光激化学发光技术介绍(课堂PPT)课件

1、Light Initiated Chemiluminescence Assay光激化学发光（LiCA）1光激化学发光（LiCA）介绍以高分子微粒为基础两种微粒近距离离子氧能量传递主要特点：高灵敏度低本底稳定均相免洗广泛应用于生物分子间的相互作用2微粒的组成感光微粒内含感光化合物发光微粒内含发光化合物和镧系元素微粒直径188nm，表面覆盖水凝胶共价连接增大的表面积成百上千个生物分子，捕获目标分子3LiCA发光原理核心原理是能量的近距离转移转移的介质是高能态离子氧红色激光680nm照射，感光微粒释放离子氧（4微秒），传播直径200nm，发光微粒（520618nm），高能级的光反应的基础有赖于两种微

2、粒的相互接近反应体系中，微粒的浓度很低，碰撞机率很低，本底信号微弱4原理 (1)发射光520-620 nm发光微球1O2AB激发光680 nm感光微球200nm5原理 (2)激发光680 nm感光微球A发光微球CO2-6LiCA的技术特点（一）高灵敏度信号产生逐级放大的结果每个感光微粒释放出近6万个离子氧离子氧作用于二甲基噻吩，产生大量紫外光紫外光激发镧系元素 实际检测能力为10-15摩尔 理论检测能力为10-18摩尔7LiCA的技术特点（二）低本底时间分辨模式采集光信号（延迟150 ms），天然荧光的寿命小于100 ns采用680 nm红光激发，生物样品中的荧光物质不敏感发射光的波长比激发光

3、的波长短，能量更高，有别于荧光，有效避免荧光物质干扰8稳定均相环境使反应更充分免洗操作杜绝随机误差和交叉污染感光和发光的有机分子受到微粒的保护，环境稳定和安全溶液中的氧浓度是一个常数不易受到pH值、离子强度和温度的影响LiCA的技术特点（三）9临床免疫的各项检测生命科学的基础研究新药的筛选标记简便检测过程简单广泛应用10基本包被模式GG-Streptavidin（SA） FG- Antibody（Ab）11基本反应模式biotin-antigenprimary Absecondary Ab (or protein A, G, LA)12应用类型配体受体激酶蛋白蛋白免疫蛋白酶蛋白DNA13配体受

4、体(1)TNFa-sTNFR1Biotinanti-TNFR1 IgGFG -TNFaProtein A-sTNFR114配体受体(1)TNFa-sTNFR1GG-SABiotinanti-TNFR1 IgGFG -TNFaProtein A-sTNFR115配体受体(1)TNFa-sTNFR1GG-SABiotinanti-TNFR1 IgGFG -TNFaProtein A-sTNFR116配体受体(2)环磷酸腺苷 cAMPBiotinFG- cAMPanti-cAMP-17配体受体(2)环磷酸腺苷 cAMPGG-SABiotinFG- cAMPanti-cAMP-18激酶AktBioti

5、nanti-Gsk3 IgGFG -Gsk3Protein A-19激酶AktBiotinanti-Gsk3 IgGFG -Gsk3Protein A-20激酶AktGG-SABiotinanti-Gsk3 IgGFG -Gsk3Protein A-Akt磷酸化21激酶AktGG-SABiotinanti-Gsk3 IgGFG -Gsk3Protein A-Akt22蛋白蛋白BiotinFG -p53Anti-GST-p53/HDM2HDM2-GST23蛋白蛋白GG-SABiotinFG -p53Anti-GST-p53/HDM2HDM2-GST24免疫(1)肿瘤坏死因子 TNFaBiotin

6、FG- anti-TNFaanti-TNFa-TNFa25免疫(1)肿瘤坏死因子 TNFaGG-SABiotinFG- anti-TNFaanti-TNFa-TNFa26免疫(2)Biotinanti-TNFaFG -anti-TNFaProtein A-TNFa肿瘤坏死因子 TNFaGG-SA27免疫(2)GG-SABiotinanti-TNFaFG -anti-TNFaProtein A-TNFa肿瘤坏死因子 TNFa28蛋白酶(1)GG-SABiotinFG - substrateanti-digoxigenin-组织蛋白酶 Cathepsin D - digoxigenin Cathe

7、psin D 水解29蛋白酶(2)ACEBiotinFG- angiotensin Ianti-angiotensin II-ACE切割30蛋白酶(2)ACEGG-SABiotinFG- angiotensin I Ianti-angiotensin II-31蛋白DNAERa-DNABiotinFG -ERaanti-digoxigenin-digoxigeninDNA32蛋白DNAERa-EREGG-SABiotinFG -ERaanti-digoxigenin-digoxigeninDNA33当前成功应用实例34HBsAgGG-SABiotin -Anti-HBsAnti-HBs-FGHBsAg35Anti-HBsGG-SA Biotin-HBsAgFGHBsAg-Anti-HBs36HBeAgGG-SABiotinFG -Anti-HBeAnti-HBe-HBeAg37Anti-HBeGG-SABiotinFG -Anti-HBeAnti-HBe-中和HBeAgSample Anti-HBe38Anti-HBcGG-SABiotinFG -HBcAgAnti-HBc-Anti