生物药物分析试验课讲义

1、实验胃蛋白酶片的测定实验目的：掌握以胃蛋白酶测定法测定胃蛋白酶片中胃蛋白酶的效价。实验原理：精密称取本品适量，加盐酸溶液制成每1mL中约含0.2-0.4个单位的溶液，照胃蛋白酶测定法，测定胃蛋白酶的效价。 实验部分： 1.材料与设备 血红蛋白试液、三氟醋酸溶液、盐酸溶液 紫外可见分光光度计 2.操作步骤 1).供试品溶液的制备取本品5片，置研钵中，加盐酸溶液少许，研磨均匀，移至 250mL量瓶中，加上述盐 酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密称取适量，用上述盐酸溶液稀释制成每1mL中约含0.2-0.4个单位的溶液，作为供试品溶液。 2).对照品溶液的制备精密称取酪氨酸对照品适量，加盐酸溶液稀释制成每1

2、mL中约含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。 3)供试品的测定取大小相同的试管 6支，其中3支精密加入对照品溶液 1mL,另3支精密加入供试品 溶液1mL,置37cM.5c水浴中，保温 5分钟，精密加入预热至 37C M.5c的血红蛋白试 液5mL,摇匀，并准确计时，在37cd0.5C水浴中反应10分钟，立即精密加入 5%三氟醋酸溶液5mL,摇匀，滤过，取续滤液备用。另取试管2支，各精密加入血红蛋白试液5mL,置37 C S.5C水浴中保温10分钟，再精密加入 5%三氟醋酸溶液5mL,其中一支加供试品 溶液1mL,另一支加上述盐酸溶液1mL,摇匀，滤过，取续滤液，分别作为供试品和对照品的空白对

3、照，照紫外-可见分光光度法，在275nm的波长处测定吸光度， 按下列公式计算， 即得。 注意事项： 思考题：实验三磷酸腺昔二钠片总核甘酸含量测定实验目的：掌握以胃蛋白酶测定法测定胃蛋白酶片中胃蛋白酶的效价。实验原理：精密称取本品适量，加盐酸溶液制成每1mL中约含0.2-0.4个单位的溶液，照胃蛋白酶测定法，测定胃蛋白酶的效价。 实验部分：.材料与设备血红蛋白试液、三氟醋酸溶液、盐酸溶液 紫外可见分光光度计.操作步骤.供试品溶液的制备取本品5片，置研钵中，加盐酸溶液少许，研磨均匀，移至 250mL量瓶中，加上述盐 酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密称取适量，用上述盐酸溶液稀释制成每1mL中约含0.2-

4、0.4个单位的溶液，作为供试品溶液。 2).对照品溶液的制备精密称取酪氨酸对照品适量，加盐酸溶液稀释制成每1mL中约含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。3）供试品的测定取大小相同的试管 6支，其中3支精密加入对照品溶液 1mL,另3支精密加入供试品 溶液1mL,置37cd0.5C水浴中，保温 5分钟，精密加入预热至 37C M.5c的血红蛋白试 液5mL,摇匀，并准确计时，在 37cd0.5C水浴中反应10分钟，立即精密加入 5%三氟醋 酸溶液5mL,摇匀，滤过，取续滤液备用。另取试管2支，各精密加入血红蛋白试液 5mL,置37 C S.5C水浴中保温10分钟，再精密加入 5%三氟醋酸溶液5m

5、L,其中一支加供试品 溶液1mL,另一支加上述盐酸溶液1mL,摇匀，滤过，取续滤液，分别作为供试品和对照品的空白对照，照紫外-可见分光光度法，在275nm的波长处测定吸光度， 按下列公式计算， 即得。 注意事项： 思考题：实验七药物的一般杂质检查一、实验目的：.掌握药物的一般杂质检查原理与实验方法。.熟悉一般杂质检查项目与意义。二、实验原理：药物的一般杂质：是指在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质，如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、神盐、铁盐、重金属等。.比色法（colorimetry） 是通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量 的方法。比浊法是指测量透

6、过悬浮质点介质的光强度来确定悬浮物质浓度的方法，本法主 要是用于测定能形成悬浮体的沉淀物质。a、酸碱度检查：是用药典规定的方法对药物中的酸度、碱度及酸碱度等酸碱性杂质进 行检查。检查时应以新沸并放冷至室温的水为溶剂。不溶于水的药物，可用中性乙醇等有机溶剂溶解。常用的方法有酸碱滴定法，指示剂法以及pH直测定法。b、氯化物检查法：氯化物在硝酸溶液中与硝酸银作用，生成氯化银沉淀而显白色浑浊，与一定量的标准氯化钠溶液和硝酸银在同样条件下用同法处理生成的氯化银浑浊程度相比 较，测定供试品中氯化物的限量。反应离子方程式：Cl-+ Ag + f AgCl J （白色）c、铁盐检查法：三价铁盐在硝酸酸性溶液中

