实验7植物的组织培养(浙科版选修1)xuesheng

1、组织培养组织培养营养繁殖营养繁殖扦插扦插嫁接嫁接压条压条 植物植物 无性繁殖无性繁殖方法方法实验实验11 11 植物的组织培养植物的组织培养一、基础知识取一部分植物组织，如叶、芽、茎、根、花瓣取一部分植物组织，如叶、芽、茎、根、花瓣或花粉等，在无菌条件下接种在三角瓶中的琼或花粉等，在无菌条件下接种在三角瓶中的琼脂培养基上，给予一定的温度和光照，使之产脂培养基上，给予一定的温度和光照，使之产生愈伤组织，或进而生根发芽。生愈伤组织，或进而生根发芽。2 2、植物组织培养的原理是什么？、植物组织培养的原理是什么？植物细胞具有全能性植物细胞具有全能性，即植物体的细胞，即植物体的细胞，具有发育成为完整植物

2、体的能力。具有发育成为完整植物体的能力。3 3、植物组织培养过程中通过什么手段可、植物组织培养过程中通过什么手段可以诱导不同器官的生成？以诱导不同器官的生成？通过改变细胞分裂素和生长素的比例通过改变细胞分裂素和生长素的比例细胞分裂素细胞分裂素/ /生长素的比例高，诱导芽的生成。生长素的比例高，诱导芽的生成。发芽培养基发芽培养基: :细胞分裂素细胞分裂素/ /生长素的比例中等，生长素的比例中等，愈伤组织生长但不分化。愈伤组织生长但不分化。细胞分裂素细胞分裂素/ /生长素的比例低，诱导根的分化。生长素的比例低，诱导根的分化。生根培养基生根培养基: :4.4.植物组织培养的基本过程植物组织培养的基本

3、过程: :离体离体的植物的植物器官、组织、器官、组织、细胞细胞脱分化愈愈伤伤组组织织再分化根根芽芽植植物物体体烟草植株取根细胞培养形成愈伤组织发育成幼胚长成植 物幼体成熟植株消毒、灭菌处理消毒、灭菌处理5.5.植物组织培养条件植物组织培养条件: :含有全部营养成分的培养基、一定的温度、含有全部营养成分的培养基、一定的温度、空气、无菌环境、合适的空气、无菌环境、合适的PHPH、适时光照、适时光照、一定浓度的激素配比等。一定浓度的激素配比等。本实验使用的是人工合成的萘乙酸（生长素）本实验使用的是人工合成的萘乙酸（生长素）人工合成的苄基腺嘌呤（细胞分裂素）人工合成的苄基腺嘌呤（细胞分裂素）二、菊花的

4、组织培养( (一一) )设备及用品设备及用品1.100ml1.100ml三角瓶或大口培养瓶三角瓶或大口培养瓶 2.2.镊子镊子 3.3.超净台超净台 4.4.灭菌锅灭菌锅 5.5.封口膜和橡皮圈封口膜和橡皮圈 6.6.有棉球的广口瓶有棉球的广口瓶 7.7.酒精灯酒精灯 8.8.三角漏斗三角漏斗 9.9.培养皿培养皿( (二二) )材料材料1.MS1.MS培养基培养基( (用于配置发芽和生根培养基用于配置发芽和生根培养基) )2.2.萘乙酸用少量萘乙酸用少量0.1mol/LNaOH0.1mol/LNaOH溶液溶解溶液溶解, ,苄基腺嘌呤用少量苄基腺嘌呤用少量0.1mol/LHCL0.1mol/L

5、HCL溶解溶解3.3.发芽培养基发芽培养基( (灭菌灭菌) )4.4.生根培养基生根培养基( (灭菌灭菌) )( (三三) )步骤步骤1.1.取外植体取外植体 超净台上将无菌培养的幼苗切段超净台上将无菌培养的幼苗切段, ,每段至少每段至少1 1张叶片张叶片2.2.生芽培养生芽培养 生芽培养基中生芽培养基中, ,放入放入1-31-3段切段，使段切段，使一部分茎部插入培养基一部分茎部插入培养基, ,盖上封口膜盖上封口膜. .日光灯下保持日光灯下保持18251825的温度培养的温度培养, ,每天光照不少于每天光照不少于14.5h14.5h。3.3.生根培养生根培养2323周后周后, ,将丛状苗在无菌

6、条件下转入将丛状苗在无菌条件下转入生根培养基中生根培养基中, ,在上述条件下继续培养在上述条件下继续培养. .4.4.适应锻炼适应锻炼 将苗转移至草炭土或蛭石中将苗转移至草炭土或蛭石中, ,用玻璃用玻璃罩或塑料布保持罩或塑料布保持8080以上的湿度以上的湿度,23,23天后打开减低湿度进行锻炼天后打开减低湿度进行锻炼, ,直到将直到将罩全部打开处于自然湿度下为止。罩全部打开处于自然湿度下为止。5.5.定植定植将苗转移到土中培养，即可长成植株并开花。将苗转移到土中培养，即可长成植株并开花。若使用自然生长的茎进行组织培养使用自然生长的茎进行组织培养方法方法: :7070乙醇乙醇中浸泡中浸泡10mi

7、n10min5 5次氯酸次氯酸钠溶液中钠溶液中浸泡浸泡5min5min5 5次氯酸次氯酸钠溶液中钠溶液中浸泡浸泡5min5min超净台超净台上用无上用无菌水清菌水清洗洗将茎移将茎移至生芽至生芽培养基培养基中中思考与练习：P611.1.不同植物、不同组织的生根和生芽是否都可使不同植物、不同组织的生根和生芽是否都可使用与本实验相同的生长素和细胞分裂素浓度？用与本实验相同的生长素和细胞分裂素浓度？2.2.本实验用人工合成的激素，而不用植物中存在本实验用人工合成的激素，而不用植物中存在的天然激素，为什么？的天然激素，为什么？不可相同不可相同天然激素都有相应的使之分解的酶，所以天然激素都有相应的使之分解

8、的酶，所以使用时间短，而人工合成的激素，没有分使用时间短，而人工合成的激素，没有分解酶，作用时间长，效果显著。解酶，作用时间长，效果显著。3.3.如果在自然界取植物样本进行组织培养如果在自然界取植物样本进行组织培养, ,你认为你认为应采取什么措施保证样本不被污染应采取什么措施保证样本不被污染? ?（1 1）操作环境清洁（）操作环境清洁（2 2）植物样本的洁净）植物样本的洁净（3 3）操作敏捷迅速）操作敏捷迅速污染的预防措施（一）防止外植体带菌（一）防止外植体带菌（二）保证培养基及接种器具彻底（二）保证培养基及接种器具彻底灭菌灭菌（三）操作人员严格遵守无菌操作（三）操作人员严格遵守无菌操作规程规程（四）保证接种与培养环境清洁（四）保证接种与培养环境清洁愈伤组织 脱分化 已经分化的植物组织停止分裂。已经分化的植物组织停止分裂。 组织从这种状态中摆脱出来，恢复分裂和分组织从这种状态中摆脱出来，恢复分裂和分化能力的过程称为脱