高中生物21 微生物的实验室培养第一课时

1、1 1、器具的灭菌、器具的灭菌2 2、培养基的配制、培养基的配制3 3、培养基的灭菌、培养基的灭菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接种、微生物接种6 6、恒温箱中培养、恒温箱中培养7 7、菌种的保存、菌种的保存第一课时第一课时第二课时第二课时n微生物技术中，最基本、最核心的是微生物技术中，最基本、最核心的是微微生物培养技术。生物培养技术。n研究和应用微生物的前提是研究和应用微生物的前提是防止杂菌入防止杂菌入侵，获得纯净的培养物。侵，获得纯净的培养物。SARS病毒、病毒、 禽流感病毒禽流感病毒朊病毒（蛋白质）朊病毒（蛋白质）酵母菌酵母菌青霉菌青霉菌青霉素青霉素真菌真菌细菌的营养类型细菌的营养

2、类型 l根据细菌所利用的根据细菌所利用的能源和碳源能源和碳源的不同，将的不同，将细菌分为两大营养类型。细菌分为两大营养类型。自养菌自养菌: :异养菌异养菌: : 腐生菌： 寄生菌：光合自养型:光合细菌化能自养型:硝化细菌,铁细菌,硫细菌依靠分解动植物的遗体（尸体、粪便和枯枝落叶），从中吸取有机物来生活。例如枯草杆菌，它可以引起食物的腐败。从活的动植物体内吸取有机物来生活。例如寄生在肠道内的痢疾杆菌，它能够引起细菌性痢疾同化作用需氧型：好氧性细菌。如：枯草杆菌、硝化细菌、铁细菌、根 瘤菌等。厌氧型：厌氧性细菌。如：破伤风杆菌，大肠杆菌，乳酸菌等。 异养需氧型 异养厌氧型 自养需氧型 自养厌氧型问

3、：细菌的代谢类型属于什么方式? 在生态系统中处于什么地位?分解者或消费者生产者异化作用根据固氮微生物的固氮特点以及与植物的关系，可以将它们分为自生固氮微生物、共生固氮微生根据固氮微生物的固氮特点以及与植物的关系，可以将它们分为自生固氮微生物、共生固氮微生物和联合固氮微生物三类。物和联合固氮微生物三类。自生固氮微生物自生固氮微生物在土壤或培养基中生活时，可以自行固定空气中的分子态氮，对植物没有依存关在土壤或培养基中生活时，可以自行固定空气中的分子态氮，对植物没有依存关系，如系，如圆褐固氮菌圆褐固氮菌。共生固氮微生物共生固氮微生物只有和植物互利共生时，才能固定空气中的分子态氮。如与豆科植物互利共生

4、的只有和植物互利共生时，才能固定空气中的分子态氮。如与豆科植物互利共生的根瘤菌根瘤菌。固氮微生物和共生的植物之间具有一定的专一性，但是不形成根瘤那样的特殊结构。这些微生物固氮微生物和共生的植物之间具有一定的专一性，但是不形成根瘤那样的特殊结构。这些微生物还能够自行固氮，它们的固氮特点介于自生固氮和共生固氮之间，这种固氮形式叫做还能够自行固氮，它们的固氮特点介于自生固氮和共生固氮之间，这种固氮形式叫做联合固氮联合固氮。 生物固氮：生物固氮：固氮微生物将大气中的氮气还原固氮微生物将大气中的氮气还原成氨的过程（异养型生物）。成氨的过程（异养型生物）。缺乏合成这些物质所需要缺乏合成这些物质所需要的酶或

5、者合成能力有限。的酶或者合成能力有限。2、培养基的类型、培养基的类型:按培养基成分按培养基成分合成培养基合成培养基天然培养基天然培养基半合成培养基半合成培养基按物理性质按物理性质固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基按功能按功能选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基(1)按培养基的成分按培养基的成分 a.a.合成培养基合成培养基: : 由成分完全已知的化学试剂（各成分包括微量元素的量都确切知道）配制而成 特点特点: :成分已知、精确、重复性高、但价格较贵、配制麻烦、且微生物在其中生长速度较慢。 如:察氏（Czapek）培养基等。 b.b.天然培养基天然培养基: :

6、由天然物质配制而成 ,成分难以确定,但配制方便,营养丰富。蒸熟的马铃薯-用于培育霉菌普通牛肉汤-用于培育细菌c.c.半合成培养基半合成培养基: : 一类主要用已知化学成分的试剂配制，同时又添加某种或某些天然成分的培养基 如:马铃薯蔗糖培养基 固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基a.a.固体培养基固体培养基 在液体培养基中加入2%左右的凝固剂(如:琼脂、明胶等）的固体状态的培养基。用途:常用于微生物的分离、鉴定、活菌计数和菌种保藏等。b.b.液体培养基（培养液）液体培养基（培养液） 不加入凝固剂,成分均匀,微生物可充分接触和利用培养基中的养料,适于工业生产（如发酵工程