7、与硫氟酸盐生成红色可溶性的硫氧酸铁络 离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色。反应离子方程式：Fe3+ + 3SCN- f Fe （ SCN 3 （红棕色）。.限量计算：杂质限量%=（V标准XC标7t）/W小） X 100%式中V标准为标准液体积，C标 准为标准液浓度， W羊为样品取样量。三、实验内容：.实验材料、设备：葡萄糖、氯化钠原料药。25ml、50mL纳氏比色管、刻度吸管、电子天平。.实验操作步骤：（一）葡萄糖1、酸度取本品2.0g ,加水20mL溶解后，加酚Mt指示液 3滴与氢氧化钠滴定液（0.02mol/L ） 0.20mL,应显粉红色。2、溶液的澄清度与颜色取本品5g,加热

8、水溶解后，放冷，用水稀释至10mL溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准?夜（附录 H）比较，不得更浓；如显色，与对照液（取比色用氯化钻液3mL、比色用重铭酸钾液 3mL与比色用硫酸铜液 6mL加水稀释成 50mL）1.0mL加水稀释至10mL 比较，不得更深。 3、乙醇溶液的澄清度取本品1.0g ,加90%!1 30mL,置水浴上加热回流约 10分钟，溶液应澄清。4、氯化物取本品0.6g ,加水溶解使成25mLi再加稀硝酸10mL;溶液如不澄清，应滤过；置 50mL 纳氏比色管中，加水使成约40mLi摇匀，即得供试溶液。另取标准氯化钠溶液6.0mL,置50mL纳氏比色管中，加稀硝酸 10m

9、L力口水使成40mL摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与 对照溶液中，分别加入硝酸银试液 1.0mL,用水稀释，使成50mL,摇匀，在暗处放置5分钟， 同置黑色背景上，从比色管上方向下观察、比较。供试溶液所显浑浊度不得较对照液更浓（0.01%）。5、干燥失重取本品，在105c干燥至恒重，减失重量不得过9.5%。6、硫酸盐取本品2.0g ,加水溶解使成约 40mL溶液如不澄清，应滤过；置50mL纳氏比色管中，加稀盐酸2mL摇匀，即得供试溶液。另取标准硫酸钾溶液2.0mL,置50mL纳氏比色管中，加水使成约40mL,力口稀盐酸2mLi摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加 入25%R化钢溶

10、液5mL用水稀释至 50mL充分摇匀，放置 10分钟，同置黑色背景上，从 比色管上方向下观察、比较。供试溶液所显浑浊度不得较对照液更浓（0.01%）。7、亚硫酸盐与可溶性淀粉取本品1.0g ,加水10mL溶解后，加碘试液 1滴，应即显黄色。8、铁盐取本品2.0g ,加水20mL溶解后，加硝酸3滴，缓缓煮沸5分钟，放冷，加水稀释使成 45mL加硫氟酸镂溶液（30-100） 3mL摇匀，如显色，与标准铁溶液2.0mL用同一方法制成的对照液比较，不得更深（0.001%）。 9、 蛋白质取本品1.0g,加水10ml溶解后，加磺基水杨酸溶液（1-5） 3ml,不得发生沉淀。（二）氯化钠杂质检查 1、溶液

11、的澄清度取本品5.0g,加水25ml溶解后，溶液应澄清。2、碘化物取本品的细粉 5.0g,置瓷蒸发皿内，滴加新配制的淀粉混合液适量使晶粉湿润，置日 光下（或日光灯下）观察， 5分钟内晶粒不得显蓝色痕迹。3、硫酸盐取本品5.0g,加水溶解成约40ml （溶解如显碱性，可滴加盐酸使成中性），溶液如不澄清，应滤过，置 50ml纳氏比色管中，加稀盐酸2ml,摇匀，即得供试溶液。另取标准硫酸钾溶液1.0ml置50ml纳氏比色管中，加水使成约 40ml,加稀盐酸2ml,摇匀，即得对照溶 液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入25%氯化钢溶液5ml,用水稀释使成 50ml,充分摇匀，放置10分钟，同置黑色背景

12、上，从比色管上方向下观察，比较，供试品管不得更浓 （0.002%）。4、根盐取本品4.0g,加水20ml,溶解后，滤过，滤液分为两等份，1份中加稀硫酸2ml,另一份中加水2ml,静置15分钟，两液应同样澄清。四、实验注意事项：1-比色管的正确使用一一选择配对的两支纳氏比色管，用清洁液荡洗除去污物，再用 水冲洗干净。采用旋摇的方法使管内液体混合均匀。2-平行操作一一标准与样品必须同时进行实验，加入试剂量等均应一致。观察时，两 管受光照的程度应一致，使光线从正面照入，比色时置白色背景上，比浊时置黑色背景上， 自上而下地观察。五、思考题中国药典（2000年版）在葡萄糖杂质检查中规定检查十二项，是根据

13、什么原则制订的？目的何在？重金属与神盐检查的原理是什么？如何计算其限量？5参考文献5.1葡萄糖：中国药典（2000年版）二部，第815页实验过氧化氢酶活性测定（高镒酸钾滴定法）一、实验目的掌握比色法测定过氧化物酶活性的原理和操作方法二、实验原理过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。过氧化氢酶（catalase属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。可根据H2O2的消耗量或。2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量 （反应过量）的过氧化氢溶液，经

