基因飞跃生命科学实验室

1、行政院衛生署認證海洋性貧血基因檢驗機構衛署保字第0900018273號基因飛躍生命科學實驗室(一)海洋性貧血送檢須知壹、 受檢對象：1. 若孕婦平均紅血球體積(MCV)較小(即MCV80或MCH25)，則其配偶亦需接受平均紅血球體積之血液檢查。2. 若發現配偶之平均紅血球體積亦較小(即MCV80或MCH25)，則院方應將孕婦及配偶二人的血液檢體，送至本檢驗單位，作進一步的海洋性貧血基因檢測。3. 若夫妻為同型海洋性貧血帶因者，則孕婦應接受絨毛、羊水或臍帶血採樣，以對胎兒作產前診斷及進一步之遺傳諮詢。貳、 檢體採檢及送檢方式(檢體運送費用和採檢材料煩請貴院自行辦理)：一、一般成人之採樣：種類檢體

2、量容器注意事項全血6-10 c.c.分裝於兩管含EDTA抗凝劑之採血管(各3c.c.)及一管不含抗凝劑之空採血管(1c.c.以上，測Ferritin用)。避免凝固二、產前診斷之採樣：種類檢體量容器注意事項臍帶血2c.c.以上EDTA管避免凝固，避免母血污染絨毛10mg以上乾淨之瓶子或管子需確認採樣檢體為胎兒絨毛組織羊水10 c.c以上針頭的地方用3M膠布貼緊以防運送過程中脫落避免母血污染備註：1.母血或母體組織污染嚴重之胎兒檢體無法檢驗。2.產前診斷請附帶採集父母雙方血液各3 c.c.(EDTA管)作進一步確診。3.所有檢體皆應於24小時內以室溫保存運送，超過24小時者請以4冷藏保存運送。三、

3、填寫表單及送檢方式：1. 請詳細填寫海洋性(地中海型)貧血檢體移送單【若為產前診斷請另填產前遺傳診斷個案紀錄表（四聯單）】及海洋性貧血分子診斷同意書，【產前則塡海洋性貧血產前診斷同意書】，以便個案追蹤管理。2. 檢體請包裝妥當，以快遞方式寄送至臺北市中正區林森南路10-1號1樓 (周六及例假日不收件，另本單位不接受貨到付款之快遞)。3. 本單位於收到檢體後，會檢視檢體狀況並以電話或傳真與您確認。四、報告：於收到檢體後，如為常見的基因型(如東南亞型)，原則上可在7個工作天內發報告，其餘者原則上10-14個工作天內發出報告，報告可先傳真，再寄發正式報告。五、檢驗費用：(本費用不包含掛號費及採檢技術

4、費) 對象收費標準備註符合衛生署補助者一般成人：每人$2,500元MCV小於80之孕婦及配偶產前診斷：每例$3,500元夫婦為同型之海洋性貧血帶因者不符合衛生署補助者一般成人：每人$4,000元如：外籍人士產前診斷：每例$5,500元 備註1：若夫妻雙方已在其他衛生署認證通過之海洋性貧血檢驗單位檢測確認(如皆為東南亞型甲型海洋性貧血)，請附報告影本並抽取夫妻雙方血液檢體，以利本院作產前確診。 備註2：若配偶為外籍人士，請檢附當事人身分證之正反面影印本。 備註3：本檢驗費用不包含檢體運送費，帳款處理之問題，請電洽：02-33931030陳小姐(二)海洋性貧血分子診斷簡介一、海洋性貧血與缺鐵性貧血

5、海洋性貧血的篩檢，一般是先以全血計數（CBC）中的MCV<80 fL或MCH25 pg為認定標準，但是缺鐵性貧血(IDA)與海洋性貧血皆會出現小血球性低血色素貧血，因此在做海洋性貧血DNA診斷時，也應同時檢測ferritin，以確定病人是否合併有缺鐵性貧血。若受檢者ferritin偏低，在補充鐵質後MCV與Hb升高成為正常值，且DNA診斷無海洋性貧血，則應僅為缺鐵性貧血(IDA);否則可能合併患有海洋性貧血。二、甲型與乙型海洋性貧血甲型海洋性貧血為HbA (22)中的-globin合成缺陷，而乙型海洋性貧血為HbA中-globin合成缺陷，由於此兩種的基因缺損不同，所以事先區分帶因者為甲

