034-砷盐检查法

1、江西欧氏药业有限责任公司GMP文件文件名称神盐检查法页码1/7起草人审核人批准人起草日期审核日期批准日期颁发部门质量管理部生效日期文件编号SOP-ZL-FF-034-00分发部门质量管理部、质量控制室、档案室1目的规范规范药品神盐检查操作程序，确保检验工作质量。2范围适用于药品数量神盐（以AS计算）的限量检查。3职责QC主任、QC化验员。4内容4.1简述4.1.1神盐检查法中的第一法（古蔡氏法）用作药品中砷盐的限量检查；第二 法（二乙基二硫代氨基甲酸银法）既可检查药品中砷盐限量，又可测定含量；两 法并列，可根据需要选用。4.1.2古蔡氏法是利用金属锌与酸作用产生新生态的氢与药品中微量亚神酸盐

2、反应生成具有挥发性的神化氢，遇漠化汞试纸产生黄色至棕色的神斑，与同一条 件下定量标准神溶液所产生的神斑比较，以判定神盐的限量。4.1.3二乙基二硫代氨基甲酸银法是将生成的神化氢气体导入盛有二乙基二硫 代氨基甲酸银试液的管中，使之还原为红色胶态银，与同一条件下定量的标准神 溶液所制成的对照液比较，或在510nm的波长处测定吸收度，以判定含神盐的限 度或测定含量。4.2仪器与用具4.2.1第一法（古蔡氏法）按药典规定：有机玻璃旋塞D和E的孔径与导气管 C内径一致，以免生成的色斑直径不同，影响比色的准确度；B磨口塞，C管顶 端与D、E有机玻璃旋塞塞盖间应紧密吻合，以防神化氢泄漏。文件名称神盐检查法文

3、件编号SOP-ZL-FF-034-00页 码2/74.2.2第二法（二乙基二硫代氨基甲酸银法）按药典规定：B磨口塞应密闭， 以防神化氢泄漏；与标准磨口塞B相连的导气管C 一端长度应不低于80mm，便 于装醋酸铅棉花达80mm，另一端长度应不低于180mm，尖端内径不可超过1mm， 以保证产生的神化氢吸收完全；D管的标准管与样品管要一致，管内径，色泽， 刻线要相同。4.3试药与试液4.3.1标准神溶液 精密称取三氧化二神0.132g，置1000ml量瓶中，加20% 氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量的稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀释 至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量贮备液10ml，

4、置1000ml置瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀释 至刻度，摇匀，即得（每1ml相当于1.0ug的As）。4.3.2碘化钾试液：取碘化钾16.5g，加水使溶解成100ml，即得。本液应监 用新制。4.3.3酸性氯化亚锡试液：取氯化亚锡20g，加盐酸使溶解成50ml，滤过，即 得。本液配制后3个月即不适用。4.3.4乙醇制漠化汞试液：取漠化汞2.5g，加乙醇50ml，微热使溶解，即得。 本液应置玻璃塞瓶内，在暗处保存。4.3.5漠化汞试纸 取质地较疏松的中速定量滤纸条浸入乙醇制漠化汞试液 中，1小时后取出，在暗处干燥，即得。本试纸宜置棕色磨口塞玻璃瓶内保存。4.3.6锌粒 以能通过1号筛的细粒无神

5、锌为宜，如使用锌粒较大时，用量酌 情增加，反应时间亦应延长为1小时。4.3.7醋酸铅棉花 取脱脂棉，浸入醋酸铅试液与水的等容混合液中，湿透后， 沥去过多的溶液，并使之疏松，在100C以下干燥后，贮于磨口塞玻璃瓶中备用。 4.3.8二乙基二硫代氨基甲酸银试液 取二乙基二硫代氨基甲酸银0.25g，加氯 仿适量与三乙胺1.8ml，加氯仿至100ml，搅拉使溶解，放置过液，用脱脂棉滤 过，即得。本液应置棕色玻璃瓶中，密塞，置阴凉处保存。文件名称神盐检查法文件编号SOP-ZL-FF-034-00页 码3/74.4操作方法4.4.1第一法（古蔡氏法）4.4.1.1标准神斑的制备4.4.1.1.1装置的装备

