研究生开题报告

1、附件一学术学位研究生学位论文开题报告要求研究生学位论文开题报告是研究生培养过程的重要环节，直接关系到硕士研究生学位论文的质量。为了保证和促进学术学位研究生按期完成开题报告，现将有关事项具体要求如下：一、开题报告的时间一般在第二学期结束后，研究生在导师指导下拟订论文工作计划，在文献阅读、科研调研的基础上递交开题报告，由医院定期组织学位论文集中开题报告会。二、选题的原则选题是要注意以下原则：课题的创新性、科学性、可行性及实用性。三、开题报告汇报的内容1、课题的来源、选题的依据及意义（包括科学意义和发展前景，国内外研究生概况、发展趋势）。2、研究内容、技术路线和预期结果（包括具体内容、总体安排、进度

2、和阶段完成目标） 。3、研究过程中可能遇到的问题和解决方法。4、已具备的研究条件和经费使用情况。四、开题报告的要求1、开题报告由医院集中组织进行，并聘请相关学科专家参加论证，广泛听取意见。2、开题报告后，研究生将开题报告情况和专家提出的修改意见进行整理，填入研究生培养手册中的“学位论文开题报告栏”。3、课题计划一经批准，一般不再变更，若有特殊情况需要更换课题，必须重新开题，并按以上程序进行。五、组织与管理1、研究生应按照“开题报告的内容”逐项撰写不少于3000字的开题报告。2、开题报告评议专家组一般由三到五名副高及以上职称的专家组成。3、由医教部教务科组织召开开题答辩会议，研究生准备5分钟的P

3、PT在会议上作开题陈述，开题报告评议专家对该生的论文选题进行集体评议并给出建议。4、开题报告通过者，研究生根据专家组提出的建议，对开题报告进行完善，并填入研究生培养手册中的“学位论文开题报告栏”。5、开题报告不通过者，应重新选题并由所在学科点和导师在一个月内重新组织开题。6、开题答辩会面向全院公开，相关、相近专业的导师和研究生必须参加，未参加者不准予开题。附件二新桥医院研究生学位开题报告申请表姓 名孟凡飞年 级2014培养科室检验科学 号2002014547学科专业临川检验诊断导 师蒲晓允人员类别博士 在职博士研究生 硕士 在职硕士研究生 拟定题目穿孔素适配体的筛选与鉴定内容是否涉密学位类别学

4、术学位联系方师意见（请推荐5名论证专家。） 导 师：年 月 日推 荐 专 家姓 名部 职 别联系电话科室意见科室主任： 年 月 日 医院意见 年 月 日 备 注第三军医大学第二附属医院硕士研究生开题论证报告摘要姓 名孟凡飞学 号2002014547导师姓名蒲晓允学科专业临床检验诊断学位类别科学学位（ ）专业学位（ ）课题名称穿孔素适配体的筛选与鉴定课题来源国家自然科学基金课题经费（万元）80万主要研究内 容1.构建ssDNA文库及引物合成：构建长度为81个nt的随机ssDNA文库（南京全式金公司）两端为固定序列，中间35个nt为随机序列，库容量大约为1010，库的序列

5、为P81ss库：CCCCTGCAGGTGATTTTGCTCAAGT-(N35)-AGTATCGCTAATCAGGCGGAT，引物P81-SP: 5 ' -CCCCTGCAGGTGATTTTGCTCAAGT-3'；引物P81-AP: 5 ' Biotin-ATCCGCCTGATTAGCGATACT-3 '. 2.羧基磁珠包被蛋白：定量穿孔素蛋白溶液与定量磁珠孵育，利用蛋白定量试剂盒计算穿孔素蛋白包被的效率。3.SELEX过程：适配子筛选主要包括结合、分离、扩增、分离ssDNA、再结合等重复步骤，其中筛选过程主要是在BSA包被的EP管中，ssDNA与酵母tRNA 竞

6、争结合包被了穿孔素蛋白的磁珠，置磁力架吸弃上清，洗去未结合的ssDNA，重复3次。 4.转化与测序：将筛选到的ssDNA序列装入了TA载体转化入大肠杆菌DH5，挑取单克隆菌株进行通用引物 PCR，将PCR产物纯化后进行DNA测序。 5.亲和力检测及二级结构预测：筛选到的几条ssDNA序列进行native-PAGE电泳，以原始ssDNA文库为对照，选取亲和力最强的适配体预测其二级结构，不同浓度的适配体同定量的穿孔素蛋白进行native-PAGE电泳，得到结合力最佳的适配体浓度。 6.特异性检测：将所得的适配体，同-干扰素、牛血清白蛋白、补体C9在硝酸纤维素薄膜上进行适配体印记实验，检测适配体特异

7、性。预期研究目 标1 筛选出高亲和力，高特异性的穿孔素适配体序列。2 获取同穿孔素蛋白结合力最佳的适配体浓度。3 研制出实现上述目标的检测试剂和规范的操作流程。4主要创新点及科学意 义穿孔素蛋白是机体内具有细胞毒作用的效应分子，储存在细胞毒性T细胞和NK细胞胞质颗粒中，两种效应细胞与靶细胞接触时，释放的穿孔素通过聚合作用而在靶细胞表面形成小孔，从而介导杀伤作用。因此穿孔素蛋白的检测可协助了解活化T淋巴细胞的数量，从而反映出机体细胞免疫功能状态，为临床医生选择最佳的治疗方案、观察治疗效果和判断愈后提供帮助。适配体是一小段经体外筛选得到的寡核苷酸序列,能与相应的配体进行高亲和力和强特异性的结合，具

8、有疾病诊断与治疗的应用潜力。本研究鉴于穿孔素蛋白检测的意义，筛筛选出特异的穿孔素适配体并加以鉴定，为以后穿孔素研究及构建新的检测方法提供支持。技术路线及 研 究方案（含主要技术指标与检测方法）适配体印记实验，检测适配体特异性结合力最佳的适配体浓度检测二级结构预测native-PAGE电泳，选取亲和力最强的适配体产物纯化后进行DNA测序转化后挑取单克隆进行通用引物 PCRSELEX筛选，产物PCR扩增，PCR产物纯化，分离ssDNA文库穿孔素蛋白包被羧基磁珠建立ssDNA文库及合成引物穿孔素适配体的筛选与鉴定可 行 性分 析1. 检验医学上有需求：适配体特异性强、制备简单、无免疫原性且利于储存，

9、其独特的优越性，已成为医学检验研究的热点和重要的检测工具。2. 有课题实施经验:：课题组先后承担国家自然科学基金、国家“863”和国防预研项目等国家级项目，具有丰富的科研项目设计、组织、实施经验，能够保证项目的开展。3. 研究团队有保证：导师及项目组成员长期从事医学快速检测、微流控技术及适配体传感器研究工作，掌握本项目有关的实验技术与方法。经费预算ssDNA文库的建立及引物设计 500羟基磁珠 2000 PCR试剂 3000Native-PAGE试剂配制 3000其他试剂 2000DNA测序 2000穿孔素蛋白 12000导师意见导师签名：填表说明：1.“课题来源”按自选、国家、军队或地方课题填写，如“国家自然基金”；2.“主要研究内容”应集中，研究预期目标要明确；3.“主要创新点、科学意义”及“技术路线”要简明扼要；4.“可行性分析”应从立论依据、技术