药学院毕业答辩学习教案

1、会计学1第一页，共20页。第1页/共21页第二页，共20页。3每年新发头颈部肿瘤患者60万例头颈部肿瘤的发生率在恶性肿瘤中位于第7位我国的头颈部恶性肿瘤的发生率高达3.268%首次医疗接触时大于60%的患者处于晚期综合治疗5年的生存率仅为40%-50%手术治疗放射治疗化学治疗生物免疫治疗生物靶向治疗第2页/共21页第三页，共20页。4发病率逐步上升化疗、放疗疗效不理想放疗和药物联合进行提高药物敏感性疗效提升化疗效果不佳血脑屏障第3页/共21页第四页，共20页。5血脑屏障上重要(zhngyo)的的蛋白质分子：紧密与粘附连接蛋白胞吞转运相关蛋白基底膜蛋白转运蛋白 血脑屏障是脑内的毛细血管内皮细胞彼

2、此(bc)紧密相连，同时与周围的周细胞和星形胶质细胞相互作用形成的屏障系统。P-gpMrp2Bcrp第4页/共21页第五页，共20页。第5页/共21页第六页，共20页。71、实验对象 成熟的正常雄性Wister大鼠，体质量210-280g，平均250g。2、实验仪器(yq) XXX提供3、实验试剂 XXX提供第6页/共21页第七页，共20页。8动物分组：将30只大鼠随机分为6组，每组5只大鼠。甲、乙、丙为实验组，A、B、C组为对照组，。实验动物放疗：将分好组的大鼠，做好标记，喂养一段时间后，进行放疗实验。 将按体重给予实验组和正常组大鼠一定剂量的水合氯醛麻醉后（给予水合氯醛方法为腹腔注射），将

3、实验组大鼠固定在预先制作好的板子上，将其头颈部放在放疗仪的放疗窗下，给予2Gy的剂量的照射，源皮距75cm，照射野约2.5cm 2.5cm,上界位于唇部,下界位于颈部，左右露空，垂直照射，2Gy/次，5次/周。实验动物取材：雄性成年大鼠在照射后16小时，实验组和对照组分别取大脑、小脑(xiono)各一份，石蜡包埋，制备石蜡切片。动物(dngw)实验大鼠放疗视野第7页/共21页第八页，共20页。9Western Blot（WB）实验(shyn)蛋白提取：称取冻在超低温冰箱中的脑组织，用离心管称取0.4g，加入事先配好的RIPA裂解液400uL后将其用破碎仪破碎后，匀浆后反复冻融三次（在液氮中冻，

4、水中融化(rnghu)），用离心机将上述冻融的溶液离心后（12000r/min，10min），取上清液80uL加入小离心管中，加入20uL的蛋白上样缓冲液，用封口膜封口，在100热水中变性5min，后将其冻存在20冰箱中。将上述提取的蛋白分别做WB实验，分别做p-gp（P-糖蛋白）、Bcrp（乳腺癌耐药相关蛋白）、mrp2（多药耐药相关蛋白2）。SDS-PAGE电泳一、配胶8%分离胶（9.2ml蒸馏水、5.3ml 30Acrylamide、5.0ml 1.5M 10SDSTris-HCL（pH8.8）、0.2 ml 10SDS、0.2ml 10%过硫酸铵、0.012ml TDMED）浓缩胶（6

5、.8ml蒸馏水、1.7ml 30Acrylamide、1.25 ml 1.0M Tris-HCL（pH6.8）、0.1 ml 10SDS、0.1ml 10%过硫酸铵、0.01ml TEMED）二、电泳样品准备：将蛋白样品从-80取出，在-4下解冻，涡旋离心，排好上样顺序。上样：第一孔上3L的maker,其余孔上所需的蛋白样品8L。电泳条件：80V恒压跑至分离胶，约为0.5h,然后用120V跑至结束约为2h。第8页/共21页第九页，共20页。10三、湿法转膜1.凝胶处理：取出电泳完的凝胶，切去浓缩胶及溴酚蓝指示带的下沿分离胶。2.铺膜：按转印夹(黑)-海绵(himin) -三层滤纸-凝胶-PVD

6、F膜-三层滤纸-海绵(himin)-转印夹的顺序铺好。其中滤纸、PVDF膜均为4.5cm*8cm。3.湿转条件：50V恒压下湿转3h10min。四、膜的封闭TBST溶液清洗3次，每次10min ，1.5的脱脂牛奶中，室温摇动1h封闭。五、一抗的孵育TBST溶液清洗10min，用5的脱脂奶粉将所需一抗稀释到合适的比例或用合适比例涂膜，放置室温2h或4过夜，完成后用TBST溶液清洗4次，每次10min。六、二抗孵育用5的脱脂奶粉将所需二抗稀释到合适的比例，在室温将膜摇动1h后，用TBST洗涤4次，每次10min。七、显色配置发光液，先加白瓶溶液后加黑瓶溶液，将发光液涂在吸干水分的PVDF膜上，曝光

7、。实验实验(shyn)(shyn)方法方法Western Blot（WB）实验(shyn)第9页/共21页第十页，共20页。第10页/共21页第十一页，共20页。12一、放疗(fn lio)后XXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX第11页/共21页第十二页，共20页。13二、血脑屏障上的P-gp的表达(biod)结论(jiln) ：XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX0123456类别1类别2类别3类别4图表标题系列 1系列 2系列 3第12页/共21页第十三页，共20页。14三、血脑屏障上的Bc

8、rp的表达(biod)结论(jiln) ：XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX0123456类别1类别2类别3类别4图表标题系列 1系列 2系列 3第13页/共21页第十四页，共20页。15四、血脑屏障上的Mrp2的表达(biod)结论(jiln) ：XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX0123456类别1类别2类别3类别4图表标题系列 1系列 2系列 3第14页/共21页第十五页，共20页。16 综上所述，结论(jiln) ：XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX0510类别1类别2类别3类别4图表标题系列 1系列 2系列 30510类别1类别2类别3类别4图表标题系列 1系列 2系列 30510类别1类别2类别3类别4图表标题系列 1系列 2系列 30510类别1类别2类别3类别4图表标题系列 1系列 2系列 3第15页/共21页第十六页，共20页。第16页/共21页第十七页，共20页。181、XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX2