第02章药物的鉴别试验

1、第二章第二章药物的鉴别试验药物的鉴别试验O返回基本要求基本要求掌握：掌握：鉴别试验的目的、药物性状和物理常鉴别试验的目的、药物性状和物理常数的测定及其对药物鉴别的作用，常用鉴别数的测定及其对药物鉴别的作用，常用鉴别方法与选择。方法与选择。熟悉熟悉: : 鉴别试验的影响因素与注意事项。鉴别试验的影响因素与注意事项。了解：了解：鉴别试验方法的验证。鉴别试验方法的验证。O返回基本内容基本内容一、概述一、概述二、药物鉴别的项目二、药物鉴别的项目三、药物鉴别的方法三、药物鉴别的方法四、鉴别试验的条件四、鉴别试验的条件练习与思考练习与思考O返回 鉴别试验鉴别试验(identification test)(

2、identification test)：根据药物的分子结构、理化性质，根据药物的分子结构、理化性质，采用化学、物理化学或生物学方采用化学、物理化学或生物学方法来判断药物的真伪。法来判断药物的真伪。 O返回药物的鉴别试验包括：药物的鉴别试验包括：性状性状和和鉴别鉴别（一）性状（一）性状（definition)definition)聚集状态、晶形聚集状态、晶形 1. 1.外观外观色泽色泽臭、味臭、味O返回例例 维生素维生素B B1 1 Ch.P Ch.P（20102010） 【性状性状】本品为白色结晶或结晶性粉末；有本品为白色结晶或结晶性粉末；有微弱的特臭，味苦；干燥品在空气中迅速吸收微弱的特臭

3、，味苦；干燥品在空气中迅速吸收约约4%4%的水分。的水分。（色泽）（色泽）（聚集状态）（聚集状态）（臭）（臭）（味）（味）O返回2. 2. 溶解度溶解度极易溶：极易溶：1 1份溶质在不到份溶质在不到1 1份溶剂中溶解份溶剂中溶解 易溶：易溶： 1 1份溶质在份溶质在1 1份份不到不到1010份溶剂中溶解份溶剂中溶解 溶解溶解: 1: 1份溶质在份溶质在1010份份不到不到3030份溶剂中溶解份溶剂中溶解 略溶略溶: 1: 1份溶质在份溶质在3030份份不到不到100100份溶剂中溶解份溶剂中溶解 微溶微溶: : . .在在100100份份不到不到10001000份溶剂中溶解份溶剂中溶解 极微溶

4、解极微溶解: :在在10001000份份不到不到1000010000份溶剂中溶解份溶剂中溶解 几乎不溶或不溶：几乎不溶或不溶：1000010000份溶剂中不完全溶份溶剂中不完全溶 O返回凡例凡例项目与要求项目与要求Ch.PCh.P（20102010）（2 2）溶解度是药品的一种物理性质。各品种项下选用）溶解度是药品的一种物理性质。各品种项下选用的部分溶剂及其在该溶剂中的溶解性能，可供精制或制的部分溶剂及其在该溶剂中的溶解性能，可供精制或制备溶液时参考。备溶液时参考。例例 尼莫地平尼莫地平 Ch.PCh.P（20102010） 【性状性状】 本品在丙酮、三氯甲烷或乙酸乙酯中本品在丙酮、三氯甲烷或

5、乙酸乙酯中易溶易溶，在乙醇，在乙醇中中溶解溶解，在乙醚中，在乙醚中微溶微溶，在水中，在水中几乎不溶几乎不溶。O返回 其测定结果不仅对药品具有鉴别意义，也其测定结果不仅对药品具有鉴别意义，也可反映药品的纯度，是评价药品质量的主要指可反映药品的纯度，是评价药品质量的主要指标之一。标之一。3. 3. 物理常数物理常数相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、吸收系数、碘值、皂化值、酸值。率、黏度、吸收系数、碘值、皂化值、酸值。O返回 第一法：易碎的固体药品第一法：易碎的固体药品1 1）熔点）熔点 第二法：不易碎的固体药品（脂肪酸、石蜡等）第二法：不易碎

6、的固体药品（脂肪酸、石蜡等） 第三法：凡士林或其他类似的物质第三法：凡士林或其他类似的物质例例 扑米酮扑米酮 Ch.PCh.P（20102010） 【性状性状】熔点熔点 本品的熔点（附录本品的熔点（附录 C C）为）为280284280284。O返回clntD100摩尔吸收系数摩尔吸收系数=A/CL=A/CL 3 3）吸收系数）吸收系数 百分吸收系数百分吸收系数CLAEcm%11 2 2）比旋度）比旋度：指在一定波长下，偏振光透过：指在一定波长下，偏振光透过1 1dmdm且且每每1 1mlml中含有旋光性物质中含有旋光性物质1 1g g的溶液时测得的旋光度。的溶液时测得的旋光度。可用于鉴别药物

7、、检查药物的纯度和含量测定。可用于鉴别药物、检查药物的纯度和含量测定。 O返回例例 维生素维生素C Ch.PC Ch.P（20102010） 【性状性状】比旋度比旋度 取本品，精密称定，加水溶解并定取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每量稀释制成每1ml1ml中约含中约含0.10g0.10g的溶液，依法测定的溶液，依法测定，比旋比旋度为度为+20.5+20.5+21.5 +21.5 . .例例 盐酸氨溴索盐酸氨溴索 Ch.PCh.P（20102010） 【性状性状】吸收系数吸收系数 精密称取本品适量，加精密称取本品适量，加0.01mol/L0.01mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每盐酸

8、溶液溶解并定量稀释制成每1ml1ml中约含中约含2525g g的溶液，照紫外的溶液，照紫外- -可见分光光度法，在可见分光光度法，在244nm244nm的波的波长处测定吸光度，吸收系数长处测定吸光度，吸收系数( )( )为为233233247247。%11cmEO返回（二）一般鉴别试验（二）一般鉴别试验 （general identification testgeneral identification test）ChPChP附录中有：附录中有：丙二酰脲类丙二酰脲类、托烷生物碱类托烷生物碱类、芳芳香第一胺类香第一胺类、有机氟类有机氟类、无机金属类（无机金属类（Na, K, Li, Ca, Na

9、, K, Li, Ca, Ba, Fe.,Al, Zn,Cu, Ag,HgBa, Fe.,Al, Zn,Cu, Ag,Hg等）、等）、有机酸盐类（水杨酸有机酸盐类（水杨酸盐）盐）、无酸盐类。、无酸盐类。 只能证实为只能证实为某一类某一类药物，不能证实为某一种药物。药物，不能证实为某一种药物。O返回1. 1.有机氟化物有机氟化物有机氟有机氟氧瓶燃烧氧瓶燃烧无机氟离子无机氟离子pH4.3pH4.3 茜素氟蓝茜素氟蓝硝酸亚铈硝酸亚铈蓝紫色蓝紫色络合物络合物O返回2. 2. 有机酸盐有机酸盐(1) (1) 水杨酸水杨酸水杨酸水杨酸 + + FeClFeCl3 3中性条件中性条件弱酸性条件弱酸性条件红色

10、配位化合物红色配位化合物紫色紫色配位化合物配位化合物（酚（酚OHOH）+COO-O-2Fe3Fe+12HCICOOHOH4FeCI36O返回(2) (2) 酒石酸盐酒石酸盐供试品溶液（中性）供试品溶液（中性）+ 氨制硝酸银氨制硝酸银水浴中水浴中 银镜银镜（还原性）（还原性）O返回3.3.芳香第一胺类芳香第一胺类供试品供试品+ 稀盐酸稀盐酸 亚硝酸钠亚硝酸钠碱性碱性 - -萘酚试液萘酚试液橙黄到猩红色橙黄到猩红色O返回 4. 4.托烷生物碱类托烷生物碱类具有莨菪酸结构，有具有莨菪酸结构，有VitaliVitali反应反应, ,显显紫色紫色。三硝基衍生物莨菪酸托烷类发烟硝酸水解醌型（紫色）醇溶液K