6、 取醋酸铅棉花适量（60mg）撕成疏松状，每次少量， 用细玻璃棒均匀地装入导气管C中，松紧要适度，装管高度为6080mm。用玻璃 棒夹取漠化汞试纸1片（其大小能覆盖D顶端口径而不露出平面外为宜），置旋 塞D顶端平面上，盖住孔径，盖上旋盖E并旋紧。4.4.1.1.2精密量取标准神溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再加 上碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g， 立即将准备好的导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置2540C水浴中反应45分 钟，取出漠化汞试纸，即得。若供试品需经有机破坏后再行检神，则应精密量取标准神溶液2ml代替供试 品，照各该药品正文项

7、下规定的方法处理后，依法制备标准神斑。4.4.1.2检查法 取照该药品正文项下规定方法制成的供试液，置A瓶中，照 标准神斑的制备，自“再加碘化钾试液5ml”起依法操作。将生成的神斑与标准 神斑比较，即得。4.4.2第二法（二乙基二硫代氨基甲酸银法）4.4.2.1标准神对照液的制备4.4.2.1.1装置的准备 取醋酸铅棉花适量（6mg），撕成疏松状，每次少量， 用细玻璃棒均匀地装入导气管C中，松紧要适度，装管高度约80mm。精密量取 二乙基二硫代氨基甲酸银试液5ml置D管中。4.4.2.1.2精密量取标准神溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再加 碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5

8、滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g， 立即将准备好的导气管C与A瓶密塞，使生成的神化氢气体导入D管中，并将A 瓶置2540C水浴中反应45分钟，取出D管，添加氯仿至刻度，混匀，即得。若供试品需经有机破坏后再行检神，则应精密量取标准神溶液2ml代替供试文件名称神盐检查法文件编号SOP-ZL-FF-034-00页 码4/7品，照各该药品项下规定的方法同法处理后，依法制备标准神对照液。4.4.2.2检查法 准备好C管装置，取照该药品项下规定方法制成的供试液， 置A瓶中，照标准神对照液的制备，自“再加碘化钾试液5ml”起依法操作。将 所得溶液与标准神对照液同置白色背景上，从D管上方向下观察，比较即得

9、。5注意事项5.1所用仪器和试液等照本法检查，均不应生成神斑，或经空白试验至多生成 仅可辨认的斑痕。5.2新购置的仪器装置，在使用前应检查是否符合要求。可将所使用的仪器装 置依法制备标准神斑，所得神斑应呈色一致。同一套仪器应能辩别出标准神溶液 1.5ml与2.0ml所呈神斑的深浅。5.3制备标准神斑或标准神对照液，应与供试品检查同时进行。因神斑不稳定， 反应中应保持干燥及避光，并立即比较。标准神溶液应于实验当天配制，标准神 贮备液存放时间一般不宜超过一年。5.4第一法（古蔡氏法）反应灵敏度约为0.75ug （以As计），神斑色泽的深度 随神化氢的量而定，药典规定标准神斑为2ml标准神溶液（相当

10、于2ug的As） 所形成的色斑，此浓度得到的神斑色度适中，清晰，便于分辨。供试品规定含神 限量不同时，采用改变供试品取得量的方法来适应要求，而不采用改变标准神溶 液取量的办法。5.5药品中存在的微量神常以三价的亚神酸盐或五价的砷酸盐存在，五价状态 的神生成神化氢比三价神慢，故先加入碘化钾和氯化亚锡为还原剂，使五价神还 原为三价神。5.6如供试品中存在锑盐，将干扰神盐检查，所以本法不适用供试品为锑盐的 神盐检查。但在药典规定的实验条件下，100ug的锑存在不致于干扰测定。实验 中加入氯化亚锡不仅有效地抑制锑的干扰，防止锑化氢与漠化汞试纸作用生成锑 斑或与二乙基二硫代氨基甲酸银试液反应，干扰神盐检

