阻遏蛋白不能与其结合，都能获得抗反馈阻遏的突变株。如使调节酶突变，则可以获得抗反馈抑制的突变株。3、选育营养缺陷型 筛选丧失了代谢途径中的一种或多种酶，因而必须供给某一个或几个中间代谢产物才能生长的突变株。限量供给此中间代谢产物就能 降低或解除末端产物的反馈 控制。4、筛选负突变菌株的回复突变株 诱变产生的高产菌株，在生产过程中易发生回复突变，使产量不稳定。但是负突变菌株的回复突变株也可用 来 提高代谢产物的过量产生。 5、选育条件抗性突变株 有些 突变株，在不同的环境下，能表现为“野生型”和突变型的菌株特性，称为条件抗性突变或称为条件致死突变，其中温度

18、敏感性突变常用于提高代谢产物产量。6、筛选细胞膜通透性改变的突变株 微生物细胞内终产物及时移去，也是消除反馈控制的一种手段。细胞膜和细胞壁的结构是影响物质进出的原因之一。如筛选细胞膜、细胞壁组成成分改变的突变株，有可能获得代谢产物的过量生产，这在分泌抗生素大分子上更有意义。7、筛选抗生素抗性突变株 各种抗生素抑制微生物的机制各不相同，当出现某种抗生素抗性突变体，也能取得由此而改变代谢调节，获得过量生产的结果。 抗生素的突变株对抗生素产生菌尤为重要，因为一株高产菌株必然应具备对自身所分泌的抗生素的抗性。第二节 工业微生物菌种的改良 一般来说，按照微生物菌种分离的方法筛选出来的菌种，往往还不能完全

19、符合工业生产的要求，如产量低、副产物多、生长周期长等，因而不能仅停留在“选”种上，还要进行微生物菌种的“育”种上。一、 原生质体融合技术原生质体融合(rngh)技术是1974年首先用于植物细胞，此后才用于微生物。这是一种更为有效的微生物育种方法。1、原生质体所谓的原生质体是指用酶学方法使细胞的细胞壁溶解后释放出来的只有半透性胞质膜包裹着的球状体，它们虽然没有了细胞壁，但仍然(rngrn)具备和完整细胞基本相同的生理、生化和遗传学特性，并且在合适的条件下能再生细胞壁，回复成为一个完整的细胞。2、原生质体技术进行菌种改良(giling)具有的优越性、消除了遗传物质交换的障碍、出现多种类型的重组型、

20、融合重组的频率特别高、便于结合其他良种技术、提高筛选效率、推进育种工作的进程、消除了遗传物质交换的障碍遗传物质交换没有了细胞壁的障碍，如直接用诱变剂处理，诱变效率比较高，特别是对那些对诱变剂作用反应迟钝的微生物。、出现多种类型的重组型 原生质体融合后两亲株的基因组之间有机会发生多次交换，产生各种各样的基因组合而得到多种类型的重组子，参与融合的亲株数并不限于两个，可以多至三个、四个，这是一般常规杂交所达不到的。、融合重组的频率特别高其杂交频率明显高于常规杂交方法。已知霉菌、放线菌的融合频率为103101，细菌、酵母菌的融合频率为103106。融合亲株甚至可以不必携带遗传标记，就可以在融合后的再生

21、菌落中直接筛选重组子。、便于和其他育种技术的结合原生质体融合技术可以和其他育种技术相结合。用其他方法获得的较优菌种作为亲株，在通过原生质体融合把它们的优良性状组合到一个单株上，以得到包含多种优良性状的最优菌株。、提高筛选效率采用温度、化学试剂或紫外线等处理方法钝化一方亲株的原生质体，然后再与另一亲株的活原生质体融合，因此，就可以(ky)在筛选中除去一方亲株，从而提高筛选效率。、推进育种工作(gngzu)的进程由于原生质体已经失去了细胞壁，较完整细胞更易于进行遗传转化。目前，一些有重要工业价值的微生物如放线菌、酵母菌和霉菌等的转化体系(tx)多末建立，强采用原生质体转化，就有可能将这些菌株作为基

