农化分析第四章

1、第四章第四章 土壤氮和硫的测定土壤氮和硫的测定第一节 土壤氮的测定为什么要测定氮呢？为什么要测定氮呢？氮素的生理意义 植物必需的营养元素，主要构成蛋白质、核酸、叶绿素、酶、辅酶、辅基、维生素、生物碱、植物激素、酰脲。 缺氮不能完成其生活史，不能被其他元素代替。氮素的环境意义 水体富营养化（eutrophication），水体中含氮量大于0. 2 0. 3 mg/L NOx,NH4温室气体排放了解土壤、植物、水体等环境中氮素含量状况及其重要了解土壤、植物、水体等环境中氮素含量状况及其重要环境中氮素含量现状环境中氮素含量现状 土壤氮素消长决定于生物积累和分解作用生物积累和分解作用的强弱，与气候、植

2、被、水热条件等因素关系密切。 我国自然植被下主要土壤类型的土壤中含氮量由东向西递减，由北向南，先递减后渐增。 土壤一般含氮量在1.02.0 g kg-1氮素分布特征氮素分布特征 明天早上上实验，带实验报告纸，要求当堂完成实验报告明天早上上实验，带实验报告纸，要求当堂完成实验报告1 1有机氮占绝大部分，有机氮占绝大部分，9298%9298%。有机氮的矿化率只有。有机氮的矿化率只有36%36%。（1）可溶性有机氮 5%，主要为：游离氨基酸、氨盐（速效氮）及酰胺类化合物（2）可水解性有机氮5070%，用酸碱或酶处理而得。包括：蛋白质及肽类、核蛋白类、氨基糖类（3）非水解性有机氮3050%，主要可能是

3、杂环态氮、缩胺类 2 2无机态氮无机态氮 无机氮很少，占全氮15%(150ppm)。（1）铵态氮铵态氮(NH4)可被土壤胶体吸附，一般不易流失，但在旱田中，铵态氮很少，在水田中较多。在土壤里有三种存在方式：游离态、交换态、固定态。（2）硝态氮硝态氮（NO3-N）易流失，在土壤主要以游离态存在。（3）亚硝态氮亚硝态氮（NO2-N）主要在嫌气性条件下才有可能存在，而且数量也极少。在土壤里主要以游离态存在。3 3游离态氮（游离态氮（N N2 2） 土壤中氮素形态、含量土壤中氮素形态、含量 土壤和植物样品中氮素多以难直接测定的形态存在，要测定必须先制备待测液,把氮素转化为可溶解的无机态的NH4+或者N

4、O3-，按照测定NH4+或者NO3-的方法测定。制备待测液制备待测液总总( (全全) )氮氮有有( (速速) )效氮效氮选择测定指标选择测定指标NHNH4 4+ +NONO3 3- -NONO2 2- -消化消化化学提取化学提取生物培养生物培养多以难直接测定的有机结合态存在，要测定必须先消化（全部转化为易测定的形态，比如NH4+和NO3-）包括无机的矿物态氮和部分有机质中易分解的、比较简单的有机态氮，是铵态氮、硝态氮、氨铵态氮、硝态氮、氨基酸、酰胺和易水解的基酸、酰胺和易水解的蛋白质氮的总和蛋白质氮的总和凯氏定氮法干烧法生物培养法化学提取法碱解扩散法CaSO4提取NO3-2 M KCl提取NH

5、4+易水解氮生物有效氮土壤土壤氮氮有效氮有效氮全全 氮氮植物样品消化方法（第十三章）植物样品消化方法（第十三章）H H2 2SOSO4 4-H-H2 2O O2 2H H2 2SOSO4 4-HClO-HClO4 4H H2 2SOSO4 4- -催化剂催化剂硫酸碳化，过氧化氢（或者高氯酸）硫酸碳化，过氧化氢（或者高氯酸）氧化植物样品中氧化植物样品中C C，从而使，从而使N N以以(NH(NH4 4) )2 2SOSO4 4的形态存在的形态存在植植( (动动) )物氮物氮有效氮有效氮全全 氮氮溶液澄清后，定容、然后过滤。溶液澄清后，定容、然后过滤。先低温（过夜），防止高温先低温（过夜），防止高

