甾体激素类药物的分析(3)

1、第十一章甾体激素类药物的分析精选ppt基本结构：环戊烷骈多氢菲ABCD12345678910111213141516171819精选ppt环上双键的表示方法： 用“”表示 ,双键的位置写在的右上角。双键位置4 1,4 5 5(10) 精选ppt环上取代基构型表示方法：构型：与母核连接的取代基,指向环平面的前面时,为构型.用实线表示“”构型：与母核连接的取代基,指向环平面的背面时,为构型.用虚线表示“”精选ppt按药理作用分类：甾体激素肾上腺皮质激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素精选ppt肾上腺皮质激素氢化可的松醋酸地塞米松1.均有21个碳原子2. A环4-3-酮基, UV、与羰基试剂

2、反应3.C17位上有a-醇酮基,具还原性一、结构与性质精选ppt雄性激素及蛋白同化激素睾酮苯丙酸诺龙1.雄性激素母核有19个碳原子,蛋白同化激素 C10位上一般无角甲基,母核有18个碳原子2. A环4-3-酮基3.C17位上有-羟基,或由它们形成的酯精选ppt17位加甲基作用更强精选ppt丙酸睾酮酯化吸收减慢，作用时间长。精选ppt雄性激素及蛋白同化激素主要活性基团性 质4 3 酮UV、与羰基试剂反应 C17 羟基可成酯精选ppt孕激素黄体酮1.母核有21个碳原子2. A环4-3-酮基3.C17位上有甲酮基醋酸甲地孕酮精选ppt孕激素主要活性基团性 质4 3 酮UV、与羰基试剂反应C17 甲酮

3、基与亚硝基铁氰化钠反应精选ppt雌性激素炔雌醇1.母核有18个碳原子,C10无角甲基2. A环为苯环, C3位上有酚羟基3.C17位上有-羟基雌二醇精选ppt雌激素主要活性基团性 质A环为3OH 苯环UV、与重氮苯磺酸盐反应C17 乙炔基与AgNO3反应C17 羟基可成酯精选ppt小结甾体激素碳原子数A环17位取代基肾上腺皮质激素214-3-酮-醇酮基雄性激素194-3-酮-OH-CH3孕激素214-3-酮甲酮基雌激素18苯环C3-酚OH-OH-CCH精选ppt二、鉴别试验（一）与强酸的呈色反应甾体激素类药物呈色H2SO4 H3PO4 HClO4 HCl精选ppt 与硫酸呈色操作简便，依颜色与

4、荧光可区别，反应灵敏，为各国药典所用。 如中国药典：氢化可的松，取本品2 mg，加硫酸2 ml溶解，放置5分钟，显棕黄至红，并显绿色荧光，将此溶液倾入10ml水中，即变黄色至红色，同时有少量絮状沉淀生成。精选ppt与硫酸显色反应 显 色 荧光 加水稀释炔雌醇 橙红 黄绿 絮状玫红醋酸可的松 黄或微 无 褪色并澄 带橙色 清精选ppt(二) 官能团的反应1 C17 醇酮基还原性A. 呈色反应肾上腺皮质激素药物呈色四氮唑盐OH精选ppt例如:中国药典中醋酸泼尼松的鉴别方法：本品1 mg，加乙醇2ml溶解，10 % 氢氧化钠试液2滴。氯化三苯四氮唑试液1ml，显红色。精选ppt肾上腺皮质激素药物Cu

5、2O橙红色碱性酒石酸铜B. 沉淀反应Ag黑色氨制硝酸银多伦试剂斐林试剂精选ppt甾酮类激素药物呈色羰基试剂2. C3酮基和C20酮基常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼精选ppt异烟腙（黄色）睾酮精选ppt黄体酮异烟双腙（黄色）精选ppt具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物呈色亚硝基铁氰化纳间二硝基酚芳香醛3. 甲酮基精选ppt黄体酮蓝紫色亚硝基铁氰化纳其他甾体淡橙色不显色亚硝基铁氰化纳亚硝基铁氰化钠是黄体酮专属而灵敏的反应精选ppt黄体酮蓝紫色精选ppt有机氟F有机破坏有机氯Cl4. 有机卤素茜素氟蓝 硝酸亚铈硝酸硝酸银AgCl 蓝紫色 精选ppt茜素氟蓝蓝紫色F-铈精选p

