青霉素发酵技术1.4 大米孢子制备(六步教学法)

1、教 案 首 页授课顺序 学时 日期 年 月 日 班级课题1.4大米孢子制备学习目标学习大米培养基制备、接种、培养及计数操作技术，掌握大米孢子制备的目的、原理、步骤以及应用领域，掌握试管斜面孢子到大米培养基（三角瓶或茄子瓶）的接种方法，掌握大米孢子的培养条件，进一步巩固无菌操作技术。主要内容（1）大米培养基制备（2）大米孢子的接种方法（3）大米孢子的培养（4）米孢子保藏（5）米孢子计数（6）无菌操作技术教学过程1、资讯 2、计划 3、决策 4、实施 5、检查 6、评价教具或工具 工作任务单、多媒体设备、灭菌锅、显微镜、超净工作台等载体产黄青霉培养物考核与评价采用工作任务单上的考核表进行评价，将评

2、价结果记入期末总成绩，并填写教师评语部分。轻工职业技术学院 教 案 NO 1 课程 青霉素发酵生产技术 201 /201 学年第 2 学期 教师 授课日期班 级工作过程：青霉素发酵生产技术教学任务1.3：产黄青霉菌株的平皿培养及菌种检测知识目标：（1）了解青霉素的分类及分子结构、作用机理应用等。（2）掌握青霉菌在固体培养基形态特征（3）熟悉青霉素产生菌生长发育过程（4）熟悉产黄青霉菌的特点（5）掌握大米孢子的制备方法。（6）掌握青霉菌菌种的保藏（7）掌握青霉菌的直接制片观察法（8）熟悉母瓶斜面固体培养基配方（9）掌握种子质量要求技能目标：（1）能配制察氏斜面培养基（2）会使用高压蒸汽灭菌锅（3

3、）学会无菌操作（4）会斜面划线接种产黄青霉菌株（5）学会使用恒温培养箱（6）会制备大米培养基（8）会配制乳酸石炭酸棉蓝染色液（9）会配制50%乙醇（10）会青霉菌直接制片（11）能正确使用显微镜（12）会制备菌悬液（供冻干用）（13）学会操作小型冻干机（14）会使用高频火花真空测定器测定冻干菌种真空度重点难点：（1） 青霉菌插片制片观察（2）青霉菌形态的准确鉴定（3）产黄青霉菌株保存 教学方法： “课堂，实训一体化”的现场教学方法；项目导入教学法。考核方法：组内自我评分和组间互评、实施过程评分、实验结果评分。学时安排：设计方案2学时、组织实施2学时教学札记： 编写日期：轻工职业技术学院 教 案

4、 附 页教学组织一、分组学生全部进入发酵室后，将其分为7组，各组组长兼任安全员、副组长兼任设备材料员，达到学生的自管自治和相互监督，学生与教师的高度配合。二、工作过程导入（资讯）教师通过ppt向学生展示青霉菌大米培养物，提出问题：大家想，由试管到茄子瓶培养物有什么变化？学生回答引导学生：容器大小？产黄青霉生长数量？孢子数量？最后得出结论。继续引导学生思考：我们在实验室自己如何能获得青霉菌大米培养物？为何用茄子瓶？如果没有茄子瓶，可拿什么容器代替（三角瓶？）。大米培养基如何制作，如何接种（还用划线法吗）？霉菌孢子的培养一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。培养的温度一般为252

5、8C。培养时间一般为414天。培养基的特点：成本低、米粒之间结构疏松提高比表面积和氧的传质，营养适当（要求大米的白点小）；有利于孢子的生长。怎样才能获得数量集中的孢子量？能否将一个玻片斜插如培养基上，来获得制片？（答案是肯定的）得到的培养物能否检测其生长量？大米孢子的要求：1粒米含1.4*106个孢子三、教学任务导入（资讯）要求学生快速浏览青霉素发酵学习指导书上的参考资料，并提炼出大米孢子制备的关键技术点，从而让学生建立对该工作过程的感性认识。接着教师随机指定学生回答问题：大米孢子培养物在青霉素发酵生产流程中的作用是什么？从而引出本次课要完成的任务。附：大米孢子制备过程：1. 将优质新米（大米

6、白点小）用水浸透2. 倒入搪瓷盘内蒸15分钟3. 蒸毕，取出搓散团块，稍冷，加0.5%到1.0%玉米浆4. 分装于茄形瓶内，装2到3层5. 蒸汽灭菌（121摄氏度30分钟）冷却备用6. 取制备好的斜面孢子管，加入少量无菌水，制成孢子悬液7. 接入到装有大米的茄形瓶（250毫升）中，培养2到3天，上下翻动一次，继续培养，直到大米表面长满菌丝，形成绿色孢子（4摄氏度冰箱内保存，10天内使用）。引导学生分析大米孢子制备的详细步骤，找出关键技术点，导出工作过程：由试管斜面培养物到大米培养基（三角瓶或茄子瓶）培养物的菌种扩增制备流程。四、任务实施1. 初步方案讨论（计划）以小组为单位，按照发酵实训任务书

7、上的“任务1.4、产黄青霉菌株大米孢子制备”的学习目标及任务要求，查阅学习指导书上的相应参考资料，通过学习，各小组分别讨论产黄青霉菌株的大米培养基制备、接种、培养及计数操作技术、填写项目任务书。2. 最佳方案筛选（决策）教师对各小组方案进行点评，推荐最佳方案，进行修改完善，并对其它小组的方案进行指导，找出错误或不足之处。同时，学生填写项目任务书。3. 方案具体实施各小组按照产黄青霉菌株大米孢子制备制备流程的定稿方案，利用实验室的器材，具体实施：将优质新米（大米白点小）用水浸透、倒入搪瓷盘内蒸15分钟、蒸毕，取出搓散团块，稍冷，加0.5%到1.0%玉米浆；分装于茄形瓶内，装2到3层；蒸汽灭菌（1

8、21摄氏度30分钟）冷却备用；取制备好的斜面孢子管，加入少量无菌水，制成孢子悬液、接入到装有大米的茄形瓶（250毫升）中，培养2到3天，上下翻动一次，继续培养，直到大米表面长满菌丝，形成绿色孢子（4摄氏度冰箱内保存，10天内使用）、分组交流以及进行孢子计数，最后进行显微拍照，制作自己青霉素发酵实训动漫演示作业。仔细观察实训生产的过程，对每一步都进行记录，最后完成小组用书的项目记录表。4. 关键能力的重点指导（检查）教师对学生的实践练习进行有效监控，巡回指导，及时指出不规范的操作。并对其关键能力进行重点指导。如大米筛选、拌制、分装、灭菌，孢子液制备、接种、培养，以及显微操作进行孢子计数等。5. 任务结果评价完成产黄青霉菌株的大米孢子制备任务后，各小组分别展示产黄青霉菌株的大米孢子三角瓶培养物。首先，进行组内自我评价和组间互评，接着，教师对每组结果进行评价，指出存在的问题和改进的方法。（附：评价项目包括：产黄青霉菌株大米培养物无杂菌污染、产黄青霉菌株在大米培养基上生长指标、镜下能观察到典型的不对称分生孢子梗及青绿色成串圆球形小孢子。）6. 任务小结 各组讨论进行项目小结、填写项目报告书。教师指出各小组在操作