6、温（360410360410度）时度）时CO2CO2大量排放大量排放致喷冒损失致喷冒损失如用如用H H2 2O O2 2，消化至溶液呈均匀棕，消化至溶液呈均匀棕黑色时取出冷却至不烫手时加黑色时取出冷却至不烫手时加如用如用HClOHClO4 4，可与硫酸同时加，可与硫酸同时加，但比例一定要小于但比例一定要小于3:13:1氨态氮氨态氮硝态氮硝态氮土壤土壤氮氮氨基酸氮氨基酸氮蛋白质氮蛋白质氮无机氮无机氮有机氮有机氮酰胺态氮（尿素）酰胺态氮（尿素）亚硝态氮亚硝态氮杂环、缩氨类氮杂环、缩氨类氮简单，可采用分析简单，可采用分析NHNH4 4+ +、NONO3 3- -的的技术方法直接测定技术方法直接测定复

7、杂，无法直接测定复杂，无法直接测定多采用转化为氨态或者硝态测定多采用转化为氨态或者硝态测定蒸馏滴定法蒸馏滴定法碱解扩散法碱解扩散法靛酚蓝比色法靛酚蓝比色法纳氏比色法纳氏比色法氨气敏电极法氨气敏电极法甲醛法甲醛法酚二磺酸比色法酚二磺酸比色法还原为氨蒸馏（戴氏合金）或比色法还原为氨蒸馏（戴氏合金）或比色法双波长比色法双波长比色法离子选择电极法离子选择电极法离子色谱法离子色谱法还原为亚硝态盐酸萘乙胺比色法还原为亚硝态盐酸萘乙胺比色法杜马斯（杜马斯（DumasDumas）干烧法）干烧法 Dumas于1831年创立的，又称为杜氏法。把样品放在燃烧管中，以600以上的高温与氧化铜一起燃烧，燃烧时通以净化的

8、O2气，燃烧过程中产生的氧化亚氮（主要是N2O）气体通过灼热的铜还原为氮气（N2），使N2、H2O和CO2的混合气体通过浓的氢氧化钾溶液/碱石灰和硅胶，以除去H20和CO2，然后在氮素计中测定氮气体积。费时、操作复杂、需要专门的仪器，测定的氮素较为完全全全 氮氮湿烧法- Kjedahl定氮法丹麦人开道尔（丹麦人开道尔（J.KjeldahlJ.Kjeldahl）于）于18831883年创立。年创立。主要原理：主要原理：在在360-410360-410之间用浓硫酸消煮，借催化剂和增温之间用浓硫酸消煮，借催化剂和增温剂等加速有机质的分解，并使剂等加速有机质的分解，并使有机氮有机氮转化为氨进入溶液，转

9、化为氨进入溶液，最后用标准酸滴定蒸馏出的氨。最后用标准酸滴定蒸馏出的氨。设备简单易得、结果可靠，为一般实验室采用，便于改进缩短消化时间。低于360 消化不完全，高于消化不完全，高于410 410 氮易损失氮易损失。全全 氮氮如何缩短消化时间？ 适当提高消化温度。适当提高消化温度。使用增温剂如硫酸钾、硫酸钠等。加入硫酸钾/硫酸钠量大可以缩短消化时间，但当盐分浓度大于0.8g/L时，内溶物结块，难于操作。 使用合适的催化剂。使用合适的催化剂。Hg、HgO、CuSO4、FeSO4、Se、TiO2 等，Hg和Se效果很好，但是HgO与铵可生成汞铵复合物，难蒸馏出来，用硫代硫酸钠沉淀Hg产生的HgS难清

