化学因素抑杀菌效果评价(共17页)

1、中央民族大学生命与环境科学学院微生物综合设计性实验报告 2015年1月4日化学(huxu)抑杀菌剂的效果(xiogu)评价 青霉素链霉素抑菌效果(xiogu)评价杜盈雪 中央民族大学 北京市海淀区 100081摘要：目的 本实验以大肠杆菌、白色葡萄球菌为实验材料，选取青霉素、链霉素两种抗生素为化学抑菌剂，通过观察抑菌圈的大小确定抗生素的有效浓度来判断抗生素的抑菌效果，并进行同一抗生素对不同菌种抑菌效果的比较以及不同抗生素对同一菌种抑菌效果的比较。方法 本实验通过滤纸片法来确定两种抗生素对两种菌种的最小抑制细菌浓度MIC来判断抗生素的抑菌效果。并通过挑取抑菌圈内的菌种于新的培养基继续培养的方法判

2、断抗生素的效果是抑菌还是杀菌。结果 链霉素对白色葡萄球菌的最小抑菌浓度是12g/ml；链霉素对大肠杆菌的最小抑菌浓度是10g/ml。青霉素对白色葡萄球菌的最小抑菌浓度为500g/ml；青霉素对大肠杆菌的最小抑菌浓度为550 g/ml。链霉素青霉素对大肠杆菌和白色葡萄球菌均为抑菌作用。结论 青霉素和链霉素均为作用强度中等的抗生素，链霉素的抑菌作用强于青霉素。关键词：大肠杆菌、白色葡萄球菌、抗生素、最小抑制细菌浓度MIC，抑杀菌 Evaluation of bactericide effect of chemical inhibition Evaluation of bactericide eff

3、ect of penicillin and streptomycin Du yingxue Minzu University of China Haidian District, Beijing 100081Abstract：Objective In this experiment, We make escherichia coli, Staphylococcus aureus as experiment materials, the selection of penicillin, streptomycin two antibiotics as chemical antimicrobial

4、agent,in order to determine the inhibitory effect of antibiotics by observing the size of bacteriostatic circle determine the effective concentration of the antibiotics, and compared the same antibiotic bacteriostatic effect on different species and different antibiotic bacteriostatic effect on the

5、same strain comparison . Methods This experiment by filter paper method to determine two kinds of antibiotics against two strains bacteria MIC to determine the minimum inhibitory concentration of the inhibitory effect of antibiotics. Method for judging the antibiotic and bacteriostatic ring through

6、the selected within the strains in the new culture medium to culture effect is bacteriostatic or bactericidal. Results The minimum inhibitory concentration of streptomycin on Staphylococcus aureus is 12 g/ml; minimum inhibitory concentration of streptomycin on Escherichia coli is 10 g/ml. The minimu

7、m inhibitory concentrations of penicillin on white staphylococcus is 500 g/ml; the minimum inhibitory concentrations of penicillin on Escherichia coli is 550 g/ml. Penicillin streptomycin were bacteriostatic effect on Escherichia coli and Staphylococcus aureus . Conclusions Penicillin and streptomyc

8、in were medium intensity effect of antibiotics, streptomycin. is stronger than penicillin in bacteriostatic action . Keywords : Escherichia coli , Staphylococcus albus , Antibiotics , MIC , Inhibiting or killing bacteria前言(qin yn)【研究(ynji)背景】目前，人们在日常生活中经常使用抗生素，对于抗生素的抗菌机制的研究已经以非常深入，对于滤纸(lzh)片法的操作技术已经

9、比较娴熟。本实验对常用抗生素青霉素、链霉素对大肠杆菌和白泽葡萄球菌的抑菌效果进行评价。【研究目的】本实验通过探究两种抗生素对两种菌的MIC，比较青霉素、链霉素对大肠杆菌、白色葡萄球菌的抑菌作用的差异，并且进行不同抗生素对同一菌种抑菌效果的比较以及同一抗生素对不同菌种抑菌效果的比较。通过观察培养基内是否有菌落形成判断青霉素、链霉素对两种菌的作用是杀菌还是抑菌。【解决方法】抗生素效价的测定是生产和药检部门都必须做的，测定方法都是严格按照国家药典规定的方法进行。本实验使用的滤纸片法和国家药典中规定的管碟法相类似，先得出一个大致的有效浓度范围，然后继续在有效浓度范围中找出最小抑菌浓度，最后通过挑取抑菌

