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文档简介

1、免疫荧光技术的原理、分类及应用免疫荧光技术基本原理 免疫荧光技术是将抗原抗体反应的特异性和敏感性与显微示踪的精确性相结合的一项技术 以荧光素作为标记物，与已知的抗体或抗原结合、但不影响其免疫学特性。然后将荧光素标记的抗体作为标准试剂，用于检测和鉴定未知的抗原 在荧光显微镜下，可以直接观察呈现特异性荧光的抗原抗体复合物及其存在的部位。 在实际工作中，由于荧光素标记抗体检查抗原的方法较为常用，所以一般通称为荧光抗体技术免疫荧光技术的主要优缺点 优点：特异性强、敏感性高、速度快 缺点：存在非特异性染色，结果判定的客观性不足，技术程序也较复杂根据实验方法分类 直接法 间接法 补体法 其他直接法 将荧光

2、标记的特异性抗体（抗原）直接加在抗原（抗体）上，经一定的温度和时间染色，水洗-干燥-封片-镜检 操作简便、特异性高、非特异性染色少 敏感性低抗原标记抗体荧光间接法 先用已知未标记的特异抗体（一抗）与抗原反应，再用标记的抗体（二抗）与其反应，形成抗原-抗体-抗体复合物，水洗-干燥-封镜-镜检未知抗原未知抗原未标记未标记抗体抗体标记抗标记抗体体荧光荧光补体法 利用补体反应，通过形成抗原-抗体-补体复合物发射荧光补体补体标记抗标记抗补体抗补体抗体体其他免疫荧光技术 时间分辨荧光免疫分析 荧光偏振免疫分析技术时间分辨荧光免疫测定 利用具有双功能基团结构的螯合剂，将镧系元素标记到抗体（或抗原）上，经免疫反应形成复合物，由于镧系元素能发出荧光，故分离除去未结合的成分后，利用时间分辨荧光仪即可测定荧光强度，从而推测待测物含量。时间分辨荧光测定的特点 采用脉冲光源（每秒闪烁1000次以上的疝灯），照射样品后即短暂的熄灭 以电子设备控制延缓时间，待非特异本底荧光衰退后，再测镧系荧光。 镧系元素具有较长的荧光寿命，延缓测量时间，能有效地消除非特异本底荧光(10ns)的干扰 镧系螯合物的的激发光与荧光发射峰之间的波长差异，有利于排除非特异性荧光干扰，提高检测特异性。荧光偏振免疫分析技术 利用荧光素经单一波长的偏振光照射后吸收光能，释放出相

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