10、洗，Hg和Se有毒。国际标准（1995）K2SO4:CuSO4:TiO2=100:3:3我国常用 K2SO4:CuSO4:Se=100:10:1CuSO4不仅起到催化作用，在消化完成（有机质分解、碳被氧化）后可呈现蓝绿色，起到指示作用。但此时仍有部分有机杂环氮未完全转化，需要“后煮”。 用氧化剂提高消化效率。用氧化剂提高消化效率。硫酸、高氯酸、双氧水等硫酸、高氯酸、双氧水等, ,可以同时测定多种元素，且利于可以同时测定多种元素，且利于自动化装置，但是反应过于激烈，易造成氮素损失致使结果自动化装置，但是反应过于激烈，易造成氮素损失致使结果不稳定。不稳定。注意 严格来讲，开氏法测定的土壤全氮并不完

11、全包括土壤全氮并不完全包括NONO3 3- -NN和和NONO2 2- -NN由于它们含量一般都比较低，对土壤全氮量的测定影响也小，因此，通常可忽略。 但是，如果土壤中含有显著数量的NO3-N和NO2-N，则须用改进的开氏法。比如先加入KMnO4使NO2-变NO3-后加入还原Fe粉或Zn粉或者戴氏合金，还原为NH4+在消化（具体步骤见P47）。干烧法和凯氏法测定的氮是不是对作物完全有效呢？干烧法和凯氏法测定的氮是不是对作物完全有效呢？什么形态的氮素对作物有效？什么形态的氮素对作物有效？ 土壤有效氮包括无机的矿物态氮和部分有机质中易分解的、比较简单的有机态氮，它是铵态氮、硝态氮、氨基酸、酰胺和铵

12、态氮、硝态氮、氨基酸、酰胺和易水解的蛋白质氮的总和易水解的蛋白质氮的总和，通常也称水解氮，它能反映土壤近能反映土壤近期内氮素供应情况。期内氮素供应情况。 全氮是氮储量，多用于衡量土壤基础肥力，有效氮是植物可以吸收利用的氮素，与作物生长关系密切，在推荐施肥中意义更大。因此评价土壤氮素营养，需要测定全氮和有效氮。有效氮有效氮生物培养法 在一定条件下培养土壤一段时间，测定培养前后无机氮量差值，即为有效氮。主要测定土壤氮素的供应潜力，方法繁复，需要较长的培养时间，但结果与作物生长相关性较高。 好气（氧）培养法，适宜的温度、水分、通气条件下培养 厌气（氧）培养法，淹水培养，简单，再现性好，适合例行分析。

13、有效氮有效氮化学提取法 采用化学试剂，水或者盐溶液，比如KCl，CaSO4等提取土壤中某一部分有效氮，或者水解后测定。 方法简便快速，但土壤氮素释放主要受微生物活动控制，提取剂选择缺乏理论依据，测出结果与作物生长相关性较差，仅用于模拟估计土壤氮素供应。 生物培养法，测土壤培养前后的无机氮差值时采用的依然是化学提取的手段。比如用KCl提取NH4+，用CaSO4提取NO3- 植物样品没有有效与总量的区分，只用消化后测全氮。有效氮有效氮 水解法 水解氮常被认为是土壤易矿化氮，因而可以采用加酸水解和碱解扩散法测定。酸解对于有机质含量高的土壤结果理想，对于石灰性土壤不合适且操作手续繁长、费时，不适合于例

14、行分析。 碱解扩散法，即应用扩散皿，以1 molL-1或1.2 molL-1 NaOH进行碱解扩散，可加还原剂还原硝态氮，碱解、扩散和吸收各反应同时进行，操作较为简便，分析速度快，结果的再现性也较好。不仅能评价土壤氮素供应强度，也可测定土壤氮素供应容量和释放速率。有效氮有效氮氨态氮（氨态氮（NHNH4 4+ +）测定方法测定方法蒸馏滴定法蒸馏滴定法 消化液消化液加入过量的10M NaOH，在加热的条件下使NH3蒸馏出来，用过量的硼酸吸收后，用混合指示剂（甲基红和溴甲酚绿）用标准酸(c)滴定，记录标准酸的用量(V)。含氮量=C（V-V0）*14/m 硼酸用量按照每ml 10g/L的硼酸可吸收氮0

