药物分析学：各论第二章 芳胺类药物

1、各论 第二章 含氮类药物的分析有机含氮类药物的分类第一节 芳胺类药物的分析1、对氨基苯甲酸酯结构通式（1）主要化学性质芳伯氨基：显重氮化-偶合反应酯键或酰胺键：水解反应脂烃胺侧链叔胺氮原子：弱碱性（2）典型药物 2、芳酰胺类药物结构通式（1）主要化学性质水解后芳伯氨基特性水解产物易酯化酚羟基的特性(对乙酰氨基酚)弱碱性：脂烃胺侧链叔胺氮原子具有碱性非水滴定法与金属离子发生沉淀反应（2）典型药物3、鉴别（1）重氮化-偶合反应（盐酸普鲁卡因）芳伯氨基或潜在芳伯氨基，均可发生重氮化反应，生成的重氮盐可与碱性-萘酚偶合生成有色的偶氮染料。示例1-1 苯佐卡因和盐酸普鲁卡因的芳香第一胺类鉴别试验：取供试

2、品约50mg，加稀盐酸1ml，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mol/l亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。（2）水解产物反应(盐酸普鲁卡因) 盐酸普鲁卡因碱水解可生成二乙氨基乙醇蒸汽均有碱性；苯佐卡因水解后生成乙醇可发生碘仿反应。盐酸普鲁卡因的鉴别方法：取本品约0.1g，加水2ml溶解后，加10%氢氧化钠溶液1ml，即生成白色沉淀(普鲁卡因)；加热，变为油状物(普鲁卡因)；继续加热，发生的蒸气(部分普鲁卡因水解，生成溶于水的对氨基苯甲酸钠，以及挥发性的二乙氨基乙醇)能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失(全部水解，生成可溶于水的对氨基苯

3、甲酸钠)后，放冷，加盐酸酸化，即析出白色沉淀(对氨基苯甲酸)。此沉淀能溶于过量的盐酸。（3）与重金属离子反应盐酸利多卡因的鉴别方法:取本品0.2g，加水20ml溶解后，取溶液2ml，加硫酸铜试液0.2ml与碳酸钠试液1ml，即显蓝紫色；加三氯甲烷2ml，振摇后放置，三氯甲烷层显黄色。（4）酚羟基(对乙酰氨基酚)（5）制备衍生物测定熔点eg. 盐酸丁卡因（6）紫外吸收光谱特征eg. 盐酸布比卡因（7）红外吸收光谱eg. 盐酸普鲁卡因的红外吸收图谱(氯化钾压片)4、杂质检查eg. 盐酸普鲁卡因(对氨基苯甲酸) 杂质来源：水解产生对氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇 结果导致注射液变黄、疗效下降、毒性增加原料

4、药及注射用灭菌粉末中杂质限量 ：0.5% 注射液中杂质限量 ：1.2%检查方法：HPLC 杂质对照品法5、含量测定（1）亚硝酸钠滴定法原理：芳伯氨基药物在酸性溶液中与亚硝酸钠定量反应，生成重氮盐，用永停法或外指示剂法指示反应终点。永停滴定法： 铂铂电极系统。用亚硝酸钠液滴定，终点前，溶液中无亚硝酸，线路无电流通过，电流计指针指零。终点时溶液中有微量亚硝酸存在，电极即起氧化还原反应，线路中遂有电流通过，此时电流计指针突然偏转，并不再回复，即为终点。外指示剂法：*常用碘化钾淀粉糊剂或指示液，滴定到达终点时，稍过量的亚硝酸钠在酸性溶液中氧化碘化钾，析出的碘遇淀粉即显蓝色（2）非水溶液滴定法 基于盐酸

5、丁卡因、盐酸利多卡因和盐酸布比卡因侧链烃胺氮具有弱碱性。加冰醋酸20ml与醋酐20ml溶解后，照电位滴定法，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定第二节 苯乙胺类药物的分析1、苯乙胺类药物基本结构肾上腺素（1）主要化学性质烃氨基侧链(仲胺)：弱碱性；酚羟基：易氧化，可与金属离子络合呈色；手性碳原子：光学活性(具有旋光活性)。（2）典型药物2、鉴别（1）与三氯化铁的反应(邻苯二酚) （2）氧化反应（3）与甲醛硫酸反应（4）双缩脲反应（5）Rimini反应脂肪伯氨基的专属反应；丙酮不含有甲醛（6）吸收光谱特征 紫外；红外化学性质的比较3、特殊杂质的检查（1）酮体检查生产工艺：酮体氢化还原制得，若氢

