qbx_微生物的实验室培养 修改版

1、特点：小特点：小; ; 简单简单; ; 低等低等; ; 代谢速度快。代谢速度快。微生微生物物真菌真菌原生生物原生生物 是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称物的总称原核生物原核生物非细胞结构非细胞结构真核生物真核生物微生物基础知识1.1.何为培养基？何为培养基？阅读教材阅读教材P141P1416 6相关内容，回答相关内容，回答以下问题：以下问题： 2.2.按照不同的划分标准，培养基有哪按照不同的划分标准，培养基有哪些种类、配制特点及其应用？些种类、配制特点及其应用？3.3.常用的消毒和灭菌方法有哪些？常用的消毒和灭菌方法有哪些？一一. .培养基：培养基：人

2、工提供微生物人工提供微生物生存的环境生存的环境和营养物质和营养物质1.1.基本成分：基本成分：思考：微生物“吃”什么？碳源、氮源、水、无机盐碳源、氮源、水、无机盐碳源碳源无机：无机：有机：有机：COCO2 2、COCO3 32 2- -、HCOHCO3 3- -牛肉膏、蛋白胨等牛肉膏、蛋白胨等自养型自养型异养型异养型氮源氮源无机：无机：有机：有机：NHNH4 4、NONO3 3- -牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等划分划分标准标准培养基培养基种类种类特点特点用途用途物理物理性质性质培养基的种类培养基的种类不加不加凝固剂凝固剂加凝固剂加凝固剂（琼脂、（琼脂、明胶）明胶

3、）工业生产工业生产观察微生物观察微生物的的运动、分运动、分类鉴定类鉴定微生物分离、微生物分离、鉴定、鉴定、活菌计活菌计数数、保藏菌种保藏菌种液体液体半固体半固体固体固体耐高温需保持干燥的耐高温需保持干燥的 物品，物品，160170 12小时小时接种环、接种针等接种环、接种针等 金属用具金属用具7075、30min 80、15min100、56min消毒消毒灭菌灭菌定定义义方方法法较为较为温和温和理化方法，理化方法，杀死杀死部分有害菌体部分有害菌体（不不包括芽孢、孢子）包括芽孢、孢子）强烈强烈的理化方法，的理化方法，杀死杀死所有微生物所有微生物（包括（包括芽孢、孢子芽孢、孢子）煮沸消毒法煮沸消毒

4、法巴氏消毒法巴氏消毒法化学药剂化学药剂紫外线紫外线灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌干热灭菌酒精、氯气、石炭酸等酒精、氯气、石炭酸等高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌培养基，培养基，100KPa、121、1530min二二. .无菌技术：无菌技术： 防止外来杂菌的污染防止外来杂菌的污染1.1.消毒与灭菌：消毒与灭菌：1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。菌。如果需要，请选择合适的方法。（

5、1 1） 培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3） 实验操作者的双手实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。身被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）需要消毒）需要消毒。下列哪些事物适用于消毒处理下列哪些事物适用于消毒处理()皮肤皮肤饮用水饮用水牛奶牛奶注射器注射器培养皿培养皿接种环接种环培养基培养基果汁果汁酱油酱油手术刀手术刀AB C D以上全部以上全部A1 1、器具的灭菌、器具的灭菌2 2、培养基的配制、培养基的配制3 3

6、、培养基的灭菌、培养基的灭菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接种、微生物接种6 6、恒温箱中培养、恒温箱中培养7 7、菌种的保存、菌种的保存阅读P16-20三、实验操作三、实验操作 （ 一）一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）养细菌）1. 1. 计算计算2 2称量称量3 3溶化溶化4 4培养基灭菌培养基灭菌5 5倒平板倒平板留意：称量纸留意：称量纸加琼脂加琼脂方法？方法？1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，才能左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：

7、答：可以用手触摸锥形瓶，感觉刚刚不可以用手触摸锥形瓶，感觉刚刚不烫手烫手2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。污染培养基。3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？微生物吗？为什么？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，可以防止皿盖

8、上的水珠落入培养基，可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。造成污染。答：杂菌滋生，最好不要用答：杂菌滋生，最好不要用接种方法：接种方法： 平板划线法平板划线法: :（二）、纯化大肠杆菌（二）、纯化大肠杆菌平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法在数次画线后在数次画线后, ,可以分离到可以分离到由一个细胞繁殖由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体而来的肉眼可见的子细胞群体, ,这就是这就是菌落菌落. .菌落是鉴菌落是鉴定菌种的定菌种的重要依据。重要依据。一个一个菌落菌落就是就是一个一个种群种群单个或少数细菌单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖形在固体培养基上大量繁殖形成一个肉眼

9、可见、具有一定形态结构的子细成一个肉眼可见、具有一定形态结构的子细胞群体，叫做胞群体，叫做菌落菌落。接种方法：接种方法： 平板划线法平板划线法: :（二）、纯化大肠杆菌（二）、纯化大肠杆菌平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法在数次画线后在数次画线后, ,可以分离到可以分离到由一个细胞繁殖由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体而来的肉眼可见的子细胞群体, ,这就是这就是菌落菌落. .如何操作？如何操作？ 划线结束后灼烧接种环：划线结束后灼烧接种环：及时杀死残留的及时杀死残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。操作的第一步灼烧接种环：操作的第

10、一步灼烧接种环：避免接种环上可避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；能存在的微生物污染培养物；讨论讨论p18 讨论讨论1.1.每次划线前灼烧接种环：杀死上次划线结束后残留在接种环上的菌种，使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。讨论讨论2.2.答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。讨论讨论3.3.答：答：划线后，线条划线后，线条末端细菌的数目末端细菌的数目比线条比线条起始起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步

11、减少，细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 1 1、临时保藏：接、临时保藏：接种到种到固体斜面培养基固体斜面培养基，菌落长成后置于，菌落长成后置于44冰箱保存。冰箱保存。 2 2、长期保存：、长期保存：甘甘油油 冷冻冷冻 管藏法管藏法-20划分划分标准标准种类种类特点特点用途用途化化学学成成分分天然天然合成合成含化学成分不明含化学成分不明确的天然物质确的天然物质工业生产工业生产培养基成分明确培养基成分明确分类、鉴定分类、鉴定加入某种化学物质加入某种化学物质, ,以抑制以抑制不需要不需要的微生的微生物的生长物的生长, ,

12、促进促进所需所需要要的微生物的生长的微生物的生长培养、分培养、分离出离出特定特定微生物微生物加入某种指示剂或化加入某种指示剂或化学药品学药品, ,用以鉴别用以鉴别不不同种类同种类的微生物的微生物鉴别不鉴别不同同种类种类微生微生物物用用途途选择选择鉴别鉴别选择培养基：选择培养基：在培养基中加入青霉素，以抑制细菌、放线菌的生长，从而分离到酵母菌和霉菌。鉴别培养基：鉴别培养基：例如，在培养基中加入伊红和美蓝，可以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌：如果有大肠杆菌，其代谢产物就与伊红和美蓝结合，使菌落呈深紫色，并带有金属光泽。 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划