15、.46mg，根据样品大致含氮量估算。方法特点： 适用于土壤消化后直接测定，也可适用于水样分析。 测定浓度2mg，含量高需要减少样品量 甲基红和溴甲酚绿：0.66g/L和0.99g/L更灵敏。 滴定管和三角瓶及蒸馏设备滴定管和三角瓶及蒸馏设备 蒸馏滴定法蒸馏滴定法123蒸馏设备蒸馏设备半自动凯氏定氮仪半自动凯氏定氮仪蒸馏设备蒸馏设备Tecator KJELTEK2400 SYSTEMTecator KJELTEK2400 SYSTEM自动凯氏定氮仪自动凯氏定氮仪美国FOSS公司制造生产，可快速、准确、安全地测定碳水化合物、食品以及环保产物等各种有机物料中含氮量和蛋白质的分析，检出下限0.1mg氮

16、，具有99.5以上的回收率。可以自动分析各种物质当中的氮含量，可以选择手动编辑分析程序、或者采用内置分析程序自动分析样品。整个过程全自动，自动滴定自动滴定到终点，自动自动清洗清洗，可以连接打印机，直接打印结果。带有可编程的消化系统，可以编辑消化时间、温度，可同时消化6个样品。1)方法原理在扩散皿中，用1M NaOH水解土壤（4040，24h24h),使易水解氮碱解转化为NH3, 扩散后被硼酸吸收，然后用标准酸滴定，以此计算碱解氮的含量。2)方法要点密封，碱性阿拉伯胶防污染 碱性阿拉伯胶进入内室 NaOH进入内室 样品进入内室碱解扩散法测定铵态氮碱解扩散法测定铵态氮靛酚蓝比色法靛酚蓝比色法1）方

17、法原理 铵态氮在强碱性下，在亚硝基铁氰化钠介质中与次铵态氮在强碱性下，在亚硝基铁氰化钠介质中与次氯酸盐和苯酚类物质（水杨酸）中，生成水溶性染料氯酸盐和苯酚类物质（水杨酸）中，生成水溶性染料靛酚蓝（一种颜色稳定性极高的真溶液）。比色波长靛酚蓝（一种颜色稳定性极高的真溶液）。比色波长=625=625（697697）nmnm。不允许含有悬浮颗粒，主要用于水样分。不允许含有悬浮颗粒，主要用于水样分析。析。2）方法要点硝基铁氰化钠有剧毒。高pH时产生沉淀的离子是干扰，酒石酸钾钠EDTA掩蔽加入每种试剂应立即混匀。测定范围0.01-5mg/L纳氏比色法纳氏比色法(Nessler(Nessler，奈氏试剂，

18、奈氏试剂) )1.1.方法原理方法原理待测液中的铵在待测液中的铵在pH=11pH=11的碱性条件下，与奈氏试剂作用生成桔黄的碱性条件下，与奈氏试剂作用生成桔黄色配合物，其反应式如下：色配合物，其反应式如下：KOH+ 2KI + HgIKOH+ 2KI + HgI2 2 K K2 2HgIHgI4 4( (奈氏试剂奈氏试剂) )K K2 2HgIHgI4 4+3KOH+NH+3KOH+NH3 3HgHg2 2O(NHO(NH4 4I) (I) (桔黄色桔黄色)+7KI+ H)+7KI+ H2 2O OpH=4pH=4时不显色，从时不显色，从pH=411pH=411之间随之间随pHpH升高而颜色加

19、深，升高而颜色加深，pH=11pH=11时时显色完全，测定显色完全，测定NHNH4 4-N-N的浓度为的浓度为0.23mgL0.23mgL-1-1。2.2.方法要点方法要点铵氮浓度高时会混浊（沉淀）。不允许含有悬浮颗粒。高pH时产生沉淀的Fe（III）离子是干扰。（酒石酸钾钠掩蔽）加入每种试剂应立即混匀。甲醛法甲醛法1)方法原理在中性溶液中， NH4+和中性甲醛反应生成六亚甲基四胺N4（CH）6和等摩尔的H+H+，然后用标准碱滴定，从而求出铵氮的含量2)方法要点适用大量铵氮的分析，特别是肥料中的氨态氮。现代仪器分析方法现代仪器分析方法CS-800CS-800碳硫分析仪碳硫分析仪结合了最新的燃烧

