第一章绪论蛋白质的结构和功能ppt课件

1、目目 录录 延安大学医学院延安大学医学院 生物化学教研室生物化学教研室目目 录录 生物化学w生命的化学，运用化学的实际、技术及生命的化学，运用化学的实际、技术及物理学、免疫学等原理和方法研讨生物物理学、免疫学等原理和方法研讨生物体植物、动物、微生物、人体等的体植物、动物、微生物、人体等的化学组成和生命过程中化学变化规律的化学组成和生命过程中化学变化规律的一门根底生命科学。一门根底生命科学。目目 录录w分子生物学分子生物学 是从生物化学、生物物理学、是从生物化学、生物物理学、遗传学、微生物学等多种学科经过相互杂遗传学、微生物学等多种学科经过相互杂交、相互浸透而构成的，主要研讨核酸和交、相互浸透而

2、构成的，主要研讨核酸和蛋白质等生物大分子的构造及其在遗传信蛋白质等生物大分子的构造及其在遗传信息传送和细胞信息转导过程中的作用。息传送和细胞信息转导过程中的作用。目目 录录生物化学开展史：生物化学开展史：w表达生物化学阶段表达生物化学阶段20世纪世纪20年代年代以前以前w 以分析和研讨组成生物体的成分及以分析和研讨组成生物体的成分及生物体的分泌物和排泄物为主。生物体的分泌物和排泄物为主。w动态生物化学阶段动态生物化学阶段20世纪世纪20年代年代至至50年代年代w 主要研讨体内各种物质的合成和分主要研讨体内各种物质的合成和分解途径及动态平衡。解途径及动态平衡。w机能生物化学阶段近机能生物化学阶段

3、近50多年多年w 讨论生物大分子的构造和机能的关讨论生物大分子的构造和机能的关系。系。目目 录录第第 一一 篇篇 生物大分子的构造与功能生物大分子的构造与功能 构件分子 生物大分子 细胞器 细胞 组织器官 生物体 目目 录录蛋白质的构造与功能蛋白质的构造与功能第第 一一 章章Structure and Function of Protein目目 录录一、什么是蛋白质一、什么是蛋白质? ?蛋白质蛋白质(protein)(protein)是由许多氨基酸是由许多氨基酸(amino acids)(amino acids)经过肽键经过肽键(peptide (peptide bond)bond)相连构成的

4、高分子含氮化合物。相连构成的高分子含氮化合物。目目 录录二、蛋白质的生物学重要性二、蛋白质的生物学重要性1. 1. 蛋白质是生物体重要组成成分蛋白质是生物体重要组成成分分布广：一切器官、组织都含有蛋白质；分布广：一切器官、组织都含有蛋白质；细胞的各个部分都含有蛋白质。细胞的各个部分都含有蛋白质。含量高：是细胞内最丰富的有机分子，含量高：是细胞内最丰富的有机分子，占人体干重的占人体干重的4545，某些组织含量更高，某些组织含量更高，例如脾、肺及横纹肌等高达例如脾、肺及横纹肌等高达8080。目目 录录1 1作为生物催化剂酶作为生物催化剂酶2 2代谢调理作用代谢调理作用3 3免疫维护作用免疫维护作用

5、4 4物质的转运和存储物质的转运和存储5 5运动与支持作用运动与支持作用6 6参与细胞间信息传送参与细胞间信息传送2. 2. 蛋白质重要的生物学功能蛋白质重要的生物学功能3. 3. 氧化供能氧化供能目目 录录蛋蛋 白白 质质 的的 分分 子子 组组 成成The Molecular Component of The Molecular Component of ProteinProtein第第 一一 节节目目 录录 组成蛋白质的元素组成蛋白质的元素 主要有主要有C C、H H、O O、N N和和S S。 有些蛋白质含有少量磷或金属元素有些蛋白质含有少量磷或金属元素铁、铜、锌、锰、钴、钼，个别蛋白

6、质铁、铜、锌、锰、钴、钼，个别蛋白质还含有碘还含有碘 。目目 录录 各种蛋白质的含氮量很接近，平均为各种蛋白质的含氮量很接近，平均为16 由于体内的含氮物质以蛋白质为主，因由于体内的含氮物质以蛋白质为主，因此，只需测定生物样品中的含氮量，就可以此，只需测定生物样品中的含氮量，就可以根据以下公式推算出蛋白质的大致含量：根据以下公式推算出蛋白质的大致含量：100克样品中蛋白质的含量克样品中蛋白质的含量 ( g % )= 每克样品含氮克数每克样品含氮克数 6.251001/16% 蛋白质元素组成的特点蛋白质元素组成的特点目目 录录一、氨基酸一、氨基酸 组成蛋白质的根本单位组成蛋白质的根本单位存在自然

