试验十一、抗心肌缺血药物作用研究

1、试验十一、抗心肌缺血药物作用研究 1一、目的了解抗心肌缺血新药的评价原则。学习心肌缺血动物模型建立方法及评价指标。观察受试化合物对心肌缺血大鼠的影响，判断其是否具有抗大鼠心肌失常的作用。 2二、与试验相关的理论知识要点 心肌缺血观察指标与方法 心肌缺血，是指心脏的血液灌注减少，导致心脏的供氧减少，心肌能量代谢不正常，不能支持心脏正常工作的一种病理状态。（1）心电图指标观察： 皮下放置心电图肢体导联电极，测标准导心电图观察药物对S-T段、T波幅度的影响。3（2）形态学观察：1.摘取心脏，用生理盐水冲洗，除去血污，剔除血管脂肪等非心肌组织，用吸水纸吸去水分，称全心湿重。2.沿冠状沟切除右心房和右心

2、室，留下室间隔和左心室，称重。顺房室沟从心尖到心基部平行将狗心室切成1cm厚的心肌片，用生理盐水冲洗干净。43.将心肌片放在1%的氯化三苯基四氮唑（TTC,用pH7.47.8的0.2mol/L PBS配制）溶液中，在37温孵7min染色,染色过程中不时搅拌染色液使之与心肌有充分接触。4.染色后立即用生理盐水冲洗多余的染料。 梗死区不着色，非梗死区被TTC染为红色。5.剪去各心肌片被染色的非梗死区心肌，把未染色的梗死心肌称重，除以左心室重即得梗死范围占左心室重的%。5（3）酶学测定： 测定血液、心肌组织中的肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、脂质过氧化产物丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（S

3、OD）等指标反应心肌缺血情况。6（4）心脏功能及血流动力学试验 观测指标应包括冠脉流量，心输出量、左室作功左室内压、左室舒张末期压、左室内压最大变化速率、动脉血压、外周阻力等，进行连续动态观测。7（5）心肌耗氧量试验 心肌代谢、特别是氧的供需矛盾，是冠心病的重要病理生理变化，而多数中药常通过降低心肌耗氧量、改善心肌代谢而达到治疗目的。因此，新药对心肌耗氧量的影响，应列为必做项目。可供选择的试验方法如下 1.直接测定：心肌耗氧量测定，心肌组织氧分压 测定（可多部位、多层次测定），离体心脏、心肌片或心肌细胞耗氧量测定。 2.间接测定：张力时间指数，心肌耗氧指数，正性肌力作用。 3.耐缺氧试验：离体

4、心脏或心肺灌流耐缺氧试验，心肌细胞培养耐缺氧试验及其他。 8三、教学试验安排及内容（一）教学分组 在一个教学单元内，根据学生人数，将学生分为8组，每组25人，并分成上下两班，4组/班。（二）试验方案全班均采用异丙肾上腺素造模；上半班采用A受试物，建议受试物为丹参酮A磺酸钠；下半班采用B受试物，建议受试物为丹参注射液。9四、试验方法及步骤（一）试验材料试验药品：乌拉坦（Urethane），生理盐水配制成20%溶液； 0.5%异丙肾上腺素（Isoprenaline）；生理盐水，5%葡萄糖注射液。阳性药：0.2%维拉帕米。受试物：丹参酮A磺酸钠，配制成1%、0.2%溶液； 丹参注射液，50%葡萄糖配

5、制成含生药 1.5g/ml、0.3g%溶液。试验仪器：生物机能试验系统、紫外、动物秤、大鼠手术台、眼科镊、1ml、5ml注射器、4#、6#针头。10（二）试验方法取大鼠，称体重；腹腔注射乌拉坦12g/kg（20%乌拉坦，56ml/kg）麻醉；仰卧位固定于手术台上,针型电极插入大鼠皮下，打开生物机能试验系统，待心电图稳定后开始试验，先记录一段正常的大鼠心电图；分组及给药方案如下：11上、下半班：第1组、第5组：静脉注射生理盐水1ml/kg；第2组、第6组：静脉注射0.2%维拉帕米1ml/kg；第3组：静脉注射0.2%丹参酮A磺酸钠；第7组：静脉注射0.3g/ml丹参注射液1ml/kg，第4组：静

6、脉注射1%丹参酮A磺酸钠；第8组：静脉注射1.5g/ml丹参注射液1ml/kg， 5min后，静脉快速注射0.5%异丙肾上腺素溶液1ml/kg， 记录大鼠心电图。12注射异丙肾上腺素后，以心电图出现S-T段改变或T波变化为缺血标志。每次给完一种药后，观察并记录正常、给Iso前和给Iso后1min、3min、5min、10min、15min、20min、30min和60min的T波和S-T段偏移。将试验结果记录与表格中。13（三）试验结果的原始记录 表1 受试化合物对大鼠T波幅度的影响14表2 受试化合物对大鼠S-T波幅度的影响15表3 受试化合物对大鼠心率的影响 16（四）结果分析与讨论综合8

7、个组的试验结果，判断受试物是否具有抗心肌缺血的作用 ；分析中药单体与复方中药在抗心肌缺血中的特点。（五）试验报告内容及格式要求试验报告内容及格式同前，试验题目由学生自定。17注意事项动物个体较小，固定大鼠时尤其两前肢不宜过紧，以免影响呼吸；心电图机的针型电极应向心插入皮下，不可插入肌肉内，以免肌电干扰，另外动物周围不要放置金属制品，以免干扰 。18附：大鼠急性心肌缺血模型 （1）将动物注射20%乌拉坦（0.50.6ml/100g）麻醉后 固定在手术台上（2）用笔型静脉置留针进行气管插管(或切开气管插管)，连接动物呼吸机，参数为：呼吸频率85；呼吸比1：1；潮气量为18ml。 19剪开气管插管 笔型静脉置留针气管插管 20（3）在胸部左侧3-4肋间剪开皮肤21 （4）分离肌肉露出肋骨 22（5）在第三根肋骨下用止血钳将肌肉分离开，然后左手用止血钳挑住肋骨，右手持剪刀剪开第三根肋骨 23