14、酶促反应后，用标准高镒酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过 氧化氢。即可求出消耗的 H2O2的量。三、材料、仪器设备及试剂（一）材料：小麦叶片（二）仪器设备：1.研钵；2.三角瓶；3.酸式滴定管；4.恒温水浴；5.容量瓶。（三）试剂：10%H2SO4； 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；0.1mol/L高镒酸钾标准液（称：取 KMnO4 （AR） 3.1605g,用新煮沸冷却蒸储水配制成1000ml ,再用0.1mol/L草酸溶?标定）;4. 0.1mol/L H2O2市售 30%H2O2大约等于 17.6mol/L ,取 30%大。2溶液 5.68ml,稀释至 1000ml, 用标准

15、0.1mol/L KMnO 4溶液（在酸性条件下）进行标定；5. 0.1mol/L草酸：称取优级纯H2c2O42H2O 12.607g,用蒸储水溶解后，定容至 1000ml。三、实验步骤（一）酶液提取：取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，用同一缓冲液定容， 4000rpm离心15min ,上清液即为过氧化氢酶的粗提液。（二）取50ml三角瓶4个（两个测定，另两个为对照），测定瓶加入酶液 2.5ml,对照加 煮死酶液2.5ml,再加入2.5ml 0.1mol/L H 2O2,同时计时，于 30c恒温水

16、浴中保温 10min, 立即加入 10%H2SO42.5ml。用0.1mol/L KMnO 4标准溶液滴定，至出现粉红色（在 30min内不消失）为终点。四、结果处理酶活性用每g鲜重样品1min内分解H2O2的mg数表示：过氧化氢酶活性（H2O2mg/g/min ） = （ A-B ） VsX1.7 t）式中：A对口K KMnO 4滴定ml数；B酶反应后KMnO 4滴定ml数；Vt提取酶液总量（ml）;Vs反应时所用酶液量（ml）; W样品鲜重（g）; t反应时间（min）;1.71ml 0.1mol/L KMnO 4相当于 1.7mgH2O2。过氧化氢酶的活性测定：在植物体中，黄素氧化酶类的

17、代谢产物常包含H2O2,如光呼吸中的乙醇酸氧化酶、呼吸作用中的葡萄糖氧化酶、氨基酸氧化酶、醛氧化酶等。H2O2的积累可导致破坏性的氧化作用，而过氧化物酶和过氧化氢酶则可以清除H2O2,是植物体内重要的活性氧清除系统之一。其活性还与植物的抗逆性有密切关系， 本实验利用高镒酸钾滴定法测定过氧化氢酶活性。一、原理：过氧化氢酶属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，H 2O2则既是氧化剂，又是还原剂。R（Fe+2）+ H2O2=R（Fe+30H -）2R（Fe+3OH-） 2+ HzO2=R（Fe+2） 2+ 2H2。+。2合并上式：2H2O2=2H 2O

18、+ O2据此，可根据H2O2的消耗量或。2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高镒酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。5H2。2+ 2KMnO 4+ 4H2SO4f 5O2 + 2KHSO4+ 8H2O+ 2MnSO4即可求出消耗的 H2O2量。.3 一一 二、仪器和用具：研钵、三角瓶 50cm %、铁架、酸式滴定管、恒温水浴、容量瓶三、试剂：10%H2SO4； 0.2mol/l 磷酸缓冲液 pH7.8 ;0.1mol/L高镒酸钾标准液：3.1605gKMnO4 （AR）用新煮沸的蒸储水配制成1000mL,用0.1mol/L的

19、草酸溶液标定；0.1mol/LH 2O2：市售30%出。2大约等于17.6mol/L,取30%力。2溶液5.68mL稀释至1000mL,用标准0.1mol/l KMnO 4溶液（在酸性条件下）进行标定。四、方法：.酶液提取：取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，将研钵冲洗干净，冲洗液转移至容量瓶中，并用同一缓冲液定容，4000rpm离心，上清液即为过氧化氢酶粗提液。.取50ml三角瓶4个（两个测定，两个对照），测定加入酶液2.5ml,对照为煮死酶液 2.5ml;再加入2.5ml 0.1mol/l H 2O2,同时计时间，于30c恒温水浴中保温10

20、分钟，立即 力口入 10%H2SO4 2.5ml。.用0.1mol/L KMnO 4标准溶液滴定H2O2,至出现粉红色（在 30分钟内不消失）为终 点.结果计算：酶活性用每克鲜重样品在10分钟内分解H2O2的毫克数表示：（A-B）*Vt/V1*1.7酶活（酶分解的 H2O2 mg/g鲜重）=W式中： A -对照用 KMnO 4 ml数B酶反应后 KMnO 4滴定ml数V t-酶液总量mlV1-反应所用酶液量 mlW-样品鲜重（g）1.7-1ml 0.1mol/l KMnO 4相当于 1.7mg H2O2注意.所用KMnO 4溶液及H2O2溶液使用前要经过标定，0.1mol/l H 2O2要新配

