全自动厂家beckman试剂说明htsh

1、检测原理Acs超敏hTSH检测采位点酶免法检测 (“双抗体夹心法”)。样品、标记了碱性磷酸酶的羊抗hTSH抗体（酶结合物）、蛋白缓冲液以及 了羊抗大鼠抗体-大鼠抗hTSH抗体复合物的磁性颗粒被一起加入到反应管中，样品中的hTSH和固相在磁性颗粒表面的抗体以及游离的酶结合物在不同的抗原位点上同时发生反应。而后，反应管被传送到磁性分离区域进行多次冲洗，去处未和固相结合的其它成分。最后在反应管中加入化学发光底物（Lumi-Phos* 530）, 已与固相结合的碱性磷酸酶会使该底物发出光子并被计所检测。最后，对照仪器中储存的多点定标曲线中所描述的光量子与标准品hTSH的对应关系而计算出样品中的hTSH

2、浓度。概述人促甲状腺激素(hTSH) 是几种由两条不对称肽链组成的糖蛋白类激素中的一种，一个-链，几乎所有激素都一样，一个-链，在免疫学和生物学上具有特异性，这些相似的结果是对不同的抗血清表现出不同程度的交叉反应性。Acs 超敏hTSH 分析是基于固相的酶免疫反应，被确信不与其它肽类激素发生交叉反应，该反应的特异性和灵敏性使区分甲亢和甲减变得简单。由垂体TSH的成了激素的TSH是甲状腺功能的关键调节因子，下丘脑的促甲状腺激素激素(TRH或TRF)控制着。接着，该系统调节了T3和T4的。外周血中甲状腺激素，T3和T4的浓度受下丘脑，形的负反馈机制。轴控制着甲状腺激素、和功能， 促甲状腺激素从下丘

3、脑刺促甲状腺素（TSH），接着，TSH刺激甲状腺激素的和T3、T4的代谢。游激和、储存、离和结合的T3、T4都在血中出现，超过99%的T4和T3在血中与载体蛋白所结合，只有不到1%的保持游离形式。对大多数人而言，游离激素部分与甲状腺功能状态相关（1，2）。概而言之，该系统被称为下丘脑-垂体-甲状腺轴，该轴上的任何功能调节改变均会影响到循环中的T3和T4浓度（1，2）。人TSH通过与甲状腺细胞膜表面受体结合以及激活腺苷酸环化酶循环而影响了甲状腺内大量的代谢过程，接着，促进循环形成AMP，作为TSH的第二信使，激活代谢链而刺激细胞内。刺激导致增加T3，T4，维持甲状腺的物质和功能完整（3）。和TS

4、H测定的经典临床运用是评估甲状腺状态，在那些下丘脑-垂体功能正常的，TSH检测被用来：1）排除甲减（TSH浓度升高）或甲亢（TSH浓度下降或不可检测）；2）监测在初发性甲减中利用T4替代治疗或甲亢时的抗甲状腺治疗；3）在甲状腺结节和非毒性肿中随访检测由于营养影响的T4抑制疗法后的TSH；4) 评估TRH激发试验的反应。因为已床或潜在的甲亢或甲减（4，5）。到很多灵敏和精确的方法，hTSH 测定越来越多被用于区分TSH最初是用生物分析系统进行估计，如McKenzie 大鼠生物分析等。但是这些方法显示灵敏度差，并且需要大量的血清标本（6）。由Utiger 等的TSH抗体导致了发展放射免疫分析的技术

5、来检测TSH（7，8），由于该方法的灵敏的分析和只需要少量的血清标本，使得放射免疫分析的技术迅速得以推广。利用化学发光技术到更高的灵敏度。本TSH检测显示其灵敏度可达到第三代检测的功能灵敏度概念 (0.010.02 礗U/ml mIU/l，即其批内检测重复性为CV为20%的可区分浓度)（9，10）。标本A.使用血清标本。B. 遵循国家临床标准的以下标本处理、运行和储存步骤(4，5)：1.用真空采样管所有血液标本时须遵守常规注意事项。2.离心前使标本完全自然形成凝块。3.全程保证样品管的密闭状态。离心获得血清后的两小时内，至少将 500 l 血清或血浆转移到一个密闭的储存试管中备用。4.5.储存

6、样品，保持样品管完全密闭，在室温(15 到 30C)条件下不超过 8 小时。6.如果 8 小时内不能完成检测即应将标本放入 2 到 8C 冰箱冷藏。7.如果24小时内不能完成检测即应将标本放入-20C 冰箱冻藏。8.标本只可复溶一次。C. 样品中至多含有59 g/dl (5090 g/l) 的白蛋白、10mg/dl (171 mol/l) 的胆红素和脂血标本中含有相当于1800 mg/dl (20.32 mmol/l)的甘油三脂和溶血标本含有最多500 mg/dl (5 g/l)的血红蛋白外不影响hTSH检测的结果。避免使用严重溶血标本。试剂和必须品Beckman Instruments, I