6、pt药典规定地噻米松磷酸钠用氧瓶燃烧法处理，使有机结合的氟转变成无机的氟离子，在 pH4.3条件下与茜素氟蓝试液和硝酸亚铈试液反应生成蓝紫色的水溶性配位化合物。精选ppt脂肪链上的氯可水解脱落中国药典中氯倍他索的鉴别方法：取本品少许，加乙醇1 ml,混合，加热，加硝酸2 ml，摇匀，加硝酸银数滴，即显白色沉淀。 氯在母核上（丙酸倍氯米松）不易脱落，要用氧瓶燃烧法处理，再按氯化物的鉴别试验进行鉴别。精选ppt雌激素类药物红色偶 氮染料重氮苯磺酸5. 酚羟基精选ppt含炔基的甾体激素白色的银盐沉淀硝酸银6. 炔基的沉淀反应精选ppt炔雌醇白精选ppt (三) 制备衍生物测定m.p.1.缩氨基脲的生

7、成精选ppt2.酯的水解丙酸睾酮醇制的氢氧化钾游离睾酮熔点为1501563.肟的生成羰基与羟胺生成肟，测熔点如炔诺孕酮与盐酸羟胺醋酸钠反应生成炔诺孕酮肟，生成物的熔点为：195精选ppt4.酯的生成酚羟基与苯甲酰氯生成酯，测熔点例如：炔雌醇与苯甲酰氯反应，生成物苯甲酸酯的熔点为：201精选ppt 不少药物是C17或C21上羟基的酯类。药物中酯结构的鉴别，一般先行水解，产生相应的羧酸，再根据羧酸的性质来鉴别。（四）水解产物的反应精选ppt香精选ppt特臭特臭精选ppt-3-酮 约240nm苯环 约280nm（五） UV法规定最大吸收波长最大吸收波长处的吸收度某两个吸收波长处吸收度的比值精选ppt

8、33003000cm-130002700cm-119001650cm-116501450cm-11000650cm-1（六） IR法37503300cm-1精选ppt（七） TLC法主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别 方法：对照品法 要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。精选ppt （八） HPLC法 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸氟轻松软膏）方法：对照品法 要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。精选ppt三、 特殊杂质检查（一）其他甾体1. 定义 与标示药物结构不同的甾体化合物都称为“其他甾体”精选ppt2. 来源 原料、中间

9、体、异构体、降解产物3. 特点 （1）可能存在多个甾体杂质 （2）结构类似4. 方法（具有一定分离能力） TLC法（高低浓度对比法） 精选ppt判定方法： 规定杂质斑点数目 规定杂质斑点颜色精选ppt氢化可的松 检查 其他甾体 取本品加氯仿-甲醇（9 ：1）制成3.0mg/ml的溶液作为供试液，精密量取适量，加氯仿-甲醇（9 ：1）稀释成0.06mg/ml的溶液作为对照液；照薄层色谱法，各取5l，分别点于同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇（97 : 3）为展开剂，展开后晾干，在105干燥10分钟，放冷，喷以碱性四氮唑盐试精选ppt液，立即检视，供试品溶液如显杂质斑点，不得多于2个，其颜色与对照液的主

10、斑点比较，不得更深。12精选ppt（2）HPLC法（主成分自身对照法） 判定方法： 规定杂质峰数目 规定杂质峰面积精选ppt 取本品适量，精密称定，以甲醇为溶剂，配制成每1ml含1mg的溶液（1）与每1ml含0.02mg的溶液（2），用含量测定项下的方法和溶液，取5l注入液相色谱仪，调整仪器灵敏度，使主成分峰高度达记录仪的满量程。再分别取溶液（1）黄体酮检查其他甾体精选ppt 和溶液（2）各10l，进样。记录至主成分峰保留时间的1.5倍。溶液（1）显示的杂质峰数不得超过1个，其面积不得大于溶液（2）主峰面积的3/4。供试溶液：溶液（1）1mg/ml对照溶液：溶液（2）0.02mg/ml精选pp