21、制。实验比色法测定过氧化物酶活性、实验目的 掌握比色法测定过氧化物酶活性的原理和操作二、原理过氧化物酶是植物体内普遍存在的、 活性较高的一种酶， 它与呼吸作用、光合作用及生长素 的氧化等都有密切关系， 在植物生长发育过程中， 它的活性不断发生变化， 因此测量这种酶， 可以反映某一时期植物体内代谢的变化。在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质在470nm处有最大吸收，可用分光光度计测量470nm的吸光度变化测定过氧化物酶活性。三、实验内容（一）实验材料马铃薯块茎。（二）试剂、设备.100 mmol / L磷酸缓冲液 pH6.0 （见附录）。.反应混合液：100 m

22、mol/L磷酸缓冲液（pH6.0） 50mL于烧杯中，加入愈创木酚 28小 于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷却后，加入30 %过氧化氢19人混合均匀，保存于冰箱中。分光光度计，研钵，恒温水浴锅， 100 mL容量瓶，吸管，离心机。（三）实验步骤.称取植物材料1g,剪碎，放入研钵中，加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆，以4000r/min离心15 min ,上清液转入100mL容量瓶中，残渣再用 5mL磷酸缓冲液提取一次，上清液 并入容量瓶中，定容至刻度，贮于低温下备用。.取光径1cm比色杯2只，于1只中加入反应混合液 3mL和磷酸缓冲液1mL,作为对照， 另1只中加入反应混合液 3

23、mL和上述酶液1mL （如酶活性过高可稀释之），立即开启秒表 记录时间，于分光光度计上测量波长470nm下吸光度值，每隔1min读数一次。四、结果计算以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以AA470 /min g（鲜重）表示之。也可以用每1 min内A 470变化0.01为1个过氧化物酶活性单位（u）表示。过氧化物酶活性 u/ （g min ）=式中：AA 470反应时间内吸光度的变化。W 植物鲜重，g 。t一提取酶液总体积， mL 。s 测定时取用酶液体积，mL。t 反应时间，min。实验葡萄糖的一般杂质检查一、实验要求.掌握一般杂质检查的项目及杂质限量计算方法。.掌握一般杂质检查的原理和

24、方法。二、实验原理.酸碱度检查是指用药典规定的方法对药物中的酸度、 碱度及酸碱度等酸碱性杂质进行检查。 检查时 应以新沸并放冷至室温的水为溶剂。 不溶于水的药物，可用中性乙醇等有机溶剂溶解。 常用 的方法有酸碱滴定法，指示剂法以及 pH值测定法。.氯化物检查是指药物中微量氯化物在硝酸溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银白色浑浊液，与一定量的标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银浑浊相比较，以判断供试品中氯化物的限量Cl+AgNO 3-AgCl J.硫酸盐检查是指药物中微量硫酸盐与氯化钢试液在酸性溶液中作用生成的白色浑浊液，与一定量的标准硫酸钾溶液与氯化钢试液在相同的条件下生成的浑浊比较，以判断供

25、试品中硫酸盐的限量。2 一SO4 +BaCl2 BaSO4 J4,铁盐检查是指药物中三价铁盐在酸性溶液中与硫氧酸盐试液生成红色可溶性的硫氧酸铁配离子， 与一定量的标准铁溶液，用同法处理后进行比色，以判断供试品中三价铁盐的限量。Fe3+6SCN - Fe （SCN） 63-.重金属检查是指重金属（以铅为代表）在弱酸性（pH33.5）溶液中与硫代乙酰胺或硫化钠作用，生成黄色到棕黑色的硫化物混悬液，与一定量的标准铅溶液经同法处理后的颜色比较，以控制药品中重金属含量。CH 3CSNH 2f CH3CONH 2+H 2S Pb2+H2SPbSj.神盐检查（古蔡氏法）是利用金属锌与酸作用产生新生态的氢，与

26、药物中微量神盐作用生成具挥发性的神化 氢，遇澳化汞试纸，产生黄色至棕色的神斑，与定量标准神溶液所生成的神斑比较，以判断 药物中神盐的限量。AsO 33-+3Zn+9H +- ASH3 J +3Zn+3H 2OAsH3+2HgB2-2HBr+AsH （HgBr） 2（黄色）AsH3+3HgB2-3HBr+As （HgBr） 3（棕色）五价神在酸性溶液中也能被金属锌还原为神化氢，但生成神化氢的速度较三价神慢， 故在反应液中加入碘化钾及酸性氯化亚锡将五价碑还原为三价神，碘化钾被氧化生成碘， 碘又可被氯化亚锡还原为碘离子。AsO43+2I-+2H+一 AsO33-+l2+H2O AsO 43-+Sn2