6、化不完全则引入酮体杂质，所有的典型药物中都要检查检查的原理：酮体在310nm处有紫外吸收而药物没有。（2）光学纯度检查大多数苯乙胺类拟肾上腺素药物分子结构中存在手性碳原子，通过比旋度测定控制药物的质量（3）有关物质的检查盐酸去氧肾上腺素和硫酸沙丁醇等，TLC主成份自身对照法，不得更深(0.5%) HPLC离子对色谱法4、含量测定原料：非水溶液滴定法、溴量法制剂：比色法、提取容量法、紫外分光光度法、高效液相色谱法（1）非水滴定法（非水溶液碱量法）原理：在冰醋酸中碱性加强条件溶剂：冰醋酸；滴定液：高氯酸；指示剂：结晶紫；加入醋酸汞的目的：消除氢卤酸的干扰终点判定：指示剂蓝绿色、电位终点（2）比色法

7、 利用分子结构中的酚羟基与铁离子络合呈色，测定盐酸异丙肾上腺素和盐酸多巴胺注射液；利用重氮化-偶合反应呈色，测定盐酸克伦特罗栓剂。（3）HPLC法：本法主要用测定本类药物的制剂及体内药物动力学研究。（4）亚硝酸钠法盐酸克仑特罗分子结构中含有芳伯氨基，在酸性溶液中可与亚硝酸钠定量发生重氮化反应，生成重氮盐，可用永停滴定法（5）溴量法利用分子结构中的酚羟基的邻、对位活泼氢能与过量溴发生定量取代反应，再用碘量法测定剩余剩余的溴。（掌握指示剂：淀粉，前面已讲过）练习题1盐酸普鲁卡因注射液中检查的特殊杂质是（ D）A.水杨醛 B. 间氨基酚 C.水杨酸 D.对氨基苯甲酸 E. 氨基酚2对乙酰氨基酚中检查

8、的特殊杂质是 (C)A.水杨醛 B. 间氨基酚 C. 对氨基酚 D.苯甲酸 E.苯酚3肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素中检查的特殊杂质是 (D)A.水杨醛 B. 间氨基酚 C. 对氨基酚 D.酮体 E. 苯甲酸第四节 苯并二氮杂类药物的分析一、结构与性质代表药物：二、鉴别试验(一) 化学鉴别试验1、沉淀反应阿普唑仑 + 遇硅钨酸白色沉淀，药典中也用于鉴别。2、水解后呈芳伯胺反应 氯氮卓和奥沙西泮，其反应如下：3、硫酸-荧光反应 本类药物溶于硫酸后，在紫外光（365nm）下，显不同颜色的荧光。例如：地西泮黄绿色艾司唑仑天蓝色4、分解产物的反应 本类药物多为有机氯化合物，用氧瓶燃烧法破坏，显氯化物反应。

9、Ch.P用于地西泮和三唑仑药物的鉴别。5、氯化铜焰色反应分子结构中含有氯元素的药物，在铜网上燃烧发出CuCl2绿色火焰。此反应药典未用于本类药物鉴别。（二）紫外特征吸收和红外吸收光谱红外吸收光谱：已用于地西泮、阿普唑仑、艾司唑仑、盐酸氟西泮、氯硝西泮和奥沙西泮的鉴别。（三）TLC法1、常用的五种苯并二氮杂卓类药物的TLC法 按常规法点样10l于硅胶G薄层板上，以苯-丙酮（3 ：2）为展开剂,饱和15min，用上行法展开15cm，挥发溶剂，用稀硫酸喷雾，于105干燥30min，置紫外灯下检视荧光斑点。2、酸水解产物的TLC法 利用苯并二氮杂卓类药物经酸水解产生的二苯甲酮衍生物进行鉴别。由于不同的