6、型或乙型是非常重要的。甲型海洋性貧血帶因者的HbA2在正常範圍內(<3.5%)，大部份的乙型海洋性貧血其HbA2偏高（>3.5%），但有少數人其HbA2值正常但是Hb F偏高，因此HbA2與Hb F的定量對區分甲型或乙型海洋性貧血扮演重要的角色。為了準確區別帶因者為甲型或乙型，我們不以血色素電泳來測HbA2（因血紅素電泳的錯誤率達10%），而採用高效能液相層析法(HPLC)分析及定量HbA2和Hb F值，作為是否進行乙型海洋性貧血分子檢測之依據。但一個人若同時帶有甲型和乙型海洋性貧血的基因，其HbA2和HbF上昇的情況會跟乙型海洋性貧血者相同；所以本室對所有個案皆會進行台灣最常見的

7、甲型東南亞型海洋性貧血的篩檢。三、DNA診斷技術1.Gap-PCR, ACRS-PCR, PCR restriction site分析：用於偵測甲型中的東南亞型(SEA)、泰國型(Thailand Type)、菲律賓型(Filipino type)、右端缺失型(-3.7 deletion)及左端缺失型(-4.2 deletion)及乙型中的G+(A)0缺失型、雲南型(HPFH of Yunnanese Type)及-SEA缺失型型等大片段基因缺失的突變型。另外，配合限制酵素的使用可偵測甲型之Hb Constant Spring (Hb CS)、Hb Quong Sze (Hb QS)等基因型以

8、及國人常見的六種乙型海洋性貧血基因突變型，其中包含最常見的4種突變型 (Codon 41/42、IVS-654、-28和Codon 17)。所有PCR檢驗都包含三個控制組：positive control DNA，negative control DNA和blank control。控制組檢驗結果需與預期相同，該次檢驗才可採信。2.核酸定序(DNA sequencing)：用以確認乙型海洋性貧血突變之基因型及部份罕見單點突變之甲型海洋性貧血。3.SNP(Single Nucletide Polymorphism)& STR(Short Tandem Repeats )分析：利用基因內單

9、一核苷酸多型性(SNP)或基因附近重複性序列(STR)重複數多型性作家族遺傳基因連鎖分析，以協助確認診斷。4.在乙型海洋性貧血的產前診斷上，本室採用ACRS-PCR及DNA直接定序的方法作雙重確認。四、其他：1. 已知國人常見甲型()海洋性貧血的基因型約7種，而乙型()海洋性貧血的基因型約20種，迄今尚有約2%疑似海洋性貧血帶因者的基因型仍無法判定。2. 在甲型海洋性貧血的檢驗上，本室僅針對常見且會引起重症的基因型作診斷。3. 在乙型海洋性貧血的檢驗上，本室以高效能液相層析法(HPLC)定量之Hb A2及Hb F值，作為是否進行乙型海洋性貧血分子檢測之依據。若Hb A2值>3.5%或Hb

10、 A2值正常但Hb F值大幅偏高者，才進行乙型海洋性貧血基因突變型之分子診斷。4. 在台灣同時帶有甲型和乙型海洋性貧血或合併缺鐵性貧血的個案為數不少，此情況將導致診斷誤差。5. 目前國內外分子診斷設備及技術的靈敏度及準確度仍無法達到100%準確。故本分子遺傳檢驗報告之準確率約為98%，結果僅供醫師臨床診斷參考。海洋性貧血診斷流程孕前或妊娠早期作CBC全血計數篩檢MCV(fl)80 MCH(pg)25MCV(fl)80 MCH(pg)25無產下重型海洋性貧血胎兒之虞同時檢查先生的CBC值MCV(fl)80 MCH(pg)25MCV(fl)80 MCH(pg)25無產下重型海洋性貧血胎兒之虞夫妻倆人抽血送至衛生署核可之海洋