27、+ 一 AsO3 3-+Sn4+H2O l2+Sn2+2I-+Sn4+溶液中的碘离子，又可与反应中产生的锌离子生成稳定的配离子，有利于生成神化氢的反应不断进行。4I-+Zn2+一 Znl42-.炽灼残渣检查在机药物经炽灼炭化，再加硫酸湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后， 于高温（700800C） 炽灼至完全灰化，使有机物破坏分解变为挥发性物质逸出，残留的非挥发性无机杂质（多为金属的氧化物或无机盐类）称为炽灼残渣，或称为硫酸盐灰分。三、实验步骤.酸度取本品2g,加新沸过的冷水20ml溶解后，加酚酬:指示液3滴与氢氧化钠滴定液（0.02mol/L） 0.2ml,应显粉红色。.氯化物取本品0.60g,加

28、水溶解使成 25ml （溶解加显碱性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10ml;溶液如不澄清，应滤过；置 50ml纳氏比色管中，加水使成约 40ml,摇匀，即得 供试溶液。另取标准氯化钠溶液（10科gCl/ml） 6.0ml,置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml, 加水使成40ml,摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中， 分别加入硝酸银试液 1.0ml, 用水稀释使成50ml,摇匀，在暗处放置 5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察， 比较，供试溶液不得比对照液更浓（0.01%）。硫酸盐取本品2.0g,加水溶解使成约 40ml （溶液如显碱性，可滴加盐酸使成中性）；溶液如不澄清

29、，应滤过；置 50ml纳氏比色管中，加稀盐酸 2ml、摇匀，即得供试溶液。另取标准硫 酸钾溶液（100科gSQ27ml） 2.0ml,置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml,加稀盐酸2ml, 摇匀，即得对照溶液，于供试溶液与对照溶液中，分别加入25%的氯化钢溶液5ml,用水稀释成50ml,充分摇匀，放置10分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较，供 试溶液不得比对口溶液更浓（0.01%）。铁盐取本品2.0g,加水20ml溶解后，加硝酸 3滴，缓缓煮沸5分钟，放冷，加水稀释使成 45ml,加硫氟酸俊溶液（30- 100） 3ml,摇匀，如显色、与标准铁溶液2.0ml用同一方法制成的

30、对照液比较，不得更深（0.001%）。重金属取25ml纳氏比色管两支，甲管中加标准铅溶液（ 10ug pb/ml） 2ml,加醋酸盐缓冲液 （pH3.5） 2ml,加水稀释成 25ml。取本品4.0g置于乙管中，加水 23ml溶解，加醋酸盐缓冲液（pH3.5） 2ml,若供试液带颜色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其它无干扰的有 色溶液，使之与乙管一致；再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml,摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显示的颜色与甲管比较，不得更深（含重金属不得 过百万分之五）。神盐取本品2.0g,置检神瓶中，加水 5ml溶解后，加稀硫酸 5ml与澳化钾澳试液 0

31、.5ml,置 水浴上加热约20分钟，使保持稍过量的澳存在，必要时，再补加澳化钾澳试液适量，并随 时补充蒸散的水分，放冷，加盐酸 5ml与水适量使成28ml,加碘化钾试液 5ml与酸性氯化 亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g,迅速将瓶塞塞紧（瓶塞上已置有醋酸铅 棉花及澳化汞试纸的检神管），并在2540c的水浴中反应 45分钟，取出澳化汞试纸，将生 成的神斑与标准神溶液一定量制成的标准神斑比较，颜色不得更深，含碑量不得过百万分之o标准神斑制备：精密量取标准神溶液（1（ig/ml 2ml,置另一检神瓶中，加盐酸 5ml与水21ml,照上述方法自 加碘化钾试液5ml”起依法操作，即得标准神

32、斑。炽灼残渣取本品1.0g,置已炽灼至恒重的堪竭中， 精密称定，缓缓炽灼至完全灰化， 放冷至室温， 加硫酸0.51ml使湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，在 700800 c炽灼使完全灰化，移置 干燥器内，放冷至室温，精密称定后，再在 700800 c炽灼至恒重，即得。所得炽灼残渣不得超过 0.1%。四、注意事项.比色或比浊操作，均应在纳氏比色管中进行。选择比色管时，应注意样品管与标准 管的体积相等，玻璃色质一致，管上刻度均匀，高低一致，如有差别，不得超过2mm。.样品液与对照品液的操作应遵循平行操作的原则，并应注意按操作顺序加入各种试 剂。.比色、比浊前应使比色管内试剂充分混匀，然后将两管同置

33、于黑色或白色背景上， 自上而下观察。.神盐检查时，取用的样品管与标准管应力求一致，管的长短，内经一定要相同，以 免生成的色斑大小不同，影响比色。锌粒加入后，应立即将检神管盖上，塞紧，以免ASH3气体逸出。.炽灼残渣时，恒重的操作条件，如所用的干燥器、增竭钳、堪蜗置于干燥器内放置 时间等，必须一致。五、问题与讨论. 一般杂质检查的主要项目有哪些？.比色、比浊操作应遵循的原则是什么？.简述古蔡氏法检神所加各个试剂的作用与操作注意点。.炽灼残渣的成败关键是什么？恒重的概念和意义是什么？实验三药物的特殊杂质检查一、实验目的.熟悉某些药物中的特殊杂质。.掌握特殊杂质检查的几种主要方法及操作。二、实验原理