10、效果最好的抑菌圈内的菌种继续培养，观察继续培养的培养基内是否有菌落产生来判断抗生素是抑菌还是杀菌。1.材料和方法1.1 实验材料菌种：大肠杆菌，白色葡萄球菌。化学药剂：青霉素（10mg/mL），链霉素（10mg/mL）。1.2 实验原理1.2.1 关于抗生素抗生素是由微生物（包括细菌、真菌、放线菌属）产生、能抑制或杀灭其他微生物的物质。抗生素既不参与细胞结构，也不是细胞内的贮存性养料，对产生菌本身无害，但对某些微生物有拮抗作用，是微生物在种间竞争中战胜其他微生物保存自己的一种防卫机制。1.2.2 杀菌(sh jn)机制霉素作用于细菌体内核糖体30s亚单位(dnwi)，抑制细菌蛋白质的合成，破坏

11、细菌细胞膜的完整性。对革兰氏阳性菌，阴性菌都有效果；青霉素抑制细胞壁的合成(hchng)，一般对革兰氏阳性菌更有效果。1.2.3 关于滤纸片法适用条件不易挥发的化学药剂工作原理利用滤纸作为药剂的承载体，放置于含有待检测菌种的平板上，使药剂在琼脂中扩散。待检药剂在不同浓度下对细菌的抑菌效力以产生可见的抑菌圈作为评价标准。以抑菌圈直径为测定指标，抑菌圈直径越大，该药剂的杀菌能力越强。1.2.4 关于结果的判定1.以直径为6mm为标准：抑菌圈直径7mm，有抑制细菌作用；抑菌圈直径15mm，高度敏感药物。2.有效浓度在100 mg/L （100g/mL）以上属于作用强度较低的抗生素； 有效浓度在l m

12、g/L （0.1g/mL）以下是作用强度高的抗生素。1.3 试剂与仪器仪器：高压灭菌锅，恒温培养箱，鼓风干燥箱，超净工作台，移液器，微波炉，打孔器等。试剂及其他：生理盐水，NaOH(1mol/L)，HCl(1mol/L)， 滤纸片（=6mm），酒精灯，平板，4支移液管，（1ml），试管，接种环，涂布棒，镊子，烧杯，三角瓶，玻璃棒等1.4 培养基营养琼脂培养基（牛肉膏1.5g,蛋白胨5g，NaCl2.5g,琼脂9g,水500ml,PH7.07.2），供菌种生长。1.5 实验(shyn)方法1.5.1 灭菌(mi jn)方法培养皿灭菌（培养皿筒在鼓风干燥箱中灭菌3小时，温度为160度），移液管、涂

13、布棒包扎(boz)好后与培养皿筒同时灭菌，用打孔器100个滤纸片，包好，配置500ml营养琼脂培养基（牛肉膏1.5g,蛋白胨5g，NaCl2.5g,琼脂9g,水500ml,PH7.07.2），配制培养基后，分装于6只试管（每管6ml）及三角瓶，包扎，胶头及枪头，7只试管（每管10ml0.9生理盐水）把上述材料121灭菌20min。1.5.2 药品稀释采用二倍稀释法：将抗生素稀释为100 g/mL，50 g/mL，25 g/mL，12.5 g/mL，6.25 g/mL或采用等距稀释法将抗生素稀释到所需浓度。1.5.3 扩繁趁热拉斜面，稍微冷却倒平板，冷却至室温后，在酒精灯附近，在拉好的斜面上用划