7、nc. 1000 Lake Hazeltine Drive Chaska, MN 55318A.R1:Acs 超敏 hTSH 试剂盒： 2 盒装货号：33820： 100 个检测， 50个测试/盒现成可用，在2到 10C冰箱中顶端朝上存放，可一直保存到中注明的失效期。试剂盒必须在2到 10C冰箱保存2小时后才能放入仪器中使用或保存。试剂盒被吸取使用后，在2 到10C条件下可稳定28天，一旦发现有蒸发、结晶或质控结果超出范围等现象出现即代表试剂盒失效。所用抗体均为多抗，除非有专门说明。1.R1a：含有羊抗大鼠gG-大鼠抗hTSH单抗复合物的磁性微粒子的TRIS缓冲液，含蛋白（BSA）、离子表面活

8、性剂、 0.1%的叠氮钠和 0.1% ProClin* 300。2.R1b：TRIS缓冲液，BSA，含蛋白（鼠或鸟性）、离子表面活性剂、0.1% 的叠氮钠和0.1% ProClin* 300。3.R1c：含羊抗hTSH-碱性磷酸酶（小牛）酶结合物的TRIS缓冲液，BSA，含蛋白（羊性）、离子表面活性剂、0.1% 的叠氮钠和0.1% ProClin* 300。B.Acs 超敏hTSH 定标品货号：33825： 4.0 ml/瓶定量检测的定标是用已知分析浓度的标本进行检测以观察光量子值。光量子值和已知浓度之间的数学关系就 了定标曲线。定标曲线储存于仪器中，可将样本检测中得到的光量子值转化成特定的分

9、析浓度。现成可用，使用前轻轻颠倒混匀，避免产生气泡。在210环境可稳定到定标品瓶上标出的观察到任失效期。质控结果落到允许的范围之外是定标品失效的信号。何介质效应。血清为基质的定标定标操作步骤请参见Acs免疫分析系统的操作指南和参考手册。1.S0：以BSA为基质的缓冲液，含离子表面活性剂，含 0.1% 的叠氮钠和0.5% ProClin* 300，含0.0 ng/dl (pmol/l)的hTSH。2.S1, S2, S3, S4, S5：以BSA为基质的缓冲液中分别含hTSH的量大概为0.1, 0.5, 4.0, 10.0, 及100.0 IU/ml (mlU/I)，含离子表面活性剂，含 0.1

10、% 的叠氮钠和0.5% ProClin* 300，准确浓度详见瓶上注明。3.定标卡：1C.Acs 底物货号为 81906: 4 瓶x 130 ml/瓶。现成可用，下表注明了储存条件和稳定性，底物本底检测值的增高提示底物的不稳定。前提储存稳定性2 到8C未开瓶可一直保存到失效期注明的使用前的平衡(未开瓶)15 到30C (室温条件)至少18 小时最长 14天使用中(已开瓶)内部底物支持位置最长 5天使用中 (已开瓶)外部液体架的底物位置最长14天R2 底物：Lumi-Phos 530 (缓冲液中包含有 dioxetane Lumigen* PPD,荧光素和离子表面活性剂量)。按照Acs 仪器操作

11、指南中介绍的使用方法使用。Acs 冲洗缓冲液D.货号：81907 4 x 1950 ml/箱现成可用。在室温条件下(15 到 30C)可稳定到包装上注明的失效期。底物本底检测值的增高或在 “双抗”体夹心法中的0点定标品的相关发光值的增高则提示冲洗缓冲液的不稳定。R3 冲洗缓冲液：Tris 盐缓冲液，离子表面活性剂， 0.1 %的叠氮钠和 0.1% ProClin 300。按照Acs仪器操作指南中介绍的使用方法使用。E. 质控材料：质控血清F. Acs 免疫分析系统及消耗品G. 警告和1.只可用于体外。2.试剂中所含的叠氮钠可以和铅和铜反应形成有高度腐蚀性的重氮金属盐，如果被溅到含该物质的液体，

12、则可用大量水冲洗来防止重氮的堆积(11)。3.样品和血制品应按照阐述的最底性的常规操作进行操作，将这些物品当作潜在的传染的操作常规进行处理，无论该些物质是原型、处理物物品，按照常规操作或得到保证前。用合适的其容器 (17)。和优秀剂进去污。按照各规定和操作规程存放和处理该些物品及4.底物在空气中容易衰变，应保持瓶口紧盖，不要将不同瓶的底物相混后使用。5.定标品的人源性物质，已作检测，未发现已肝抗原(HBsAg)、丙肝抗体(HCV-用来Ab)和人免疫缺陷抗体(HIV1-Ab 和HIV2-Ab)存在。因为没有一个测试方法的能完全保证没有源，因此处理试剂和样品时应视为在传递性疾病样品一样。6.用来制

13、作定标品的材料是由人垂体源性物质提取而来，要视其为潜在的物质（17）。7.Xi. 刺激物： 0.5% ProClin 300.R 43: 皮肤接触后会引起致敏。.S 28-37: 皮肤接触后立即用大量的水冲洗，不可直接倒入小水道，不要在该制品内倒入水，透过防护措施操作，避免剧烈碰撞，安全处置这些物质和它们的容器，穿适合的防护衣和戴合适套来避免接触。定标每个测试均需有效的定标曲线，hTSH的定标曲线有效期为28天，参见操作向导和参考手册来了解定标步骤。操作指南中的6.1章节阐述了暂时的重定标需要和系统选择定标的需要。hTSH的定标品提供了6个点的浓度，0和大概0.1, 0.5, 4.0, 10.