11、t(二)硒来源 合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢原理剧毒精选ppt（三）有机溶剂残留量的检查甲醇 第二类溶剂 0.3%GC法丙酮 第三类溶剂 0.5% 地塞米松磷酸钠检查 甲醇和丙酮内标法精选ppt（四）游离磷酸盐地塞米松磷酸钠氢化可的松磷酸钠倍他米松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠对照品法精选ppt检查 游离磷酸地塞米松磷酸钠 精密称取本品20mg，置25ml量瓶中，加水15ml溶解，精密加钼酸铵硫酸试液2.5ml与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液1ml，加水至刻度，摇匀，在20放置3050分钟，照分光光度法，在740nm处测定吸收度，与对照液4.0ml同法处理的吸收度比较，不得更大。精选ppt（对照

12、液 0.035mg/mlKH2PO4）供试品中游离磷酸盐按磷酸计算的限量：精选ppt第四节 、含量测定根据甾体激素药物的官能团和整个分子的特征，可以采用比色法、紫外分光光度法、荧光法、气相色谱法和液相色谱法测定其含量精选ppt甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法有干扰（一）HPLC法 USP、BP、JP均采用 RPHPLC（大多内标法）特点 ：用样量少，灵敏度高，分离效果好，测定速度快。精选ppt二 UV法-3-酮 240nm（）肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素 苯环 280nm（）雌激素精选ppt三 比色法 （一）异烟肼比色法1 原理 ：C3酮基及

13、某些其他位置上的酮基能在酸性条件下与羰基试剂异烟肼缩合，形成黄色的异烟棕，在一定波长处具有最大吸收HCl（缩合）C3酮基异烟肼异烟棕（黄色）精选ppt异烟腙（黄色）精选ppt2. 方法 对照品法暗45精选ppt 醋酸地塞米松软膏 含量测定对照液：精密称取醋酸地塞米松对照品25mg，置100ml量瓶中，加无水乙醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取5ml，用无水乙醇稀释至50ml，摇匀。供试液：精密称取本品适量（约相当于醋酸地塞米松2.5mg），置烧杯中，加无水乙醇约25ml，置水浴中加热，搅拌，使醋酸地塞米松溶解，再置冰浴中冷却，精选ppt滤过，滤液置100ml量瓶中，同法提取三次，滤液并入

14、量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。测定法：精密量取上述溶液各10ml，分别置具塞试管中，置水浴中蒸去乙醇，残渣中加氯仿10ml，振摇，使残渣溶解，各精密加0.1%异烟肼甲醇溶液（取异烟肼0.5g，加盐酸0.63ml，加甲醇使溶解成500ml）10ml，摇匀，置55暗处保温45分钟，取出，放冷，用氯仿稀释至25ml。摇匀，在415nm的波长处分别测定吸收度，计算即得。精选ppt3.讨论（1）溶剂的选择异烟肼盐酸盐甲醇、乙醇无水甲醇无水乙醇精选ppt酸、异烟肼的量(2)盐酸 : 异烟肼 = 2 : 1 A最大盐酸的浓度为0.0074mol/L异烟肼的浓度为0.00365mol/L也可以使用

15、0.0037mol/L的硫酸若使用醋酸，则将其浓度增大，约为4.4mol/L样品 : 异烟肼 = 1 : 8 精选ppt（3）水分、 温度、O2与光线的影响含水量腙水解A% 温度升高，反应速度加快 不挥发溶剂、不吸收水分时 O2与光线对反应无影响精选ppt（4）关于反应的专属性反应速度C3= O C17= O 、 C20= O C11= O 不反应对C3酮基最敏感。精选ppt OH -还原1 原理 肾上腺皮质激素类药物C17 -醇酮基，具强还原性，在强碱性溶液中能将四氮唑盐还原成有色的甲瓒。生成的颜色随所用的试剂和条件的不同而不同（二）四氮唑比色法 精选ppt2.四氮唑盐的种类氯化三苯四氮唑（