11、OH5.5.无机金属盐无机金属盐 （1 1）钠盐、钾盐、钙盐的）钠盐、钾盐、钙盐的焰色反应焰色反应 NaNa+ +显显鲜黄色鲜黄色 K K+ +显显紫色紫色 CaCa2+2+显显砖红色砖红色 O返回（2 2）铵盐）铵盐供试品供试品+ + NaOHNaOH 氨气氨气碱性：使湿润的红色石蕊碱性：使湿润的红色石蕊 试纸变蓝试纸变蓝还原性：使硝酸亚汞试还原性：使硝酸亚汞试液湿润的滤纸显黑色液湿润的滤纸显黑色臭臭：氨臭氨臭O返回6. 6. 无机酸根无机酸根 氯化物：氯化物：? ? 硫酸盐：硫酸盐：? ?O返回如：母核相同，如：母核相同， 取代基不同取代基不同一般鉴别试验一般鉴别试验某一某一类类药物药物专

12、属鉴别实验专属鉴别实验此类药物中的此类药物中的某一某一种种药物药物（三）专属鉴别试验（三）专属鉴别试验 ( (specific identification test)specific identification test)O返回HNNHOOC2H5OC2H5苯巴比妥苯巴比妥司可巴比妥司可巴比妥钠钠巴比妥巴比妥HNNOOONaCH2CHCH2C3H7HNNHOOC2H5O例例 司可巴比妥钠司可巴比妥钠 Ch.PCh.P（20102010） 【鉴别鉴别】（2 2）取供试品）取供试品0.1g0.1g，加水，加水10ml10ml溶解后，溶解后，加碘试液加碘试液2ml2ml，所显棕黄色在，所显棕黄色

13、在5 5分钟内消失。分钟内消失。 （4 4）本品显丙二酰脲类的鉴别反应（附录）本品显丙二酰脲类的鉴别反应（附录). ). 例例 苯巴比妥苯巴比妥 Ch.PCh.P（20102010） 【鉴别鉴别】（1 1）取本品约）取本品约10mg10mg，加硫酸，加硫酸2 2滴与亚滴与亚硝酸钠约硝酸钠约5mg5mg，即显橙黄色，随即转橙红色。，即显橙黄色，随即转橙红色。 （4 4）本品显丙二酰脲类的鉴别反应（附录）本品显丙二酰脲类的鉴别反应（附录).).O返回三、鉴别方法三、鉴别方法（一）化学鉴别法（一）化学鉴别法要求：专属性强、再现性好、灵敏度高、操作简便快速要求：专属性强、再现性好、灵敏度高、操作简便快

14、速例例 阿司匹林阿司匹林Ch.PCh.P（20102010） 【鉴别鉴别】（1 1）取本品约）取本品约0.1g0.1g，加水，加水10ml10ml，煮沸，放，煮沸，放冷，加三氯化铁试液冷，加三氯化铁试液1 1滴，即显紫堇色。滴，即显紫堇色。O返回例例 尼可刹米尼可刹米 Ch.PCh.P（20102010） 【鉴别鉴别】（3 3）取本品）取本品2 2滴，加水滴，加水1ml 1ml ，摇匀，加硫酸铜，摇匀，加硫酸铜试液试液2 2滴与硫氰酸胺试液滴与硫氰酸胺试液3 3滴，即生成滴，即生成草绿色沉淀草绿色沉淀。O返回例例 维生素维生素 B1 Ch.PB1 Ch.P（20102010） 【鉴别】（【鉴别