14、线法扩繁，在37恒温培养箱中培养24h。1.5.4 菌悬液的制备将灭菌后的5ml左右的生理盐水分别倒入大肠杆菌，白色葡萄球菌的斜面培养基中，用接种环搅动，使细菌均匀分布生理盐水中。1.5.5 涂布法接种 涂布接种，振荡菌悬液，用移液管吸取0.2ml的菌悬液于培养基中，用涂布棒涂抹均匀。1.5.6 滤纸片的制作在灭菌后的洁净培养皿里，用规格为20L的移液器分别吸取20L不同种类不同浓度的药品，分别打在滤纸片上，控干一定时间。按照滤纸片粘贴示意图进行操作。2. 结果与分析2.1 两种抗生素第一次实验的结果图1 两种抗生素第一次实验抑菌圈大小（滤纸片粘贴如图2所示）Figure 1 The bact

15、eriostatic ring size of two kinds of antibiotics in the first experiment 2.1.1 两种抗生素在100 、50、25 、12.5、6.25 （g/mL）下抑菌圈大小(dxio)的效果图图2 滤纸片粘贴示意图Figure 2 Schematic diagram of filter paper paste（A: 100g/ml B: 50g/ml C: 25g/ml D: 12.5g/ml E: 6.25g/ml）2.1.2 两种抗生素在100 、50、25 、12.5、6.25 （g/mL）下抑菌圈大小(dxio)的效果表

16、表1 青霉素第一次实验(shyn)抑菌圈大小Table 1 The bacteriostatic ring size of Penicillin in the first experiment抑菌圈 浓度（g/mL） 大小（mm） 菌种及标号 100 50 25 12.5 6.25大肠杆菌1 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0大肠杆菌2 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0平均值1 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0抗生素效果评价 无 无 无 无 无白色葡萄球菌1 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0白色葡萄球菌2 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0平均值2 6.0 6.0 6

17、.0 6.0 6.0抗生素效果评价 无 无 无 无 无由上表可知：青霉素对大肠杆菌和白色葡萄球菌的抑菌效果(xiogu)比较差表2 链霉素第一次实验(shyn)抑菌圈大小Table 2 The bacteriostatic ring size of Penicillin in the first experiment抑菌圈 浓度（g/mL） 大小（mm） 菌种及标号 100 50 25 12.5 6.25大肠杆菌1 21.0 17.0 15.0 9.0 6.0大肠杆菌2 20.0 19.0 15.0 9.0 6.0平均值1 20.5 18.0 15.0 9.0 6.0抗生素效果评价 高度敏感

18、高度敏感 中度敏感 低度敏感 无白色葡萄球菌1 17.0 15.0 12.0 8.0 7.0白色葡萄球菌2 17.0 15.0 12.0 8.0 6.0平均值2 17.0 15.0 12.0 8.0 6.5抗生素效果评价 高度敏感 中度敏感 中度敏感 低度敏感 无由上表可知：链霉素对大肠杆菌(d chn n jn)的有效浓度在12.5g/ml25g/ml之间；链霉素对白色葡萄球菌的有效浓度在12.5g/ml25g/ml之间。2.1.3 链霉素对大肠杆菌和白色葡萄球菌抑菌效果比较图3链霉素对大肠杆菌和白色(bis)葡萄球菌抑菌效果比较Figure 3 Comparison of streptom

19、ycin on Escherichia coli and Staphylococcus albus antimicrobial effect由图可知：链霉素对大肠杆菌和白色(bis)葡萄球菌的抑菌效果无明显差异。2.1.4 青霉素链霉素对大肠杆菌(d chn n jn)的抑菌效果比较图4青霉素链霉素对大肠杆菌的抑菌效果的比较Figure 4 Comparison of antibacterial activity of penicillin streptomycin on Escherichia coli.由图可知：链霉素对大肠杆菌的抑菌效果明显高于青霉素。2.1.5 青霉素链霉素对白色葡萄球

20、菌抑菌效果的比较图5青霉素链霉素对白色葡萄球菌(p to qi jn)抑菌效果的比较Figure 4 Comparison of penicillin streptomycin on bacteriostasis effect of Staphylococcus albus由图可知：链霉素对白色(bis)葡萄球菌的抑菌效果明显高于青霉素。2.2 两种抗生素第二次试验(shyn)的结果2.2.1 两种抗生素第二次试验抑菌圈的效果图图7 滤纸片粘贴示意图Figure 7 Schematic diagram of filter paper paste图6 两种抗生素第二次实验抑菌圈大小（滤纸片粘贴如

