蛋白质电泳相关试剂及缓冲液

1、说明：如下常规试剂配制方法仅供参考蛋白质电泳相关试剂及缓冲液（一）30（W/V）丙烯酰胺溶液组分浓度 30（W/V） Acrylamide配制量 100ml配制方法 1称取下列试剂，置于250ml烧杯中。Acrylamide 29gBIS 1g2向烧杯中加入约80ml的去离子水，充分搅拌溶解；最后定容至100ml，用0.45m滤膜过滤除杂。3置于棕色瓶中4保存。（注意：丙烯酰胺具有强烈的神经毒性，可通过皮肤吸收并具有累积性。配制时应戴手套操作）（二）40（W/V）丙烯酰胺溶液组分浓度 40（W/V） Acrylamide配制量 100ml配制方法 1称取下列试剂，置于200ml烧杯中Acryl

2、amide 38gBIS 2g2向烧杯中加入约80ml的去离子水，充分搅拌溶解；最后定容至100ml，用0.45m滤膜过滤除杂。3置于棕色瓶中4保存。（注意：丙烯酰胺具有强烈的神经毒性，可通过皮肤吸收并具有累积性。配制时应戴手套操作）（三）10（W/V）过硫酸铵组分浓度 10（W/V） 过硫酸铵配制量 10ml配制方法 1称取1g过硫酸铵。2加入10ml的去离子水后搅拌溶解，贮存于4。（注意：10过硫酸铵溶液在4保存能使用两周左右，过期会失去催化效果）（四）5X TrisGlycine Buffer组分浓度 0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5（W/V） SDS配制量 1

3、L配制方法 1称取下列试剂，置于1L的烧杯中Tris 15.1gGlycine 94gSDS 5.0g2加入约800ml的去离子水，搅拌溶解。3加入去离子水定容至1L后，室温保存。（五）2X SDSPAGE Loading Buffer组分浓度 100mM TrisHCl （pH 6.8）4（W/V） SDS0.2（W/V） 溴酚蓝20（V/V） 甘油2（W/V） 巯基乙醇配制量 5ml配制方法 1称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中 1M TrisHCl （pH 6.8） 0.5mlSDS 0.2g溴酚蓝 10mg甘油 1ml2加入去离子水溶解定容至5ml。3小份分装，0.5ml一管，室温

4、保存。4使用前将25l的巯基乙醇加入混匀。（六）5X SDSPAGE Loading Buffer组分浓度 250mM TrisHCl （pH 6.8）10（W/V） SDS0.5（W/V） 溴酚蓝50（V/V） 甘油5（W/V） 巯基乙醇配制量 5ml配制方法 1称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中 1M TrisHCl （pH 6.8） 1.25mlSDS 0.5g溴酚蓝 25mg甘油 2.5ml2加入去离子水溶解定容至5ml。3小份分装，0.5ml一管，室温保存。4使用前将25l的巯基乙醇加入混匀二，核酸电泳相关试剂及缓冲液（一）50X TAE Buffer （pH8.5）组分浓度 2

5、M Tris醋酸，100mM EDTA 配制量 1L配制方法 1称取下列试剂，置于1L烧杯中Tris 242.2gNa2EDTA2H2O 37.2g2加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解，再加入57.1ml的醋酸，充分搅匀3加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。（二）10X TBE Buffer （pH8.3）组分浓度 890mM Tris醋酸，20mM EDTA 配制量 1L配制方法 1称取下列试剂，置于1L烧杯中Tris 108gNa2EDTA2H2O 7.44g硼酸 55g 2加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。（三）10X MOPS

6、 Buffer组分浓度 200mM MOPS，20mM NaAc，10mM EDTA 配制量 1L配制方法 1称取41.8g MOPS，置于1L烧杯中，加入约800mlDEPC处理水，搅拌溶解。 2用1M NaOH调节pH至7.0。3再加入一下试剂1M NaAc（DEPC处理） 20ml0.5M EDTA（pH8.0）（DEPC处理） 20ml4用DEPC处理水将溶液定容至1L。5用0.45m滤膜过滤除杂，室温避光保存。（注意：溶液见光或高温灭菌后会变黄，仍可以使用，但变黑则不能使用） （四）溴化乙锭（10mg/ml）组分浓度 10mg/ml 溴化乙锭配制量 100ml配制方法 1称取1.0g

7、溴化乙锭，加入到200ml容器中。2加入去离子水100ml，充分搅拌数小时完全溶解溴化乙锭。3将溶液转入棕色瓶，室温避光保存。4溴化乙锭最终工作浓度为0.5g/ml。（五）6X DNA Loading Buffer（单染料）组分浓度 0.25（W/M） 溴酚蓝30（W/M） 甘油配制量 10ml配制方法 1称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中 溴酚兰 25mg2向离心管中6ml去离子水，充分搅拌溶解。3加入3ml甘油混匀，最终用去离子水定容至10ml，室温保存。 （六） 6X DNA Loading Buffer（双染料）组分浓度 0.25（m/M） 溴酚蓝0.25（m/M） 二甲苯腈蓝FF

