遗传实验6X小体

1、一、实验原理 1949年年Barr等在雌猫的神经细胞中发现一种浓缩等在雌猫的神经细胞中发现一种浓缩小体，而雄猫无。此小体小体，而雄猫无。此小体处于凝集不活动状态，处于凝集不活动状态，所有哺乳类雌体细胞中都有一个这种表现的小体，所有哺乳类雌体细胞中都有一个这种表现的小体，因此称因此称Barr小体或小体或X小体。小体。 进而发现，当在雌或进而发现，当在雌或雄体中，有多于雄体中，有多于2 2条条X X染色体时，在间期细胞内除染色体时，在间期细胞内除一条外，其余均形成一条外，其余均形成X-X-小体。小体。 人类正常的男女体细胞中，人类正常的男女体细胞中，22对常对常染色体并无区别，但其性染色体分染色体

2、并无区别，但其性染色体分别为别为XY和和XX。女性的两条。女性的两条X染色体染色体中，有一条在间期呈现浓缩状态，中，有一条在间期呈现浓缩状态，可由适当的染料显示。正常女性间可由适当的染料显示。正常女性间期细胞中期细胞中X小体阳性率约为小体阳性率约为1030%。女性：女性：XX男性：男性：XY女性细胞内女性细胞内X X染色体上基染色体上基因翻译蛋白质的量是男性因翻译蛋白质的量是男性的两倍吗？的两倍吗？NOv异固缩的X染色体随机失活。v胚胎发育第16天，出现失活；卵子与精子受精后，其中失活的X染色质变为常染色质恢复活性。核膜核膜X染色质染色质正常女性间期细胞正常女性间期细胞核中核中X X染色质阳性

3、率染色质阳性率为为1030，而，而男性则低于男性则低于1。二、实验目的v通过实验初步掌握观察与鉴别通过实验初步掌握观察与鉴别X-小体的小体的简易方法，识别其形态特征及所在部位，简易方法，识别其形态特征及所在部位，为进一步研究人体染色体的畸变与疾病为进一步研究人体染色体的畸变与疾病提供参考。提供参考。三、仪器、用品及试剂v光学显微镜，恒温水浴箱；牙签、载玻光学显微镜，恒温水浴箱；牙签、载玻片、染色缸；片、染色缸；CarnoyCarnoy固定液（甲醇固定液（甲醇冰冰乙酸乙酸3l3l）95%95%、70%70%乙醇，硫堇染液；乙醇，硫堇染液；5N HCl5N HCl。四、试剂配置v1 1硫堇染液配方

4、：硫堇染液配方： 4%4%硫堇原液：硫堇原液：4g4g硫堇粉末置研钵中以硫堇粉末置研钵中以 50%50%乙醇乙醇100ml100ml研磨溶解。过滤。研磨溶解。过滤。 MichaeliesMichaelies缓冲液：醋酸钠缓冲液：醋酸钠9.714g9.714g，巴，巴 比妥钠比妥钠14.714g14.714g加双蒸水至加双蒸水至500ml500ml。 硫堇工作液（硫堇工作液（PH5.7PH5.7）：）：0.1N HCl0.1N HCl 32mlMichaelies 32mlMichaelies缓冲液缓冲液28 ml4%28 ml4%硫堇原硫堇原 液液400ml400mlvl l取材、涂片：取材、

5、涂片：受检查者用水漱口数次，尽可能受检查者用水漱口数次，尽可能除去细菌和食物残渣；用洁净的牙签从口腔两侧除去细菌和食物残渣；用洁净的牙签从口腔两侧颊部刮取粘膜，第一次刮取物弃去，将第二次、颊部刮取粘膜，第一次刮取物弃去，将第二次、第三次刮取物涂在干净的载玻片上。第三次刮取物涂在干净的载玻片上。 2 2固定：涂片后干燥固定：涂片后干燥, ,待完全干燥后用待完全干燥后用9595乙醇乙醇中固定中固定20-3020-30分钟，再空气干燥。分钟，再空气干燥。3 3染色：玻片在蒸馏水中冲洗几次后染色：玻片在蒸馏水中冲洗几次后5N HCl5N HCl（4040）水解水解1010分钟，蒸馏水洗去多余分钟，蒸馏

6、水洗去多余HClHCl，在硫，在硫堇染液中染色堇染液中染色20-3020-30分钟。水洗。分钟。水洗。4 4镜检、气干后即可镜检。若背景颜色过深可在镜检、气干后即可镜检。若背景颜色过深可在75%75%乙醇、乙醇、95%95%乙醇中分色后再镜检。乙醇中分色后再镜检。vX染色质的识别方法：染色质的识别方法：一一般位于核膜内侧缘，形状般位于核膜内侧缘，形状多样，多为半圆形，三角多样，多为半圆形，三角形。形。六、实验结果的观察六、实验结果的观察可计数细胞的标准：可计数细胞的标准：a：核较大：核较大，轮廓清除完整，无缺损、皱褶，轮廓清除完整，无缺损、皱褶，染色清晰。，染色清晰。b：核质呈细网状：核质呈细网状或均匀的细颗粒状，无深染大颗或均匀的细颗粒状，无深染大颗粒及细菌污染粒及细菌污染人体 口腔黏膜细胞X-小体正常女性上皮细胞正常女性上皮细胞直径约直径约1m, Feulgen染色阳性。染色阳性。正常男性上皮细胞正常男性上皮细胞具有两个X-小体的人体口腔黏膜细胞六、注意事项vl l涂片时应均匀涂成单层，取材细胞要涂片时应均匀涂成单层，取材细胞要 多些。取材前应漱口。多些。取材前应漱口。2 2镜检应选择完整、核质中颗粒均匀的镜检应选择完整、核质中颗粒均匀的 细胞观