21、图7所示）Figure 6 The bacteriostatic ring size of two kinds of antibiotics in the second experiment2.2.2 两种抗生素第二次试验(shyn)抑菌圈效果表表3 青霉素第二次实验(shyn)抑菌圈大小Table 3 The bacteriostatic ring size of Penicillin in the second experiment抑菌圈 浓度（g/mL） 大小（mm） 菌种及标号 1000 800 600 400 200大肠杆菌1 13.0 10.0 7.0 6.0 6.0大肠杆菌2 1

22、4.0 11.0 8.0 6.0 6.0平均值1 13.0 10.5 7.5 6.0 6.0 抗生素效果评价 中度敏感 中度敏感 低度敏感 无 无白色葡萄球菌1 14.0 12.0 8.0 6.0 6.0白色葡萄球菌2 13.0 12.0 9.0 6.0 6.0平均值2 13.5 12.0 8.5 6.0 6.0抗生素效果评价 中度敏感 中度敏感 低度敏感 无 无由上表(shn bio)可知：青霉素对白色葡萄球菌的最小抑菌浓度在400 g/ml600 g/m之间；青霉素对大肠杆菌的最小抑菌浓度在400 g/ml600 g/ml之间。表4 链霉素第二次实验抑菌圈大小Table 4 The bac

23、teriostatic ring size of Penicillin in the second experiment抑菌圈 浓度（g/mL） 大小（mm） 菌种及标号 16 14 12 10 8大肠杆菌1 11.0 10.0 9.0 7.0 6.0大肠杆菌2 13.0 11.0 8.0 7.0 6.0平均值1 12.0 10.5 8.5 7.0 6.0抗生素效果评价 中度敏感 中度敏感 低度敏感 低度敏感 无白色葡萄球菌1 11.0 9.0 9.0 7.0 6.0白色葡萄球菌2 10.0 10.0 8.0 7.0 6.0平均值2 10.5 9.5 8.5 7.0 6.0抗生素效果评价 中度

24、敏感 低度敏感 低度敏感 低度敏感 无由上表(shn bio)可知：链霉素对白色葡萄球菌(p to qi jn)的最小抑菌浓度在12 g/ml左右(zuyu)；链霉素对大肠杆菌的最小抑菌浓度在10 g/ml左右。2.2.3 青霉素对大肠杆菌和白色葡萄球菌抑菌效果的比较图8青霉素对大肠杆菌和白色葡萄球菌抑菌效果的比较Figure 8 Comparison of the effect of penicillin on Escherichia coli and Staphylococcus albus antimicrobial 由图可知：青霉素对大肠杆菌和白色葡萄球菌的抑菌效果差异不明显。2.3

25、两种抗生素第三次实验结果2.3.1 两种抗生素第三次试验抑菌圈效果图图9 两种抗生素第三次实验抑菌圈大小（滤纸片粘贴如图10所示）Figure 9 The bacteriostatic ring size of two kinds of antibiotics in the third experiment图10 滤纸片粘贴示意图Figure 10 Schematic diagram of filter paper paste2.3.2 两种抗生素第三次试验(shyn)抑菌圈效果表表5 青霉素第三次实验(shyn)抑菌圈大小Table 5 The bacteriostatic ring siz

26、e of Penicillin in the thrid experiment抑菌圈 浓度（g/mL） 大小（mm） 菌种及标号 600 550 500 450 400大肠杆菌1 9.0 8.0 7.0 6.0 6.0大肠杆菌2 11.0 7.0 7.0 6.0 6.0平均值1 10.0 7.5 7.0 6.0 6.0 抗生素效果评价 中度敏感 低度敏感 低度敏感 无 无白色葡萄球菌1 9.0 8.0 7.0 6.0 6.0白色葡萄球菌2 10.0 8.0 7.0 7.0 6.0平均值2 9.5 8.0 7.0 6.5 6.0抗生素效果评价 低度敏感 低度敏感 低度敏感 无 无由表可知(k z