34、1.麻醉乙醛在空气、日光及湿气的作用下，易氧化分解为有毒的过氧化物，过氧化物 与碘化钾淀粉溶液反应，可产生兰蓝色。反应式可表示如下：C2H5OOC2H5+2KI+H 2-C 2H5OC2H5+5KOH+I 212+淀粉一兰色.乙酰水杨酸属芳酸酯类药物，在生产和贮存过程中均会产生水杨酸。水杨酸对人体 有毒。应对其进行限度检查。 其检查原理是利用水杨酸具有酚羟基，可与高铁盐溶液作用形成紫蓝色，而乙酰水杨酸因无酚羟基，不呈此反应。COOKC00f V311 +4FeNH. （SO J 一 C （斥+ 4NH.HSa+4H*5O.肾上腺素是由肾上腺酮经氢化还原制成。若氢化不完全，可能引进酮体杂质，所以

35、药 典规定应检查酮体。其检查原理是利用酮体杂质在310nm波长处有最大吸收，而肾上腺素药物本身在此波长处几乎没有吸收。根据杂质的吸光度，可控制肾上腺素中酮体的限量。三、实验内容操作步骤.麻醉乙醛中过氧化物的检查取本品5ml,置总容量不超过 15ml的具塞比色管中，加新制的碘化钾淀粉溶液（取碘 化钾10g,加水溶解成95ml,再加淀粉指示液 5ml,混合）8ml,密塞，强力振摇1分钟， 在暗处放置30分钟，两液层均不得染色。.阿司匹林肠溶片中游离水杨酸的检查取本品5片，研细，用乙醇 30ml分次研磨，并移入 100ml量瓶中，充分振摇，用水稀 释至刻度，摇匀，立即滤过，精密量取续滤液2ml ,置

36、50ml纳氏比色管中，用水稀释至50ml, 立即加新制的稀硫酸铁钱溶液（取1ml/L盐酸溶液1ml,加硫酸铁俊指示液 2ml后，再加水适量使成100ml） 3ml,摇匀，30秒钟内如显色，与对照液（精密量取0.01%水杨酸溶液4.5ml, 加乙醇3ml、0.05%酒石酸溶液1ml,用水稀释至50ml,再加上述新制的稀硫酸铁钱溶液3ml,摇匀）比较，不得更深（1.5%）肾上腺素中酮体的检查取本品，加盐酸溶液（9一2000）制成每1ml中含2.0mg的溶液，照紫外-可见分光光度 法（中国药典2005年版附录2223页），在310nm的波长处测定，吸光度不得过0.05。四、注意事项1.进行水杨酸检查

37、时，应在中性或弱酸性溶液（pH46）中进行。若在强酸性溶液中,生成的紫兰色配合物会分解褪色。2.该品种项下规定的波长 小nm以内。五、问题与讨论.特殊杂质检查的常用方法有哪些？.利用紫外-可见分光光度法检查杂质有何优点？.薄层色谱法检查杂质常用的方法有哪几种？其结果如何判断?实验 苯甲酸钠的含量测定一、目的掌握双相滴定法测定苯甲酸钠含量的原理和操作二、原理苯甲酸钠为有机酸的碱金属盐，显碱性，可用盐酸标准液滴定。COONa+ HClCOOH+ NaCl在水溶液中滴定时，由于碱性较弱 (pkb=9.80)突跃不明显，故加入与水不相溶混的溶剂 乙醛提除反应生成物苯甲酸， 使反应定量完成，同时也避免了

38、苯甲酸在瓶中析出影响终点的 观察。三、实验材料、设备甲酸钠、盐酸(0.5mol/L)、乙醛、甲基橙指示液分液漏斗、酸式滴定管、具塞锥形瓶、四、操作步骤取本品1.5g,精密称定，置分液漏斗中，加水约25ml ,乙醛50ml与甲基橙指示液 2滴, 用盐酸滴定液(0.5mol/L)滴定，随滴随振摇，至水层显持续橙红色，分取水层，置具塞锥形 瓶中，乙醛层用水5ml洗涤，洗涤液并入锥形瓶中，加乙醛20ml,继续用盐酸滴定液(0.5mol/L) 滴定，随滴随振摇，至水层显持续橙红色，即得，每 1ml的盐酸滴定液(0.5mol/L)相当于 72.06mg 的 C7H5O2Na。本品按干燥品计算，含 C7H

39、5O2Na不得少于99.0%四、注意事项.滴定时应充分振摇，使生成的苯甲酸转入乙醛层。.在振摇和分取水层时， 应避免样品的损失，滴定前，应用乙醛检查分液漏斗是否严密。五、思考题.乙醛为什么要分两次加入 ？第一次滴定至水层显持续橙红色时，是否已达终点？为什.分取水层后乙醛层用 5ml水洗涤的目的是什么？实验 双波长分光光度法测定复方磺胺甲嗯陛片的含量、目的.掌握复方制剂的分析特点及赋形剂的干扰与排除方法。.掌握双波长分光光度法测定复方磺胺甲嗯陛片中磺胺甲嗯 陛与甲氧茉咤含量的原理与方法。二、实验内容.供试品溶液的制备取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于磺胺甲嗯 陛50mg与氧茉咤

40、10mg）,置于100ml量瓶中，加乙醇适量，振摇 15分钟磺胺甲口恶陛与甲氧茉咤溶解，加乙 醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。.对照品溶液的制备精密称取105c干燥至恒重的磺胺甲嗯陛对照品50mg与甲氧芳咤对照品 10mg,分置100ml量瓶中，各加乙醇溶解并稀释至刻度， 摇匀，分别作为对照品溶液（1）与对照品溶液（2）。 3.磺胺甲嗯陛的测定精密量取供试品溶?与对照品溶液（1）、（2）各2ml,分置100ml量瓶中，各加0.4%氢氧化钠溶液稀释至刻度，摇匀。取对照品溶液（2）的稀释液；以257nm为测定波长（4），在304nm 波长附近（每间隔0.5nm）选择等吸收点波长为

41、参与波长（浦，要求 A=A入2 A入尸0。再在 加与加波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液（1）的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值（AA）,计算，即得。.甲氧茉咤的测定精密量取上述供试品溶液与对照品溶液（1）（2）各5ml,分置100ml量瓶中，各加盐酸一氯化钾溶液取盐酸液（0.1mol/L）75ml与氯化钾6.9g,加水至1000ml摇匀稀释至刻度，摇 匀。取对照品溶液（1）的稀释液，以239.0nm为测定波长（与，在295nm波长附近（每间隔0.2nm） 选择等吸收点波长为参比波长（斯，要求 A=A入2 A入1=0。再在 力与入 1波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液（

42、2）的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值（AA）,计算，即得。本品每片中含磺胺甲嗯口坐（C10H11N3O2S）应为0.3600.440g,含甲氧茉咤（C14H12N4O3）应为72.0 88.0mg。说明.磺胺甲嗯 陛与甲氧芳咤的结构分别为:CH3NH2(SMZ)(TMP)SMZ 与 TMP的紫外吸收图谱分别为：图1.SMZ的紫外吸收图谱1 TMP(2.0 科 g/ml 2 SMZ(10.0 科 g/ml)3 SMZ + TMP ;4 辅料图2.TMP的紫外吸收图谱1 TMP(5.0 科 g/ml) 2 SMZ(25.0 科 g/ml)3 SMZ + TMP;4 辅料.复方磺胺甲嗯吵片的处

43、方为：磺胺甲嗯吵400g甲氧芳咤80g制成1000片.本实验采用双波长分光光度法测定SMZ和TMP的含量。由于干扰组分在测定波长和参比波长处吸收度相等，可在计算 A时消去，所以应用本法可以不经分离，直接测定复方 制剂中SMZ和TMP的含量。四、思考题.试简述双波长分光光度法的原理。.试查阅本品的其它分析方法，从中了解复方制剂分析的特点及发展趋势。实验 维生素C片的质量分析一、目的要求、掌握碘量法的原理和操作方法。、掌握常用辅料对制剂含量测定的影响和排除方法。、掌握制剂的含量计算方法。二、实验原理维生素C （VC）又称抗坏血酸，分子式为 C6H8。6。Vc具有还原性，可被I2定量氧化， 因而可用

44、I2标准溶液直接滴定。其滴定反应式为：C6H8O6+I2=C6H6O6+2HI。用直接碘量法可测定药物中的 Vc含量。由于Vc的还原性很强，较易被溶液和空气中的氧氧化，在碱性介质中这种氧化作用更 强，因此滴定宜在酸性介质中进行，以减少副反应的发生。考虑到在强酸性溶液中也易被氧化，故一般选在 pH=34的弱酸性溶液中进行滴定。三、主要仪器与药品棕色滴定管：25 mL、移液管：50 mL、刻度吸管、量瓶 100ml维生素C片、维生素C注射液、I2溶液、淀粉指示液 四、操作维生素C为白色或略带淡黄色片，含维生素C应为标示量的93.0%-107.0%。（一）维生素C片取本品适量相当于含 Vc1.0g

45、,加水20ml,振摇使溶解；将溶液滤过，取滤液，照紫外-可见分光光度法（附录IVA）,在420nm的波长处测定吸光度，不得过 0.07。取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于维生素C 0.2g）,置100 mL量瓶中，加新沸过的冷水 100 mL与2molL-1稀醋酸10 mL的混合液适量，振摇使维生素C溶解并稀释至刻度，摇匀，经干燥滤纸迅速滤过，精密量取续滤液50 mL,加淀粉指示液1mL,用（0.05 mol/L碘滴定液）滴定，至溶液显蓝色并持续30s不褪。每1mL碘滴定液相当于8.806 mg的维生素 C。（二）维生素 C注射液C应为标本量的本品为维生素 C的灭菌水溶液，无

