非那西丁在大鼠体内的药代动力学

1、Pharmacokinetic of intravenous phenacetin in rats导师： 答辩：关于非那西丁方法设计样品处理HPLC操作数据处理目录 / CONTENTS12345药物性质第一部分分子式：分子式：C10H13NO2分子量：分子量：179.2158类别类别:原料药原料药、解热镇痛类原料药。、解热镇痛类原料药。性状：本品为白色，有闪光的鳞片状结晶或白色性状：本品为白色，有闪光的鳞片状结晶或白色结晶性粉末，无嗅，味微苦。本品在乙醇或氯仿结晶性粉末，无嗅，味微苦。本品在乙醇或氯仿中溶解，在沸水中略溶，在水中极微溶解。中溶解，在沸水中略溶，在水中极微溶解。药物性质内服易吸

2、收，服后内服易吸收，服后20-30分钟始现药效。持续分钟始现药效。持续5-6小时，吸收后非那西丁大部分在肝脏迅速小时，吸收后非那西丁大部分在肝脏迅速去乙基生成去乙基生成对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚（扑热息痛扑热息痛）而呈）而呈现解热、镇痛作用。其后主要以结合形式从现解热、镇痛作用。其后主要以结合形式从尿中排除；小部分经去乙酰基生成对氨苯乙尿中排除；小部分经去乙酰基生成对氨苯乙醚，后者使醚，后者使血红蛋白血红蛋白变为变为高铁血红蛋白高铁血红蛋白，因，因而表现为非那西丁的而表现为非那西丁的发绀发绀毒性反应。毒性反应。体内过程亚亚氨基醌能使氨基醌能使血红蛋白血红蛋白变成变成高铁血红蛋白高铁血红蛋白而失去

3、携氧能而失去携氧能力，造成组织缺氧、红细胞溶解而致溶血、黄疸，肝脏力，造成组织缺氧、红细胞溶解而致溶血、黄疸，肝脏损害等。正常情况下，毒性中间代谢物迅速与谷光甘肽损害等。正常情况下，毒性中间代谢物迅速与谷光甘肽结合或转化成无毒的硫醚氨酸（结合或转化成无毒的硫醚氨酸（meracpturic acid），从），从尿中排出。只有当剂量过大或动物缺乏葡萄糖醛酸结合尿中排出。只有当剂量过大或动物缺乏葡萄糖醛酸结合代谢方式时，才出现中毒反应。代谢方式时，才出现中毒反应。药动学方法设计第二部分国内相关研究综述实验动物仪器与试剂参数操作Waters高效液相色谱仪 (包括 泵、 检测器) ;色谱工作站非那西丁标

4、准品硫酸阿托品标准品乙腈为色谱纯 水为重蒸水 其余试剂均为分析纯清洁级健康 Wistar 大鼠32只， 雌雄各半体重 (250 10) g 禁食16小时自由饮水由实验室动物房提供1.灌胃：称取标准品非那西丁1250mg-乙醇定容至100ml250g大鼠灌胃2.5ml（125mg/1000g）眼眶静脉丛取血时间每次300l，0.5h-1h-1.5h-2h-2.5h-3h-3.5h-4h-6h-8h-12h-24h-48h13次-3900l配标准液大鼠灌胃125mg/1000g（或者尾静脉注射20mg/1000g）眼眶静脉丛取血血浆处理HPLC检测数据处理主要参考文献：反相高效液相色谱法检测非那西

5、丁血药浓度刘军亦有用茶碱做内标2.尾静脉注射:丙三醇注射剂非那西丁5mg/ml-40ml250g大鼠注射1ml（20mg/1000g）5 10 15 30 45 60 90 120 min 于眼底静脉丛取血0. 5 ml样品处理第三部分血浆处理取血检测解冻眼眶静脉丛取血13次，每次300l置肝素化离心管中,4 000 r/min离心10 min,移取上层血浆,密封-20冰冻待用RP-HPLC1.精密吸取血浆1 mL,加氨水100L,轻摇,再加氯仿5 mL,涡旋3 min,超声40min,静置过夜。收集下层氯仿,于60水浴上用氮气吹干,再用甲醇溶解残渣,并定容至200L,加入内标硫酸阿托品， 浓

6、度为 15 mg L 1。12 000 rmin-1离心6 min,取上清液20L进样分析。2. 200 l 血浆中加入100 l 10%高氯酸( 含内标硫酸阿托品， 浓度为 15 mg L 1) ， 漩涡振荡 1 min，15 000 r min 1离心10 min， 取上清供 HPLC 分析3.精密吸取血浆样品02 mL,精密加入冷藏的10%三氯乙酸40L ( 含内标硫酸阿托品， 浓度为 15 mg L 1),涡旋3 min,12 000 r/min离心10 min,吸取上清液约120L置于尖底进样瓶中,HPLC自动进样HPLC操作第四部分1234色谱柱C18流动相：乙腈-水（25：75）

7、三乙胺0.1%磷酸调节pH至3.0灵敏度0.02AUFS流速1ml/min波长210nm柱温30硫酸阿托品16ng为最低检测限非那西丁0.08g（SN=3：1）为最低检测限色谱条件HPLC系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。系统组成流动相的准备： 将去离子水和有机溶剂分别用0.45um微孔滤膜过滤，除去颗粒性杂质，倒入贮液瓶，超声波脱气15分钟后，将之放置在仪器的试剂架上。 开启稳压电源方法编辑和参数设定 SOP自动进样序列表及数据文件的设置样品测定与数据报告关机每次分析样品之前必须用已知含量的参照样对仪器进行校验,当实测与

8、标值的相对偏差0.3%注意事项及维护SOPHPLC数据处理第五部分数据处理药-时 标准曲线质量控制（新的标准曲线，双质控样品）方法学验证专属性回收率精密度参数计算AUC汇总全班同学的数据关键技术与实践难点讨论关键技术实践难点研究方案可行性给药途径72%28%灌胃？（乙醇）静注？（尾静脉or股静脉）研究方案可行性取血途径72%28%眼眶静脉丛取血？断尾取血？尾静脉取血？实践难点眼眶静脉丛采血 体重20-25g的小鼠每次可采血 0.2-0.3ml；体重200-300g大鼠每次可采血0.5-1.0ml，可适用于某些生物化学项目的检验。采血者的左手拇食两指从背部较紧地握住小鼠或大鼠的颈部（大鼠采血需带上纱手套），应防止动物窒息。当取血时左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧，使眶后静脉丛充血。右手持续接7号针头的1ml注射器或长颈（34cm）硬质玻璃滴管（毛细管内径0.5-1.0mm），使采血器与鼠面成45的夹角，由眼内角刺入，针头斜面先向眼球，刺入后再转180度使斜面对着眼眶后界。刺入约45mm。当感到有