7、界中的氨基酸有存在自然界中的氨基酸有300300余种，余种，但组成人体蛋白质的氨基酸仅有但组成人体蛋白质的氨基酸仅有2020种，种，且均属且均属 L-L-氨基酸甘氨酸除外。氨基酸甘氨酸除外。目目 录录H甘氨酸甘氨酸CH3丙氨酸丙氨酸L-L-氨基酸的通式氨基酸的通式RC+NH3COO-H目目 录录极性中性氨基酸极性中性氨基酸非极性疏水性氨基酸非极性疏水性氨基酸酸性氨基酸酸性氨基酸碱性氨基酸碱性氨基酸一氨基酸的分类一氨基酸的分类目目 录录甘氨酸甘氨酸 glycine Gly G 5.97丙氨酸丙氨酸 alanine Ala A 6.00缬氨酸缬氨酸 valine Val V 5.96亮氨酸亮氨酸

8、leucine Leu L 5.98leucine Leu L 5.98 异亮氨酸异亮氨酸 isoleucine Ile I 6.02 苯丙氨酸苯丙氨酸 phenylalanine Phe F 5.48脯氨酸脯氨酸 proline Pro P 6.30非极性疏水性氨基酸非极性疏水性氨基酸目目 录录目目 录录色氨酸色氨酸 tryptophan Try W 5.89丝氨酸丝氨酸 serine Ser S 5.68酪氨酸酪氨酸 tyrosine Tyr Y 5.66 半胱氨酸半胱氨酸 cysteine Cys C 5.07 蛋氨酸蛋氨酸 methionine Met M 5.74天冬酰胺天冬酰胺 a

9、sparagine Asn N 5.41 谷氨酰胺谷氨酰胺 glutamine Gln Q 5.65 苏氨酸苏氨酸 threonine Thr T 5.602. 2. 极性中性氨基酸极性中性氨基酸目目 录录目目 录录天冬氨酸天冬氨酸 aspartic acid Asp D 2.97谷氨酸谷氨酸 glutamic acid Glu E 3.22赖氨酸赖氨酸 lysine Lys K 9.74精氨酸精氨酸 arginine Arg R 10.76组氨酸组氨酸 histidine His H 7.593. 3. 酸性氨基酸酸性氨基酸4. 4. 碱性氨基酸碱性氨基酸目目 录录目目 录录几种特殊氨基酸几

10、种特殊氨基酸 脯氨酸脯氨酸亚氨基酸亚氨基酸CH2CHCOO-NH2+CH2CH2CH2CHCOO-NH2+CH2CH2目目 录录-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3 半胱氨酸半胱氨酸 +胱氨酸胱氨酸二硫键二硫键-HH-OOC-CH-CH2-SH+NH3-OOC-CH-CH2-SH+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH3目目 录录二氨基酸的理化性质二氨基酸的理化性质1. 1. 两性解离及等电点两性解离及等电点氨基酸是两性电解质，其解离程度氨基酸是两性电解质，

11、其解离程度和带电性质取决于其所处溶液的酸碱度。和带电性质取决于其所处溶液的酸碱度。等电点等电点(isoelectric point, pI) (isoelectric point, pI) 在某一在某一pHpH的溶液中，氨基酸解离成阳的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，成离子和阴离子的趋势及程度相等，成为兼性离子，呈电中性。此时溶液的为兼性离子，呈电中性。此时溶液的pHpH值称为该氨基酸的等电点。值称为该氨基酸的等电点。目目 录录pH=pI+OH-pHpI+H+OH-+H+pHpI氨基酸兼性离子氨基酸兼性离子 阳离子阳离子阴离子阴离子CHNH2COOHR CHNH2COOHR

12、CHNH3+COO-R CHNH3+COO-RCHNH2COO-R CHNH2COO-RCH COOHRNH3+CH COOHRNH3+目目 录录2. 2. 紫外吸收紫外吸收 色氨酸、酪氨酸色氨酸、酪氨酸的最大吸收峰分别的最大吸收峰分别280nm280nm和和275nm 275nm 附近。附近。大多数蛋白质含大多数蛋白质含有这两种氨基酸残基，有这两种氨基酸残基，所以测定蛋白质溶液所以测定蛋白质溶液280nm280nm的光吸收值是的光吸收值是分析溶液中蛋白质含分析溶液中蛋白质含量的快速简便的方法。量的快速简便的方法。目目 录录3. 3. 茚三酮反响茚三酮反响 氨基酸与茚三酮水合物共热，可生氨基酸