22、因工程的受体菌，使工业微生物的育种工作大大前进一步。3、原生质体融合的方法标记菌株的筛选 原生质体的制备 融合 再生 融合子的选择 实用性菌株的筛选二、 体外重组DNA(基因工程) 基因工程是指用人为的方法将供体细胞的DNA提取出来，在离体条件下进行切割，有目的的选取需要的DNA片段，把它和作为载体的DNA分子连接起来，然后导入受体细胞内，通过转座子的作用，使需要的基因片段跳入供体细胞的染色体中，让外来的遗传物质在其中进行正常的复制和表达。由此看来，基因工程是菌种选育更有效的手段。生物工程生物工程就是生物技术。也可理解为生物工程为生物机体、生物系统或生物加工过程在制造业和服务性行业中的应用技术

23、。生物工程实际上是一种放大了的生物过程。生物工程包括四个组成部分、基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程生物工程发展的阶段原始(yunsh)的生物工程、近代(jndi)生物工程、现代(xindi)生物工程第三节 发酵工业中有关菌种的退化问题 一、菌种退化概念 二、菌种退化原因 三、菌种退化的防治一、菌种退化的概念菌种退化就是指随时间的推移，菌种的一个或多个特性逐步减退或消失的现象。一般表现为：1、菌株的生活力下降；2、产孢子的能力的衰退3、目的产物产量的下降。二、菌种退化原因菌种的退化是由于微生物细胞内的DNA结构发生了变化，从而使由DNA决定的性状发生了相应的变化。菌种的退化的原因可归结为内因

24、和外因两个方面。即自身变化和环境影响。1、菌系不纯引起的退化如果既有正常菌株，也有产量高产孢弱的菌株，还有产孢高而产量低的菌株，经过连续分离高产菌株后，有时使产量高产孢弱的菌株占优势。2、由于不纯的异核菌丝的分裂，致使产量降低，表现出退化。3、菌种自身变异引起的退化菌种的自发突变和回复突变是菌种自身退化的主要原因。微生物细胞在每一世代中的突变机率一般为108109，保藏在04时，这一突变机率更小，但仍然不能排除菌种退化的可能，诸如对营养缺陷型菌种未供给充足的针对缺陷的营养物质，菌种就会发生突变而更新丧失已有的特性。4、变异造成的代谢失调导致的退化主流代谢产物的支路代谢而导致细胞活力的减弱或使产

25、孢子能力逐代减退。5、菌种保藏不当引起的菌种的退化菌种的保藏主要是通过控制低温、干燥、缺氧等条件，使微生物营养体或休眠体处于不活泼的状态，维持最低代谢水平，尽可能保证活力和不发生变异。但是，各种菌种的保藏法对阻止菌种变异的效果不尽相同，用效果较差的条件保藏菌种时，菌种就较易发生退化。另外，保藏操作不当也会影响保藏的效果，会影响到菌种的变异。 三、菌种退化的防治由于菌种的退化将会引起发酵过程的产量急剧下降，一旦发生菌种退化，就必须采取有效的预防和防治措施，防止菌种的优良性状发生退化，同时若发现某些优良性状退化，就及时进行分离纯化，使生产(shngchn)菌种保持稳定的优良特性。防止菌种退化的措施

26、主要有：1、退化(tuhu)菌种的复壮菌种的复壮是指已经退化的菌种中衰退的个体，使其恢复到原来的优良(yuling)的特性的过程。、配合一定的培养条件，对退化菌株进行单菌落或单细胞分离，淘汰退化的个体，纯化菌种；、将芽孢杆菌的悬液加热至90处理数分钟，杀灭已退化的菌体，保留芽孢；再将芽孢或孢子进行传代，以淘汰退化的个体。、提供特殊的培养条件，使环境有利于优良性状菌株的生长而不利于退化菌株的生长，从而淘汰已退化的菌株个体。、将分离后得到的初筛菌株先保藏，再进行得利考察，从中选出稳定性较好的菌株。、同时应用上述方法的两种或两种以上的方法，会收到更好的复壮效果。2、提供良好的环境条件、进行合理传代

27、进行合理传代、减少传代次数可以防止由于菌种的遗传稳定性变化而引起的自发突变，以及由于环境条件的变化导致的退化。、一般只用三代内的菌种 一般菌种允许使用的传代次数必须通过传代的稳定性试验确定。发酵生产上一般只用三代内的菌种。3、采用优良的保藏方法、斜面冰箱保藏法、砂土管保藏法、真空冷冻干燥保藏法、干孢子保藏法4、定期纯化菌种定期纯化菌种，可以减少其中共存的自发突变菌或“突变不完全”产生的退化型菌株的增殖机会，保持原来的优良特性。比如对营养缺陷型菌种在纯化过程中提供足够的营养物质，以保持菌株的优势，避免回复突变体的竞争。同样在进行抗性突变的菌种纯化时在培养基中加入对应于抗性的药物，可保持菌株的抗性