16、TTC）也称红四氮唑蓝四氮唑（BT）精选ppt红四氮唑三苯甲瓒深红精选ppt蓝四氮唑（BT）精选ppt双甲瓒（暗蓝）精选ppt供试液：精密称取本品4g（约相当于醋酸泼尼松龙20mg），置烧杯中，加无水乙醇约30ml，置水浴上加热，充分搅拌，使醋酸泼尼松龙溶解，再置冰浴中冷却，滤过，滤液置100ml量瓶中，同法提取三次，滤液并入量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。 醋酸泼尼松龙软膏含量测定对照液：精密称取醋酸泼尼松龙对照品20mg，置100ml量瓶中，加无水乙醇振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。3. 方法 对照品法精选ppt测定法：精密量取上述溶液各1ml，分别置干燥具塞试管中，各精密

17、加无水乙醇9ml与氯化三苯四氮唑试液2ml，摇匀，再各精密加氢氧化四甲基铵试液1ml，摇匀，在25暗处放置4050分钟，照分光光度法，在485nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得。操作应避光。精选ppt4. 讨论（1） 基团对反应速度的影响a.C11= O C11OH如：可的松氢化可的松b.C21OH C21-酯C.简单酯 复杂酯如：醋酸酯琥珀酸酯越复杂空间位阻越大精选pptd. C16有取代基，使反应抑制，需加入冰醋酸，才可以进行测定精选ppt（2） 溶剂、水分的影响含水量5%含水10%A10%含水30%几无反应无醛无水乙醇醛 A 无水乙醇（具有还原性）精选ppt（3）碱的种类及加入顺序反

18、应应在强碱性（pH13.75）条件下进行以氢氧化四甲基铵的效果最佳加入顺序：醇酮基不稳定，碱化分解精选ppt（4）试剂质量RT 无色 空白值低 质量好坏影响不大BT 淡黄色 空白值高 质量好坏影响较大要求：a.BT的乙醇溶液极淡黄色，与乙醇比较 A=0.030.06 b.用标准氢化可的松校正摩尔吸光系数为：22000 c.临用新配精选ppt（5） O2与光线的影响反应过程反应产物怕光避光、暗处、快速O2影响颜色强度和稳定性隔绝空气、 快速充N2精选ppt（6） 温度与时间t甲瓒分解%ChP 25 4045BP 30 1h精选pptmax=465max=5151. 原理 雌激素与硫酸乙醇反应呈色

19、（三）Kober反应比色法精选ppt反应条件双变色，测定结果重现性不好杂质干扰（赋型剂、稳定剂有干扰）存在的问题A环是芳环，在C2或C3有含氧取代D环的C17有含氧取代（OH,-C=O）C13必须有角甲基精选ppt解决方法用该法测定雌激素类药物制剂的含量时比色测定前采用分离提取严格控制反应条件消除背景干扰精选ppt铁酚试剂比色法铁酚试剂替代硫酸乙醇Fe 3+的作用：促进黄色的呈色速度和强度促进黄色变成红色加强红色的稳定性苯酚的作用：消除反应过程中产生的荧光加速红色的生成精选ppt参 考 习 题精选ppt甾体激素类药物的结构中能和 四氮唑盐发生显色反应的基团 A. 酚羟基 B. 活泼次甲基 C.

20、 甲酮基 D. C17 -醇酮基 E. 酮基精选ppt 用异烟肼比色法测定甾体激素药物含量时，其溶液的环境是 A强酸性 B中性 C强碱性 D弱碱性 E以上都不对精选ppt 可用于氢化可的松鉴别的试剂有 A氨制硝酸银 B异烟肼 C红四氮唑 D硫酸 E重氮苯磺酸精选ppt可用于甾体激体类药物的测定方法有 A高效液相色谱法 B四氮唑盐法 C紫外分光光度法 D异烟肼比色法 EKober反应比色法精选ppt 能与亚硝基铁氰化钠反应生成兰紫色的药物是 A雌二醇 B黄体酮 C醋酸可的松 D苯丙酸诺龙 E以上都不对精选ppt各国药典对甾体激素类药物常用HPLC或GC法测定其含量，主要原因是A. 它们没有特征紫外吸收，不能用 紫外分光光度法 B. 不能用滴定分析法进行测定 C.