7、）等。c.c.半固体培养基半固体培养基 在液体培养基中加入少量(0.20.5% )凝固剂而呈半固体状态。用途：可用于观察微生物的运动、分类鉴定和测定噬菌体的效价等方面。固体培养基固体培养基半固体培养基半固体培养基液体培养基液体培养基主要用于微生物的主要用于微生物的分离、鉴定、活菌分离、鉴定、活菌计数和菌种保藏等计数和菌种保藏等主要用于观察微主要用于观察微生物的运动、分生物的运动、分类鉴定等类鉴定等主要用于工业生产主要用于工业生产需加入凝固需加入凝固剂，如琼脂剂，如琼脂a.a.选择培养基选择培养基b.b.鉴别培养基鉴别培养基 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其它种类微生物

8、生长的培养基叫做选择培养基。 根据微生物的代谢特点,在培养基加入某种指示剂或化学药品配制而成，用以鉴别不同种类的微生物。生物固氮：生物固氮：固氮微生固氮微生物将大气中的氮气还物将大气中的氮气还原成氨的过程（异养原成氨的过程（异养型生物）。型生物）。固氮微生物：固氮微生物：圆褐固圆褐固氮菌、根瘤菌等氮菌、根瘤菌等划分标准划分标准培养基种类培养基种类特点特点用途用途物理性质物理性质化学成分化学成分天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基功能功能鉴别培养基鉴别培养基培养基的分类培养基的分类不加凝固剂不加凝固剂加凝固剂，如琼脂、加凝固剂，如琼脂、明胶等明胶等工业生产（如发酵工程）工业生产（如发酵工程）

9、观察微生物的运动、观察微生物的运动、分类鉴定分类鉴定微生物分离、鉴定、微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌活菌计数、保藏菌种种含含化学成分不明确化学成分不明确的天然物的天然物质质工业生产工业生产培养基培养基成分明确成分明确分类、鉴定分类、鉴定在培养基中加入某种化学物在培养基中加入某种化学物质质, ,以以抑制不需要的微生物抑制不需要的微生物的生长的生长, ,促进所需要的微生促进所需要的微生物的生长物的生长培养、分离出特培养、分离出特定微生物定微生物在培养基中加入某种指示剂在培养基中加入某种指示剂或化学药品或化学药品, ,用以用以鉴别不同鉴别不同种类的微生物种类的微生物鉴别不同种类微鉴别不同种类微生

10、物生物选择培养基选择培养基液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基固体培养基固体培养基培养基的配制原则培养基的配制原则l目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。l营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如：碳氮比41时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为31时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。lpH要适宜：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。病毒目前不能利用人工培养基来培养，需接种在病毒目前不能利用人工培养基来培养，需接种在动、植物组织细胞中才能繁殖。常用于培养病毒动、植物组织细胞中才能繁殖。常用于培养病毒的是活鸡胚。的

11、是活鸡胚。B自养微生物所需碳源和能源为不同的物质，而自养微生物所需碳源和能源为不同的物质，而作为异养微生物碳源和能源的是（作为异养微生物碳源和能源的是（ ）nA.碳酸盐碳酸盐 B.含碳有机物含碳有机物 C.CO2 D.NaHCO3下列关于配制培养基的叙述，正确的是（下列关于配制培养基的叙述，正确的是（ ）A.制作固体培养基时必须加入琼脂制作固体培养基时必须加入琼脂B.加入青霉素可以得到放线菌加入青霉素可以得到放线菌C.培养自生固氮菌时不需要氮源培养自生固氮菌时不需要氮源D.发酵工程一般用半固体培养基发酵工程一般用半固体培养基消毒与灭菌两者最大的区别是消毒与灭菌两者最大的区别是:是否能杀死芽孢和

12、孢子是否能杀死芽孢和孢子外焰外焰 是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。干热灭菌实验原理高压蒸汽灭菌 是将待灭菌的物品放在一个密闭的高压蒸汽灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气,从而使温度高于100，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。高压蒸汽灭菌，在加压到高压蒸汽灭菌，在加压到100kPa之之前，要彻底排出锅内的冷空气，原前，要彻底排出锅内的冷空气，原因？因？l为了使高压锅能够在很短的时为了使高压锅能够在很短的时间内达到较高的温

13、度，使锅内间内达到较高的温度，使锅内充满水蒸气，并使水蒸气分子充满水蒸气，并使水蒸气分子运动达到尽可能快的速度，穿运动达到尽可能快的速度，穿透各种微生物菌体及芽孢等。透各种微生物菌体及芽孢等。紫外线灭菌 是用紫外线灯进行杀菌。紫外线杀菌机制主要是它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA链的交联，从而抑制了DNA的复制。波长为200-300nm的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌力最强。实验原理实验室常用灭菌方法的比较实验室常用灭菌方法的比较灭菌灭菌方法方法适用对象适用对象所需条件所需条件灭菌时间灭菌时间灼烧灼烧灭菌灭菌接种的金属工具接种的金属工具(如如接种针、接种接种针、接种环环)、试管口或瓶、试管口或瓶口口