11、查，还可与锌作用，在锌 粒表面形成锌锡齐，起去极化作用，从而使氢能均匀连续地发生，有利于神斑的文件名称神盐检查法文件编号SOP-ZL-FF-034-00页 码5/7形成。5.7供试品和锌粒中可能含有少量硫化物，在酸性溶液中产生HS气体，干扰 2实验，故用醋酸铅棉花吸收除去HS；因此，导气管中的醋酸铅棉花，要保持疏 2松、干燥，不要塞入近下端。5.8浸入乙醇制漠化汞试液的滤纸的质量，对生成神斑的色泽有影响，用定性 滤纸，所显神斑色调较暗，深浅梯度无规律；用定量滤纸质地疏松者，所显神斑 色调鲜明，梯度规律，因此，必须选用质量较好，组织疏松的中速定量滤纸；漠 化汞试纸一般宜新鲜制备。5.9锌粒大小影

12、响反应速度，为使反应速度及产生神化氢气体适宜，需选用粒 径为2mm左右的锌粒。反应温度一般控制在30左右，冬季可置温水浴中。如 反应太快，宜适当降低反应温度，使神化氢气体能被均匀吸收。5.10如供试品为铁盐，需先加酸性氯化亚锡试液，将高铁离子还原为低价铁而 除去十拢。如枸橼酸铁铵的砷盐检查。5.11有机药品中的砷盐检查 可溶于水的脂肪族有机酸如枸橼酸、乳酸及其盐 类，氨基己酸与葡萄糖酸钙等，一般可不经有机破坏而直接依法检查神盐；多数 环状结构的有机药物，因神与杂环分子可能以共价键结合，需先行有机破坏，否 则检出结果偏低或难以检出。有机破坏时，所用试剂的含神量如超过lug，除另 有规定外，应取同

13、量的试剂加入神标准液一定量，按供试品同样处理，制备标准 神斑，再与供试品所生成神斑的颜色比较。5.12如供试品为硫化物、亚硫酸盐或硫代硫酸盐等，则在酸性溶液中可生成大 量硫化氢或二氧化硫气体，干扰检查；可加硝酸使氧化成硫酸盐以除去干扰，如 硫代硫酸钠的砷盐检查。5.13在二乙基二硫代氨基甲酸银法中，需要加入一定量的有机碱以中和反应中 的二乙基二硫代氨基甲酸；USP X X II配制成0.5%二乙基二硫代氨基甲酸银的 毗啶溶液，其缺点是毗啶有恶臭；中国药典2000年版采用含1.8%三乙胺和0.25% 二乙基二硫代氨基甲酸银的氯仿溶液，呈色稳定性及试剂稳定性均好，低毒，无文件名称神盐检查法文件编号

14、SOP-ZL-FF-034-00页 码6/7臭，与神化氢产生的颜色在510nm的波长处有最大吸收。如遇室温低，按法操作， 标准神对照液不显色，可将D管置2540C水浴加温使显色。5.14二乙基二硫代氨基甲酸银试液在配制后两周内稳定。当供试液中含神（As） 0.757.5ug时显色反应的线性关系良好，2小时内稳定，重现性好。本法操作时 由于神化氢气体导入盛有准确5ml的二乙基二硫代氨基甲酸银试液中，在2540C水浴中反应45分钟后，有部分氯仿挥发，比色前应添加氯仿至5.00ml， 摇匀，比色。因二乙基二硫代氨基甲酸银试液带浅黄绿色，测吸收度时要用此试 液作空白。6计算6.1标准神溶液浓度的计算1

15、mol的三氧化二神质量为197.82g，含神（As） 2X74.92g，称取三氧化二神0.132g溶于1000ml溶液中配成的贮备液，每1ml含As量为:2 X 74.92 X0.132X 1000 n197.8X1000=0-10mg贮备液定量稀释100倍后所得标准神溶液，每1ml含As量为1.0ug。6.2神限量计算 进行限量检查时，取标准神溶液2.0ml制成对照液，与供试 品溶液在相同条件下处理比较神斑或吸收液颜色的深浅，从而确定神含量是否超 过规定，神限量可用下式计算:神限量%二X100%标准神溶液体积（ml） X标准神溶液浓度（g/ml）供试品量（g）如取标准神溶液2.0ml，标准神溶液浓度0.000001g/ml，供试品取样1.0g；则神限量%二2X0.0000010.0001X 100%=0.0002% （百万分之二）6.3供试品取样量计算如已知神限量为百万分之一，取用标准神溶液为 2.0ml，标准神溶液浓度为0.000001g/ml，求供试品取样量（g）。供试品量（g） = 2X0