27、h)：青霉素对白色(bis)葡萄球菌的最小抑菌浓度为500g/ml；青霉素对大肠杆菌(d chn n jn)的最小抑菌浓度为550 g/ml。表6 链霉素对大肠杆菌第三次实验抑菌圈大小Table 6 The bacteriostatic ring size of Penicillin in the thrid experiment抑菌圈 浓度（g/mL） 大小（mm） 菌种及标号 11 10.5 10 9.5 8大肠杆菌1 8.0 7.0 7.0 6.0 6.0大肠杆菌2 8.0 8.0 7.0 7.0 6.0平均值1 8.0 7.5 7.0 6.5 6.0抗生素效果评价 低度敏感 低度敏感

28、低度敏感 无 无由表可知：链霉素对大肠杆菌的最小抑菌浓度是10g/ml表7 链霉素对白色葡萄球菌第三次实验抑菌圈大小Table 7 The bacteriostatic ring size of Penicillin in the thrid experiment抑菌圈 浓度（g/mL） 大小（mm） 菌种及标号 13 12.5 12 11.5 10.5白色葡萄球菌1 8.0 7.0 7.0 6.0 6.0白色葡萄球菌2 9.0 8.0 7.0 7.0 6.0平均值2 8.5 7.5 7.0 6.5 6.0抗生素效果评价 低度敏感 低度敏感 低度敏感 无 无由表可知(k zh)：链霉素对大肠杆

29、菌(d chn n jn)的最小抑菌浓度是12 g/ml2.4 关于(guny)抑杀菌 A B C D图11 青霉素链霉素抑杀菌实验（A为青霉素对大肠杆菌，B为青霉素对白色葡萄球菌，C为链霉素对大肠杆菌，D为链霉素对白色葡萄球菌）Figure 11 The experiment about antibacterial of penicillin or streptomycin (A for penicillin on Escherichia coli , B for penicillin on Staphylococcus albus , C for streptomycin on Esche

30、richia coli , D for streptomycin on Staphylococcus albus )由图可知：链霉素青霉素对大肠杆菌和白色葡萄球菌均为抑菌作用。综上：链霉素对白色葡萄球菌的最小抑菌浓度是12g/ml；链霉素对大肠杆菌的最小抑菌浓度是10g/ml。2.青霉素对白色葡萄球菌(p to qi jn)的最小抑菌浓度为500g/ml；青霉素对大肠杆菌(d chn n jn)的最小抑菌浓度为550 g/ml。链霉素青霉素对大肠杆菌和白色(bis)葡萄球菌均为抑菌作用。3. 讨论(四号，黑体)3.1 关于杂菌的污染第一次试验大肠杆菌的培养基内有白色葡萄球菌污染，经分析的，我们

31、认为在操作时首先在制备菌悬液时，先制备的是白色葡萄球菌菌悬液，接种环上的白色葡萄球菌比较多，而灼烧不充分，导致大肠杆菌菌悬液有污染，其次是将滤纸片用镊子贴在培养基时，因此我们在第二次实验时进行了改进，得到了比较好的结果。3.2 细菌菌台的厚薄对抑杀实验结果的影响通过观察实验现象以及对比实验数据可以看出，细菌菌台较薄的培养基内抑菌圈的大小相比于菌台厚薄适宜的培养基内抑菌圈大小均明显较大，但抑菌圈比较模糊。如链霉素对白色葡萄球菌抑杀实验中第一天浓度为12.5g/ml的药剂的抑菌圈比第三天浓度为12.5g/ml的大，可能因为第一天的菌台厚度小，另外看别人的实验结果有的浓度小的比浓度大的抑菌圈还要大，菌台厚度不同应该是原因之一。3.3 空白对照的滤纸片表现出“假抑菌圈”本实验中用灭菌水浸泡的滤纸片本不该出现抑菌圈，但有的培养基内的空白滤纸片仍出现“假抑菌圈”，原因是在贴滤纸片时滤纸片上有很多灭菌水，贴到菌台上后将周围菌台冲到外围，形成了“假抑菌圈”。因此，实验过程中不论是贴空白滤纸片还是贴药剂浸泡的滤纸片都应先将滤纸片进行控干后再贴滤纸片。3.4 从原理分析结论青霉素对白色葡萄球菌的抑菌效果比大肠杆菌好的原