20、技术,它可以同时快速地分析钢、铸铁、铜、合金、矿石、水泥、陶瓷、碳化合物、矿物、沙子、玻璃等固体材料中的碳和硫。 可提供了四个独立的红外池.红外红外池响应曲线的灵敏度和红外吸收池的长度,都可根据用户分析要求来选择满足碳硫不同量程的精度要求.ONH-2000氧氮氢测定仪氧氮氢测定仪快速、准确测量氧、氢、氮三种元素的含量。提供两个独立的红外检红外检测池测池分别检测高氧和低氧。氮和氢通过双重范围的热导检测热导检测池测量池测量。分析过程中可自动实现从低范围到高范围的切换，试样放入石墨坩埚在高功率脉冲炉中可加热到3000以上。在制造时，将仪器的测试范围调到最佳值，无需任何附加费用。调节检测器的灵敏度可以

21、得到从ppm到几个百分比的最佳精确度。流动注射分析（简称FIA）FIA3100流动注射分析仪快速、自动化、准确度高快速、自动化、准确度高的测试方法，但是仪器价的测试方法，但是仪器价格昂贵格昂贵单通道，单通道，4040万万RMBRMB测全氮流动注射分析系统之一：甲基红-溴酚蓝-溴酚紫比色法 采样阀采取一定体积的待测液到载流中去，然后与3.5mol/L NaOH汇合，反应生成NH3气体，所产生的氨气透过气体扩散器的聚四氟乙烯膜进入另一管道中与显色液发生反应，再进入721分光光度计比色比色。其检流结果由计算机画峰显示，峰高值以标准曲线的的峰值为参比得出相应的浓度，打印机输出。采样阀蠕动泵流通池废液气

22、体扩散块光源光源光电传感器光电传感器光电电压光电电压检测器检测器6890/5973GC/MS气相色谱/质谱联用仪Alliance2690-ZMD4000液相色谱-质谱联用仪Dionex ICS-900 离子色谱仪 Waters 600 高效液相色谱仪高效液相色谱仪配备有：1、 Waters 600 低压混合四元梯度泵，流量：0.0120.0ml/min，最大压力：6000psi2、 ELSD 2000 蒸发光散射检测器3、 Waters 996 二极管陈列检测器波长范围：190800nm基线噪声：1.510-5AU硝态氮（硝态氮（NONO3 3- -）酚二磺酸比色法酚二磺酸比色法方法原理：浸提

23、液中NO3在蒸干无水条件下与酚二磺酸反应C C6 6H H3 3OHOH（HSOHSO3 3）2 2+ HNO+ HNO3 3 C C6 6H H2 2OHOH（SOSO3 3）2 2NONO2 2 + H + H2 2O O 2,4- 2,4-二磺酸苯酚二磺酸苯酚 2,4-2,4-二磺酸二磺酸-6-6-酚硝基苯酚（黄色）酚硝基苯酚（黄色） 反应条件：无水、碱性。比色波长420nm。0.1-2mg/L方法要点方法要点只适用于水浸提样品。必须蒸干，蒸干只能在碱性条件下进行。蒸的过程中加入CaCO3，防止NO3分解损失。关于酚二磺酸试剂（25g酚与150ml浓硫酸溶解后加入发烟硫酸75ml，沸水中

24、加热2小时，如无发烟硫酸，可以25g酚加225ml硫酸，沸水加入6h）。主要干扰物:有机质（溶于碱有颜色）、NO2-、Cl-双波长比色法双波长比色法方法原理方法原理 利用硝酸盐在220nm波长具有紫外吸收和在275nm波长不具吸收的性质进行测定,DOM在220nm和275nm均有吸收，于275nm波长测出有机物的吸收值在测定结果中校正。0.08-4 mg/L方法特点方法特点 方法简便快速，但对于含有机物、表面活性剂、亚硝酸盐、Fe3+、Cr6+、HCO3-、CO32-的样品需要预处理。 计算复杂，DOM在220nm的吸光度为275nm处的2倍，A A220220-2A-2A275275为硝酸盐