8、30（m/M） 甘油配制量 10ml配制方法 1称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中溴酚兰 25mg二甲苯腈蓝FF 25mg2向离心管中6ml去离子水，充分搅拌溶解。3加入3ml甘油混匀，最终用去离子水定容至10ml，室温保存。（七）10X RNA Loading Buffer（单染料）组分浓度 10mM EDTA 0.25（m/M） 溴酚蓝50（m/M） 甘油配制量 10ml配制方法 1称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中0.5M EDTA（pH 8.0） 200l溴酚兰 25mg 2向离心管中4mlDEPC处理水，充分搅拌溶解。3加入5ml甘油混匀，用DEPC处理水定容至10ml，室温

9、保存。 （八）10X RNA Loading Buffer（单染料）组分浓度 10mM EDTA 0.25（W/V） 溴酚蓝0.25（W/V） 二甲苯腈蓝FF50（V/V） 甘油配制量 10ml配制方法 1称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中0.5M EDTA（pH 8.0） 200l溴酚兰 25mg 二甲苯腈蓝FF 25mg2向离心管中4mlDEPC处理水，充分搅拌溶解。3加入5ml甘油混匀，用DEPC处理水定容至10ml，室温保存。三，分子生物学常用试剂 （一），氨苄青霉素组分浓度 100mg/ml 氨苄青霉素配制量 50ml配制方法 1称取5g Ampicillin置于50ml塑料离心

10、管中。2加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。30.22m滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于20保存。（二），卡那霉素组分浓度 50mg/ml卡那霉素配制量 50ml配制方法 1称取2.5g 卡那霉素置于50ml塑料离心管中。2加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。30.22m滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于20保存。（三）RNase A组分浓度 10mg/ml RNase A 配制量 50ml配制方法 1取0.5g RNase A置于50ml塑料离心管中。2加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。3100煮沸15min,缓慢冷却至

11、室温，小份分装（1ml一管）后，置于20保存。（四）IPTG组分浓度 24mg/ml IPTG 配制量 50ml配制方法 1称取1.2g IPTG置于50ml塑料离心管中。2加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。3用0.22m滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于20保存。（五）X-Gal组分浓度 20mg/ml X-Gal 配制量 50ml配制方法 1称取1g X-Gal置于50ml塑料离心管中。2加入40mlDMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解之后定容至50ml。3小份分装（1ml一管）后，置于20保存。（六）DTT组分浓度 1M DTT 配制量 10ml配制方法 1称

12、取1.54g DTT置于15ml塑料离心管中。2加入8ml的10mM NaAc（pH5.2），充分混合溶解之后定容至10ml。3用0.22m滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于20保存。（七）EDTA溶液组分浓度 0.5M EDTA配制量 1L配制方法 1 称取186.1g Na2EDTA2H2O置于1L烧杯中。2 加入800ml的去离子水，置于磁力搅拌器上充分搅拌。3 用NaOH调节调节pH值至8.0（约20gNaOH），当pH接近8.0时， EDTA方可完全溶解，加入去离子水定容至1L。4小份分装后，高温高压灭菌，室温保存。四，于定量PCR检测的SYBRGreen I 核酸染料 采

13、用琼脂糖电泳或聚丙烯酰胺电泳方法检测双链DNA时，SYBRGreen I最灵敏的荧光染料，当其结合到核酸上时，会产生很强的荧光及高量子产额，DNA/SYBRGreen I复合物的量子产额约为0.8。由于与核酸结合后能产生很强的信号，背景极低，并且对核酸的亲和力高，因此SYBR染料可在低浓度条件下使用。SYBRGreen I的最低检出限：20pg DNA（254nm）；60pg DNA（300nm 紫外透射）；此外，SYBRGreen I还可以用于检测寡核苷酸（1-2ng，300nm紫外透射），比EB灵敏20至100倍。 SYBRGreen I用于电泳检测DNA时，既可预染，也可电泳后再进行染色

14、。SYBRGreen I用于琼脂糖电泳检测DNA后，可直接将DNA转移至膜上，进行后续核酸印迹杂交反应。此外，SYBRGreen I与DNA的结合对多种常用的限制性内切酶活性无抑制作用，可直接进行消化或连接。 SYBRGreen I主要用于溶液中DNA的定量，特别适用于荧光定量PCR检测（即实时PCR）。SYBRGreen I原液是无水DMSO配制10,000倍浓缩液。配制工作液时需用TAE、TE或TBE缓冲液。 SYBRGreen I应避光存放，原液保存于20；工作液保存于4，最好存于密封聚丙烯容器。 图示为DNA分子量标准电泳SYBR GREEN I染色图。本品为美国MP公司生产 规格、价格如下：