46、色或微黄色的澄明液体。含维生素 90.0%110.0%。本品中可加适量的焦亚硫酸钠为稳定剂。精密量取本品适量（约相当于维生素 C 0.2 g）,加水15 mL与丙酮2 mL，摇匀，放 置5 min ,加稀醋酸4 mL与淀粉指示液1 mL ,用碘滴定液（0.05mol/L ）滴定，至溶液显 蓝色并持续30 s不褪。每1 mL碘滴定液相当于 8.806 mg的维生素C 。五、注意事项维生素C在空气中易被氧化，过滤、滴定等操作应迅速。六、思考题.溶解I2时，加入过量 KI的作用是什么？.维生素C固体试样溶解时为何要加入新煮沸并冷却的蒸储水？.碘量法的误差来源有哪些？应采取哪些措施减小误差？I2溶液（

47、约0.05mol L-1）：称取3.3g I2和5g KI ,置于研钵中，加少量水，在通风橱中研 磨。待I2全部溶解后，将溶液转入棕色试剂瓶中，加水稀释至250mL,充分摇匀，放暗处保存。实验非水滴定法测定诺氟沙星（氟哌酸）胶囊含量一、目的.掌握非水滴定法的原理及操作 ；.熟悉非水滴定在药物分析中的应用。二、实验原理.定义：非水溶液滴定法即在非水溶剂中进行的滴定分析方法。一些很弱的酸或碱以及某些盐类，在水溶液中进行滴定时，没有明显的滴定突跃， 难于掌握滴定终点；另外还有一些有机化合物，在水中溶解度很小，因此，以水作溶剂的滴定分析受到一定的限制。 所以，滴定分析法逐渐采用了各种非水溶剂作为滴定分

48、析的介质，不仅能增大有机化合物的溶解度，而且能改变物质的化学性质（例如酸碱性及其强度），使在水中不能进行完全的滴定反应能够顺利进行。.非水溶液酸碱滴定法：是利用非水溶剂来改变物质的酸碱相对强度，即在水溶液中呈 弱酸性或弱碱性的化合物，由于酸碱度太弱，不可能得到滴定的终点。 如果选择某些适当的非水溶剂为溶剂使化合物增加相对的酸度成为强酸，或者增加相对的碱度成为强碱，就可以顺利地进行滴定的分析方法。.应用：本法主要用来测定有机碱及其氢卤酸盐、磷酸盐、硫酸盐或有机酸盐以及有机 酸碱金属盐类药物的含量，也用于测定某些有机弱酸含量。三、实验材料、设备诺氟沙星胶囊、丙二酸、醋酊、冰醋酸、高氯酸、橙黄IV指

49、示液酸式滴定管、试管、烧杯、水浴锅等四、操作步骤.诺氟沙星的鉴别（1）取本品内容物适量（约相当于诺氟沙星 0.15g）置干燥试管中，加丙二酸0.1g与醋酊2ml,振摇，并在 80 90C水浴中加热1015mm,显红棕色。（2）取本品内容物适量，加0.4 %氢氧化钠溶液适量， 振摇使诺氧沙星溶解，稀释成每1ml 中含诺氟沙星5科自滤过，弃去初滤液，取续滤液，在 273, 325与336nm波长处测定有最 大吸收。.含量测定 精密称取本品内容物适量（约相当于诺氟沙星 0.25g）,加冰醋酸30ml,振摇 使诺氟沙星溶解，加橙黄IV指示液10滴，用高氯酸液（0.1mol/L）滴定，至溶液显紫红色，并

50、将滴定的结果用空白试验校正。五、注意事项90.0110.0%,滴定时，每 1ml0.1mol/L1.ChP2010版规定本品含诺氟沙星应为标示量的 的高氯酸液相当于 31.93mg的Ci6H18FN3O3。. 0.1mol/L的高氯酸溶液的配制及标定参见 ChP2010版附录。高氯酸不稳定，注意避 光保存。.水的体膨胀系数较小(0.21 10-3/C), 一般酸碱标准溶液的浓度受室温改变的影响不 大。而多数有机溶剂的体膨胀系数较大，例如，冰醋酸的体膨胀系数为(1.1 X0-3/0C)其体积随温度改变较大。所以高氯酸冰醋酸溶液滴定样品时和标定时温度若有差别，则应重新标定或按下式将标准溶液的浓度加以校正：C1 =式中：0.0011为冰醋酸的体膨胀系数， 的浓度，。为测定时的浓度。4.现行药典对本品含量测定的方法为 五、思考题非水滴定应用于药物分析有何特点 量。1 0.0011t1 -t0C0t0为标定时的温度，t1为测定时的温度，C0为标定时HPLC 法。?哪几类药物适合用非水滴定法测定其含实验 槐花的质量检验一、目的.了解中药分析检验常用的方法与特点；.熟悉连续回流提取法；.掌握黄酮类化合物的性质鉴别及比色法测定含量的原理及方法。二、实验原理按中华人民共和国药典， 槐花项下规定了于槐花质量相关的项目有：形状、鉴别、检查、浸出物、含量测定等。.槐花中