25、的吸光度。 方法用于低有机物含量样品双波长比色法双波长比色法还原蒸馏法用MgO蒸馏法测铵态氮;用“MgO+戴氏”合金蒸馏法测NH4+,NO3-,NO2-总量;用氨基磺酚破坏亚硝态氮后,用“MgO+戴氏合金”蒸馏法测NH4+,NO3-, 总量; NO3-,NO2-总量= - NO2-总量= - NO3-,总量=- Zn-FeSO4或者 戴氏合金：(50%Al,45%Cu,5%Zn)镉柱还原镉柱还原盐酸萘乙胺比色法盐酸萘乙胺比色法硝酸根经镉柱还原成亚硝酸根后硝酸根经镉柱还原成亚硝酸根后, ,酸性溶液中酸性溶液中亚硝酸亚硝酸与与对氨基苯磺酸对氨基苯磺酸起起重氮化反应重氮化反应生成重氮化合物，再与生成

26、重氮化合物，再与盐盐酸萘乙胺酸萘乙胺偶联成紫红色重氮染料，可比色测定，偶联成紫红色重氮染料，可比色测定， =538nm,=538nm,范围范围1010g.g.NO2- + 2H+ + H2N- -SO3HN = +N- -SO3H盐酸萘乙胺O3H-N=N-NH2CH2CH2NH2+H+紫红色土壤全氮测定土壤全氮测定半微量开氏法半微量开氏法方法原理方法原理 样品在加速剂和增温剂的参与下，用浓硫酸消煮时，各种含氮有机化合物，经过复杂的高温分解反应，转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。碱化后蒸馏出来的氨用硼酸吸收，以标准酸溶液滴定，求出土壤全氮含量（不包括全部硝态氮）。包括硝态和亚硝态氮的全氮测定，在样品消

27、煮前，需先用高锰酸钾将样品中的亚硝态氮氧化为硝态氮后，再用还原铁粉使全部硝态氮还原，转化成铵态氮。主要仪器主要仪器 消煮炉；半微量定氮蒸馏装置；半微量滴定管试剂（略）试剂（略）步骤步骤 称100100目目土壤样品1.000g1.000g左右于消化管或者凯氏瓶(按按照一般土壤含氮量在照一般土壤含氮量在15 g/kg15 g/kg，样品含有，样品含有15 mg N15 mg N) 加少量水润湿，加混合催化剂1.85-2g，加入浓硫酸5ml 小火10-15min至瓶内反应温和，大火（温度以硫酸蒸汽在瓶颈上1/3处回流为宜），待灰白稍带绿色时，加热1h，冷却待蒸馏。将消化液全部洗入蒸馏器，总用水量30

28、-35ml，用水越少越好用水越少越好。150ml三角瓶加入5ml 20g/L硼酸（必须过量必须过量）和混合指示剂，放在冷凝管末端。瓶口据冷凝管3-4cm。 蒸馏器中加10M NaOH 20ml（用于促使氨的释放，必须过量必须过量） 通入蒸汽蒸馏，待馏出体积50ml-70ml左右（经验参数经验参数）时蒸馏完成。 取下三角瓶，用0.01M HCl或者1/2H2SO4（0.005M 0.005M 硫酸硫酸）滴定至颜色有蓝绿色变为紫红色，记录用量。 全氮=（V-VV-V0 0）*C C*14*10-3/m *103(g/kg) 注：人身安全注：人身安全，浓硫酸和高浓度NaOH 仪器安全仪器安全 硼酸用

29、量，按照1 ml 10 mg/L 的硼酸可吸收0.46 mg N计算。5 ml 20 mg/L的硼酸可吸收520.46=4.6 mg。因而硼酸的量可以根据消化时的样品量及样品中氮含量适当多加。 土壤土壤碱解氮碱解氮测定测定碱解扩散法碱解扩散法方法原理方法原理 在扩散皿中，1M NaOH水解土壤，使易水解氮（潜在有效氮）碱解转化为NH3， NH3扩散为硼酸吸收，用标准酸滴定。主要仪器主要仪器 扩散皿、隔水恒温培养箱、半微量滴定管试剂（略）试剂（略）步骤步骤 称20目土壤样品2.000g扩散皿外室，旋转扩散皿使土样均匀平铺 加2ml含混合指示剂的硼酸于扩散皿内室 外室边缘涂碱性胶液 盖上毛玻璃，旋