15、】（1 1）取本品约取本品约5mg,5mg,加氢氧化钠试液加氢氧化钠试液2.5ml 2.5ml 溶解后，溶解后，加铁氰化钾试液加铁氰化钾试液 0.5ml0.5ml与正丁醇与正丁醇5ml 5ml ，强力振摇，强力振摇2 2 分钟，放置分钟，放置使分层，上面的醇层显强烈的使分层，上面的醇层显强烈的蓝色荧光蓝色荧光；加酸使成酸性，荧光；加酸使成酸性，荧光即消失；再加碱使成碱性，荧光又显出即消失；再加碱使成碱性，荧光又显出 。O返回例例 尼可刹米尼可刹米 Ch.PCh.P（20102010） 【鉴别鉴别】（1 1）取本品）取本品 10 10 滴，加氢氧化钠试液滴，加氢氧化钠试液3ml3ml，加热，即，

16、加热，即发生发生二乙胺的臭气二乙胺的臭气，能使湿润的红色石蕊试纸变蓝色。，能使湿润的红色石蕊试纸变蓝色。O返回 制备衍生物测定熔点法制备衍生物测定熔点法 药物试剂药物试剂 新化合物有一定新化合物有一定mp;mp; 药物酸化或碱化生成游离酸或碱。药物酸化或碱化生成游离酸或碱。 操作繁琐费时间，应用较少。操作繁琐费时间，应用较少。O返回（二）光谱鉴别法（二）光谱鉴别法1. 1. 紫外光谱鉴别法紫外光谱鉴别法紫外光谱图紫外光谱图max mix maxA 21A/A%1cm1E原理：原理：缺点：光谱较简单，曲线性状变化不大，专属性小于缺点：光谱较简单，曲线性状变化不大，专属性小于IRIR特点：具有一定

17、的专属性，仪器普及率高，操作简单，特点：具有一定的专属性，仪器普及率高，操作简单，应用范围广应用范围广方法：方法：O返回例例 盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪 Ch.PCh.P（20102010） 【鉴别鉴别】（2 2）取本品，加盐酸溶液（）取本品，加盐酸溶液（9910001000）制成每）制成每1ml1ml中约含中约含5 5g g的溶液，照紫外的溶液，照紫外- -可见可见分光光度法（附录分光光度法（附录 A A）测定，在）测定，在254nm254nm与与306306nmnm的波长处有最大吸收，在的波长处有最大吸收，在254nm254nm的波长处吸光的波长处吸光度约为度约为0.460.46。O返回例例 维

18、生素维生素B B2 2 Ch.P Ch.P（20102010） 【鉴别鉴别】（2 2）取含量测定项下的溶液，照紫）取含量测定项下的溶液，照紫外外- -可见分光光度法（附录可见分光光度法（附录 A A）测定，在）测定，在267nm267nm、375nm375nm与与444nm444nm的波长处有最大吸收。的波长处有最大吸收。375nm375nm波波长处的吸光度与长处的吸光度与267nm267nm波长处的吸光度的比值应波长处的吸光度的比值应为为0.360.390.360.39。O返回2. 2. 红外光谱鉴别法红外光谱鉴别法特点：特点：Ch.P Ch.P 标准图谱对照法标准图谱对照法 药品红外光谱集

19、药品红外光谱集USP USP 对照品对照法对照品对照法 方法：方法：试样制备方法：试样制备方法：压片法、糊法、膜法、溶液法压片法、糊法、膜法、溶液法基线及取样量：基线及取样量：O返回 压片法压片法供试品（约供试品（约1mg) + 干燥干燥KBr/KCl (约约200mg) 研磨均匀研磨均匀 （玛瑙研钵）（玛瑙研钵） 置压膜中置压膜中真空真空加压至加压至0.8-1GPa2-3min均匀透明片均匀透明片无明显颗粒无明显颗粒供试片供试片同法制空白同法制空白KBr/KCl片，做空白校正，扣除背景干扰片，做空白校正，扣除背景干扰O返回 糊法糊法供试品（约供试品（约5mg ）,滴加少量液体石蜡或其他液体滴