28、优势，避免产生无抗性的回复突变体。第四节 工业(gngy)微生物菌种的保藏一、斜面(ximin)保藏法和穿刺保藏法二、干燥(gnzo)保藏法三、悬液保藏法四、冷冻干燥保藏法五、液氮保藏法六、低温保藏法第五节 工业微生物菌种的扩大培养一、微生物培养方法1、表面培养表面培养是将纯种微生物接种在固体或液体培养基的表面，在恒温条件下进行静置培养的方法。如实验室中进行里的固体斜面培养、固体平板培养都是表面培养；进行液体培养时，若细胞在液面生长繁殖，形成一层膜状物，也为表面培养。表面培养的特点是生长在培养基表面上的微生物既与空气接触吸收氧气，又能与培养基接触吸收营养。但是由于表面培养迫于自然培养，因此存在

29、生长缓慢，占用面积大，容易染菌等缺点，在大规模工业生产中很少采用，仅在实验室或小试中用得较多。2、固体培养固体培养法是将纯种微生物接种在固体培养基上进行培养的方法。3、液体深层培养液体深层培养又叫液体通风培养。菌体在液体培养基中处于悬浮状态，导入培养基中的空气通过气液界面进入液相，再扩散进入细胞内部。液体深层培养是在专门的发酵罐中进行的。它的优点是可以根据微生物在生长过程中对碳源、氮源、生长因子等营养物质及温度、PH值、需要氧量等条件的不同需要，合理配制，补加各种营养物质和随时调节温度、PH值和通风量，这就有可能把微生物培养过程的生长，代谢都控制在最佳状态而收到最好的培养效果。 二、菌种的扩大

30、培养现代发酵工业生产的规模越来越大，菌种的扩大培养就是要为工业发酵提供数量巨大、代谢旺盛的微生物种子，具体是指将保存在砂土管或冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种拉入试管斜面活化后，再经过摇瓶及种子罐逐级扩大培养，从而获得一定数量和质量的纯种。这些纯种培养物就是称为的种子。 要求这种纯培养物或种子的必须具备下面几个特点1、生命旺盛有活力，移入到发酵罐后能迅速生长，缩短延迟期；2、菌体总量适宜，以保证在大发酵罐中有适当的接种量；3、生理状态稳定；4、无杂菌；5、保持稳定的生产能力(shn chn nn l)。二、菌种的扩大(kud)培养1、种子(zhng zi)制备的工艺流程1）、步骤16为实验室

31、种子制备阶段。包括琼脂斜面、固体培养基扩大培养基或摇瓶液体培养； 2）、步骤79为生产车间种子制备阶段。目前国内发酵罐工业中菌种的扩大培养，一般都是采用二级种子培养流程。各步种子培养过程中所有的培养基成分大致是相同的，只是组份的比例略有不同。种子培养基主要是为了供给菌体生长、繁殖所需要的营养和能量，发酵大罐的培养基除了上述之外，还需要形成发酵产物所必需的物质，因此其碳源和氮源的量往往大大高于种子培养基中所含的配比量。2、斜面菌种的培养斜面菌种的培养是工业发酵工艺中的重要环节，操作必须严格认真，在无菌室内进行。菌种室必须经常打扫和灭菌以防止杂菌的污染。生产中使用的斜面菌种不宜多次移种，一般只移接三次，避免由于菌种的自然变异引起菌种不纯。因此，要经常进行菌种的分离纯化以不断提供新的斜面菌种供生产使用。每批斜面菌种培养完成后，要仔细观察菌苔的生长情况、菌苔的颜色和边缘等特征是否正常，有无感染杂菌的征象。如菌种质量有问题则应坚决不用。3、一级种子的培养一级种子的培养通常用三角瓶进行液体恒温振荡，也称摇瓶。三角瓶中的菌种由斜面培养的种子接入。有些工厂在某些发酵产品的生产中，如谷氨酸生产，一级种子培养不用三角瓶摇瓶，而是培养大型斜面（茄子瓶斜面）作为一级种子使用。4、二级种子的培养二级种子培养使用种子罐。种子罐的大小需要根据发酵产品和发酵罐的容积配套确定，如谷氨酸的种子罐容积一般按