30、转数次使皿与玻璃完全粘合。 旋开一边，使外室露出一小缝，加入1M NaOH 10ml后迅速盖严。 橡皮筋固定后置于40培养箱，24小时后取出 标准酸滴定内室硼酸溶液，记录体积V。空白试验，V0碱解氮=c*（V-V0）*14/m*103 （mg/kg)土壤土壤硝态氮硝态氮测定测定硫酸钙提取硫酸钙提取- -酚二磺酸比色法酚二磺酸比色法方法原理方法原理 同前主要仪器主要仪器 蒸发皿、水浴锅、分光光度计试剂（略）试剂（略）步骤步骤 称新鲜土壤样品5.000g5.000g左右于500ml三角瓶，加入CaSO4 0.5g，加入250ml250ml水水，振荡10min，放置5min，过滤，滤液至另一个三角瓶

31、。 吸取滤液25-50ml25-50ml（含硝态氮20-150ug）于瓷蒸发皿，加入CaCO3 0.05g，水浴蒸干水浴蒸干，干燥后不应继续加热。 冷却，迅速加入酚二磺酸2ml，旋转皿，使试剂接触到所有蒸干物，静置10min充分反应，加水20ml，玻棒搅拌至所有蒸干物溶解。 冷却，加1：1氨水至溶液显黄色，再多加2ml保证过量。 全部移入100ml100ml容量瓶，加水定容后。 420nm 比色。同法作标线。硝态氮=c*V*ts/m（mg/kg)注1. 硝态氮易溶于水，且在土壤剖面移动频繁，故而注意采样深度，风干或烘干易引起变化，故而用新鲜土样新鲜土样。2. 比色法要求浸提液清澈，但中性或者碱

32、性滤液不易澄清，且带有机质颜色，故而需要加絮凝剂，CaO、Ca（OH）2、CaCO3、MgCO3、KAl(SO4)2、CuSO4、CaSO4等均可，CuSO4虽由防止生物转化作用，但需要去除Cu，CaSO4较为方便。3. 有机质颜色较深时可加活性炭活性炭去除。4. 亚硝酸根和Cl是主要干扰离子，亚硝酸根可用尿素和氨基磺尿素和氨基磺酸酸去除，ClCl用用AgAg2 2SOSO4 4去除。5. 加入碳酸钙是为了防止酸性和中性条件下引起硝酸根分解造成的硝态氮损失。6. 必须无水。7. 碱化用氨水，避免用NaOH或者KOH生成Ag2O沉淀影响比色。思考题1.土壤氮素形态有那些？相互关系如何？测定时应注

33、意什么问题？2.土壤有效N有那些形态，为什么测定土壤有效N特别困难？3.酚二磺酸比色法测定硝态氮时应注意什么问题？4.化学方法提取土壤硝态氮、氨态氮常用的浸提剂有那些？5.简述半微量凯氏法测定土壤全氮的原理、步骤及注意事项？常用催化剂有那些？常用催化剂的组成及其作用？6.简述碱解扩散法测定土壤有效N的原理及步骤？7.测定铵态氮的方法有哪些？测定硝态氮的方法有哪些？第二节 土壤硫的测定 硫是中量元素，与其它两个中量元素钙、镁不同的是它是非金属元素，其有效态以阴离子形式存在于土壤中并被植物吸收。易溶硫酸盐（SO42）通常是植物吸收的形态。 硫(S)在地壳中含量大约为0.6gkg-1。我国主要土类全硫(S)含量在0.110.49gkg-1。除盐土和自然植被生长较好的地区含硫较高外，在耕地中以黑在耕地中以黑土含量最高土含量最高，水稻土和北方旱地（潮土、棕壤、褐土、楼土、绵土、栗钙