20、加少量液体石蜡或其他液体制成糊状物制成糊状物玛瑙研钵玛瑙研钵 取适量取适量 夹于两个夹于两个KBr片片（150mg/片）之间片）之间供试片供试片KBr（约（约300mg）制成空白片，作背景校正）制成空白片，作背景校正O返回 膜法膜法 供试品多为高分子聚合物，可做成液膜铺供试品多为高分子聚合物，可做成液膜铺展于适宜的盐片上。展于适宜的盐片上。 溶液法溶液法 液体供试品（或溶于适宜的溶剂内），液体供试品（或溶于适宜的溶剂内）， 制成制成1%-10%1%-10%的溶液，置于的溶液，置于0.1-0.5mm0.1-0.5mm厚的厚的液体池中，即可测得。液体池中，即可测得。O返回原料药的鉴别实测光谱与光谱

21、集光谱不一致：实测光谱与光谱集光谱不一致：（1 1）注意多晶型问题）注意多晶型问题转晶；转晶；（2 2）使用对照品，和供试品用相同溶剂重结晶）使用对照品，和供试品用相同溶剂重结晶；（3 3）用规定的特定的药用晶型；）用规定的特定的药用晶型；（4 4）改变制样方法：固体制样溶液制样。）改变制样方法：固体制样溶液制样。 O返回制剂的鉴别 提取分离提取分离 溶剂要适宜溶剂要适宜 辅料干扰要少辅料干扰要少 避免晶型转变避免晶型转变u 辅料无干扰，辅料无干扰，晶型无变化晶型无变化u 辅料无干扰，辅料无干扰，晶型有变化晶型有变化u 晶型无变化，晶型无变化，辅料有干扰辅料有干扰u 晶型有变化，晶型有变化，辅

22、料有干扰辅料有干扰O返回制剂的鉴别 方法总结方法总结 直接提取，如盐酸四环素片（热乙醇提取）直接提取，如盐酸四环素片（热乙醇提取） 盐的主成分提取，如磷酸氯喹片盐的主成分提取，如磷酸氯喹片 酸的主成分提取，如吉非贝齐胶囊酸的主成分提取，如吉非贝齐胶囊 直接取样，如氨甲环酸胶囊直接取样，如氨甲环酸胶囊 其它方法其它方法O返回O返回O返回O返回O返回O返回例例 阿司匹林阿司匹林 Ch.PCh.P（20102010） 【鉴别鉴别】（3 3）本品的红外光吸收图谱应与对）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集照的图谱（光谱集5 5图）一致。图）一致。对比时应注意的问题：对比时应注意的问题：P80 (

23、1)- (5)P80 (1)- (5)O返回 TLC TLC （R Rf f样样R Rf f对对）方法：方法： PCPC HPLC HPLC 、 GC GC （t tR R样样t tR R对对） 原理：原理：不同物质在不同色谱条件下，产生各自不同物质在不同色谱条件下，产生各自的特征色谱行为。与对照品在相同条件下进行的特征色谱行为。与对照品在相同条件下进行色谱分离，并比较其保留行为和检测结果是否色谱分离，并比较其保留行为和检测结果是否一致来验证真伪。一致来验证真伪。（三）色谱鉴别法（三）色谱鉴别法O返回( (R Rf f的最佳范围的最佳范围0.3-0.5,0.3-0.5,可用范可用范围围0.2-

24、0.8)0.2-0.8)薄层色谱法薄层色谱法 比移值比移值( (R Rf f) )定性参数定性参数原点到斑点中心距离原点到斑点中心距离原点到溶剂前沿距离原点到溶剂前沿距离R Rf f= = =L LL L0 0原点原点 L L0 0L L1 1L L2 2前沿前沿O返回颜色、大小颜色、大小 位置位置 S 结构相结构相似药物似药物 供供+结构相结构相似药物似药物 供供+S 分离效能分离效能 O返回O返回O返回例例 维生素维生素B B6 6 Ch.P Ch.P（20102010） 【鉴别鉴别】（2 2）在含量测定项下记录的色谱图）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液