14、0, 及 100.0 IU/ml (mlU/I)，由BSA基质和纯化的TSH通过称所。定标品的浓度值与已与WHO第二界国际参考标准80/558 (18)准备的原始参考标准品所对照，定标曲线的有效期为28天。质控质控品与样品的性质类似，是监测免疫化学分析正常工作的必须品。因为样品可在有随机检测能力的仪器中随机检测而非批量检测，所以质控品应该包含在整个24小时的时间段内。质控品将包括至少三个浓度质控品，按照厂家规定进行复溶和保存。在正式使用前每个均应建立各自得平均值和可接受范围，质控结果没有落在可接收范围提示检验结果无效。重新检查位于上一次有效质控值到这次无效质控值之间所有得检测结果。参见操作指南

15、来了解如何回顾质控结果。检测步骤A. Acs 仪器参见 Acs 免疫分析系统的操作向导来准备和操作。B. 分析步骤1.从主菜单进入测试要求屏幕。2.对每个样品，设置一个样品架上的位置，输入样品信息和需检测的测试名称。3.将样品管（杯）放入样品架中已设定的位置。4.按下运行键（ Run）开始检测。5.仪器会提醒操作者运行所需的定标。6.系统会自动计算检测结果。结果A. 系统软件会按照四参数曲线计算模式（four-parameter logistics curve math m）自动计算结果。样品中检测到的光量子值会与储存的标准曲线对应求得相应结果，检测结果可通过“样品结果菜单”（ Sample

16、Results screen）回顾，如何回顾结果请参见操作规程。B. 正常参考范围1.使用Acs 超敏 hTSH分析方法检测了217个表观正常的和女性的血清标本的TSH浓度（甲状腺外形正常），非多的TSH浓度范围为0.345.60IU/l(mIU/l)。2.按上述表述，TSH浓度5.60 IU/l 即可能提示甲减。判定甲状腺功能的正常与否不可只依赖一次检测结果，完整的甲状腺功能状态评估要包括其它的甲状腺功能检测，包括甲状腺自身抗体的评估（有助于自身免疫性甲状腺炎）和临床体症的评估。正如其它所有的围。测试一样，每个都应对适合的特异性人群建立各自的参考范操作的说明A.关于安装介绍、开机、操作原理、

17、系统主要特点、操作指导、定标步骤、操作限制和注意事项、危险事项、保养和故障的排除等请参见操作向导和参考手册。B.在装入仪器前，将试剂轻轻的颠倒混匀几次，不要颠倒已用试剂，通过轻轻旋转的方式混匀试剂。.每次测试使用110I的样品，但要考虑到样品杯和样品管的死体积，各种容器的死体积大小请参见操作手册中的的样品容器章节。C.D.样品结果的为IU/ml，但是，系统也可国际系统(SI，nmol/l)，参见参考手册的“系统设置”章节来了解的互换。手工换算乘以1即到国际。操作注意事项范围内(大概0.01100.0 IU/ml mIU/l)被准确的定量。如果样品中的浓度低于最低A.样品可在可检测限，则结果为1

18、00.0 IU/ml mIU/l)，或用0点定标品或Acs 样品稀释液A，（货号为 81908）对标本进行5倍稀释后进行检测，将检测后的结果乘以5即为最终结果，详情参见操作指南关于设置和检测预稀释样品。B.人抗大鼠抗体(HAMA)可能会出现在已接受大鼠源性单抗免疫药物治疗的体内(1416)。另外，能和大鼠或其它免疫球蛋白结合的异嗜性抗体可能会出现在特殊的方法来尽量减少这些抗体对该分析方法的影响。样品中 (11)。这个分析方法已通过C.该检测不可用于新生儿hTSH 浓度测定。Acs is a trademark of Beckman Instruments, Inc.*Lumi-Phos 530

19、 and Lumigen are trademarks of Lumigen, Inc.*ProClin 300 is a trademark of Rohm and Haas Company, or of itbsidiaries or affiliates.参考文献Beckman Instruments, Inc. Acs hTSH product insert, Chaska, MN 55318, 170160.Beckman Instruments, Inc. Acbstrate product insert, Chaska, MN 55318, 170279.Beckman Inst

20、ruments, Inc. Acs Wash Buffroduct insert, Chaska, MN 55318, 170278.1.Gornall, A.G., Luxton, A.W., Bnani, B.R. 1986. Endocrine disorders. In App d Biochemistry ofClinical Disorders: 305-318. Edited by Gornall, A.G.Philadelphia, PA: J. B. Lippincott Co.2.Watts, N.B., Keffer, J.H. 1982. The thyroid gla

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