10、苯并二氮杂卓类药物水解后可能会获得相同的二苯甲酮衍生物，因此本法的专属性较差。三、特殊杂质检查（一）有关物质检查Ch.P 收载的八种本类药物，除氯氮卓外，其余均作此项检查。其检查方法除了三唑仑采用GC法外，其余均用TLC法进行检查。USP(24)和BP(2000)中对氯氮卓都规定了此项检查，而且均用TLC法进行检查。1、地西泮中有关物质的检查地西泮在合成过程中因其副反应，可能引入N-去甲基苯甲二氮卓及化学结构不清的有关物质，可采用TLC法中的高低浓度对比法进行检查。2、氯氮卓中有关物质的检查USP(24)用TLC法检查氯氮卓中的有关物质，并规定其分解产物2-氨基-5-氯-2-苯甲酮含量不得 过

11、0.01%；中间体7-氯-1，3-二氢-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮杂卓-2-酮-4-氧化物含量不得过0.1%。3、氯氮卓中有关物质的反相高效液相色谱法（二）降解产物的检查地西泮注射液列入此项检查，因本品在贮藏过程中有可能分解成2-甲氨基-5-氯-二苯甲酮等杂质。采用HPLC法进行检查。第五节 吡啶类药物的分析一、结构与性质1、基本结构与代表药物吡啶类药物均含吡啶环，基本结构为：2、主要理化性质（1）吡啶环弱碱性：非水碱量法测定含量或沉淀反应鉴别吡啶环的开环反应（2）二氢吡啶环还原性：氧化还原反应鉴别或氧化还原滴定法测定含量不稳定性：其分析应避光操作，同时应检查引入的特殊杂质（3）取代基异

12、烟肼：位上酰肼基 还原性：氧化还原反应鉴别或氧化还原滴定法含量测定 可与某些羰基试剂发生缩合反应，鉴别或比色法含量测定 酰胺键易水解引入特殊杂质游离肼尼可刹米：位上酰胺基 易水解，遇碱水解后，释放出具有碱性的乙胺，能使湿润的红色石蕊试纸变蓝色，故可以此进行鉴别。硝苯地平：硝基具有氧化性光谱特征二、鉴别试验1、吡啶环的反应（1）吡啶环的开环反应本反应适用于吡啶环的或位上的氢被羧基衍生物所取代的吡啶类药物。 戊烯二醛反应（knig反应）eg. 尼可刹米的鉴别：取本品1滴，加水50ml，摇匀，分取2ml，加溴化氰试液2ml与2.5苯胺溶液3ml，摇匀，溶液渐显黄色。二硝基氯苯反应eg. BP异烟肼注

13、射液的鉴别：取本品适量（约相当于异烟肼25mg），加乙醇5ml，加硼砂0.1g及5的2,4-二硝基氯苯乙醇溶液5ml，水浴蒸干，继续加热10min，残渣加甲醇10ml搅拌溶解后，即显紫红色沉淀反应eg. 尼可刹米的鉴别：取本品2滴，加水1ml，摇匀，加硫酸铜试液2滴与硫氰酸铵试液3滴，即生成草绿色沉淀。2、二氢吡啶的解离反应二氢吡啶类药物与碱作用，二氢吡啶环1,4-位氢均可发生解离，形成p-共轭而发生颜色变化，可用于鉴别。eg. 硝苯地平的鉴别：取本品约25mg，加丙酮1ml溶解，加20氢氧化钠溶液35滴，振摇，溶液显橙红色。3、酰肼基的反应（1）还原反应eg. 异烟肼的鉴别：取本品约10mg

14、，置试管中，加水2ml溶解后，加氨制硝酸银试液1ml，即发生气泡与黑色浑浊，并在试管壁上生成银镜。（2）缩合反应4、分解产物的反应eg. 尼可刹米的鉴别：取本品10滴，加氢氧化钠试液3ml，加热，即发生二乙胺的臭气，能使湿润的红色石蕊试纸变蓝色。5、重氮化-偶合反应eg. BP硝苯地平的鉴别：取本品25mg，加10ml混合溶液（盐酸水乙醇=1.53.55），温热，加入锌粒0.5g，放置5min，滤过，滤液加亚硝酸钠溶液（10g/L）5ml，放置2min，再加入氨基磺酸铵溶液（50g/L）2ml，摇匀，加入盐酸萘乙二胺溶液（5g/L）2ml，即显红色（持续5min以上）。6、紫外光谱与红外光谱7、高效液相色谱法三、特殊杂质检查1、异烟肼中游离肼的检查杂质来源：原料残存、降解产生检查方法：TLC四、含量测定1、氧化还原滴定法（1）溴酸钾滴定法异烟肼与