25、中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。主峰的保留时间一致。O返回（四）显微鉴别法（四）显微鉴别法 选择原则：选择原则： 1 应选有专属性的特征进行鉴别。应选有专属性的特征进行鉴别。 2多来源的药材应选择共有的特征进行鉴别。多来源的药材应选择共有的特征进行鉴别。用显微镜观察药材及含药材粉末的中成药用显微镜观察药材及含药材粉末的中成药的组织构造、细胞形状以及化合物的特征，以的组织构造、细胞形状以及化合物的特征，以鉴别中药的真伪。鉴别中药的真伪。具有快速、简便、覆盖面大等特点。具有快速、简便、覆盖面大等特点。大、小决明子及望江南种皮横切面详图（大、小决明子及望江南种皮横切面详

26、图（400） 大决明子大决明子 小决明子小决明子 望江南望江南 1.种皮角质层 2.栅状细胞表面观 3.栅状细胞横切面观 4.支持细胞表面观 5.支持细胞6.营养层薄壁细胞 7.种皮薄壁细胞 8.胚乳细胞 9.子叶碎片大、小决明子及望江南粉末图（大、小决明子及望江南粉末图（400） O返回（五）生物学鉴别法（五）生物学鉴别法 利用微生物或实验动物进行鉴别利用微生物或实验动物进行鉴别的方法的方法无无抑抑菌菌作作用用青青霉霉素素酶酶青霉素钠青霉素钠灭活灭活有有抑抑菌菌作作用用O返回例例 胰岛素胰岛素 Ch.PCh.P（20052005） 【鉴别鉴别】（3 3）取本品适量，加用酸调节至）取本品适量，

27、加用酸调节至pHpH值为值为2.53.02.53.0的水制成每的水制成每1ml1ml中含中含5 5单位的溶液。在单位的溶液。在20302030条件下，取体重条件下，取体重2024g2024g的小鼠的小鼠5 5只，按每只，按每20g20g体重皮下注射上述溶液体重皮下注射上述溶液0.25ml0.25ml，注射后，注射后2 2小时小时内，至少应有内，至少应有4 4只小鼠发生惊厥。立即给惊厥的小只小鼠发生惊厥。立即给惊厥的小鼠腹腔注射鼠腹腔注射10%10%葡萄糖注射液葡萄糖注射液1ml1ml，应能使惊厥，应能使惊厥停止。停止。（六）指纹图谱与特征图谱鉴别法（六）指纹图谱与特征图谱鉴别法菊花提取物的指纹

28、图谱菊花提取物的指纹图谱1 1绿原酸绿原酸2 2黄芩苷黄芩苷3 3木犀草素木犀草素4 4芹菜素芹菜素1滁菊，产地：滁州市全椒县，日期：2011.3；2黄山贡菊，产地：黄山市歙县，日期：2011.4；3共有模式图1滁菊、黄山贡菊及其共有模式指纹图谱图10批瓜蒌薤白颗粒与10批瓜蒌药材乙酸乙酯部位指纹图谱1-10：瓜蒌薤白颗粒，11-20：瓜蒌图乙酸乙酯部位共有模式图谱图10批瓜蒌薤白颗粒与10批薤白药材正丁醇部位指纹图谱1-10：瓜蒌薤白颗粒，11-20：薤白图正丁醇部位共有模式图谱O返回（一）溶液的浓度（一）溶液的浓度 溶液的浓度溶液的浓度主要指被鉴别物质的浓度，其大小影响主要指被鉴别物质的浓度，其大小影响结果的判断。如化学法中要观察沉淀、颜色；结果的