13、与茚三酮水合物共热，可生成蓝紫色化合物，其最大吸收峰在成蓝紫色化合物，其最大吸收峰在570nm570nm处。由于此吸收峰值与氨基酸的处。由于此吸收峰值与氨基酸的含量存在正比关系，因此可作为氨基酸含量存在正比关系，因此可作为氨基酸定量分析方法。定量分析方法。目目 录录二、肽二、肽 肽键肽键(peptide bond)是由一个氨基酸的是由一个氨基酸的-羧羧基与另一个氨基酸的基与另一个氨基酸的-氨基脱水缩合而构氨基脱水缩合而构成的化学键。成的化学键。一肽一肽(peptide)(peptide)目目 录录NH2-CH-CHOOH甘甘氨氨酸酸NH2-CH-CHOOH甘甘氨氨酸酸NH-CH-CHOHO O

14、H甘甘氨氨酸酸+-HOH甘氨酰甘氨酸甘氨酰甘氨酸肽键NH2-CH-C-N-CH-COOHHHHONH2-CH-C-N-CH-COOHHHHO目目 录录 肽是由氨基酸经过肽键缩合而构成的化合肽是由氨基酸经过肽键缩合而构成的化合物。物。 两分子氨基酸缩合构成二肽，三分子氨基两分子氨基酸缩合构成二肽，三分子氨基酸缩合那么构成三肽酸缩合那么构成三肽 肽链中的氨基酸分子由于脱水缩合而基团不肽链中的氨基酸分子由于脱水缩合而基团不全，被称为氨基酸残基全，被称为氨基酸残基(residue)(residue)。 由十个以内氨基酸相连而成的肽称为寡肽由十个以内氨基酸相连而成的肽称为寡肽(oligopeptide)

15、(oligopeptide)，由更多的氨基酸相连构成的，由更多的氨基酸相连构成的肽称多肽肽称多肽(polypeptide)(polypeptide)。目目 录录N N 末端：有自在氨基的一端末端：有自在氨基的一端C C 末端：有自在羧基的一端末端：有自在羧基的一端多肽链有两端多肽链有两端 多肽链多肽链(polypeptide chain)是指许多氨是指许多氨基酸之间以肽键衔接而成的一种构造。基酸之间以肽键衔接而成的一种构造。目目 录录N末端末端C末端末端牛核糖核酸酶牛核糖核酸酶目目 录录二二 几种生物活性肽几种生物活性肽 1. 谷胱甘肽谷胱甘肽(glutathione, GSH)目目 录录GS

16、H过氧过氧化物酶化物酶H2O2 2GSH 2H2O GSSG GSH GSH复原酶复原酶NADPH+H+ NADP+ 目目 录录体内许多激素属寡肽或多肽体内许多激素属寡肽或多肽 神经肽神经肽(neuropeptide)2. 2. 多肽类激素及神经肽多肽类激素及神经肽目目 录录蛋蛋 白白 质质 的的 分分 子子 结结 构构The Molecular Structure of The Molecular Structure of ProteinProtein 第第 二二 节节目目 录录蛋白质的分子构造包括蛋白质的分子构造包括 一级构造一级构造(primary structure)二级构造二级构造(

17、secondary structure)三级构造三级构造(tertiary structure)四级构造四级构造(quaternary structure)高高 级级 结结 构构目目 录录定义定义 指多肽链中氨基酸的陈列顺序。指多肽链中氨基酸的陈列顺序。一、蛋白质的一级构造一、蛋白质的一级构造主要的化学键主要的化学键 肽键，有些蛋白质还包括二硫键。肽键，有些蛋白质还包括二硫键。 一级构造是蛋白质空间构象和特异一级构造是蛋白质空间构象和特异生物学功能的根底。生物学功能的根底。目目 录录目目 录录二、蛋白质的二级构造二、蛋白质的二级构造 蛋白质分子中某一段肽链的部分蛋白质分子中某一段肽链的部分空间

18、构造，即该段肽链主链骨架原子空间构造，即该段肽链主链骨架原子的相对空间位置，并不涉及氨基酸残的相对空间位置，并不涉及氨基酸残基侧链的构象基侧链的构象 。 定义定义 主要的化学键：主要的化学键： 氢键氢键 目目 录录一肽单元一肽单元参与肽键的参与肽键的6 6个原子个原子C C1 1、C C、O O、N N、H H、C C2 2位于同一平面，位于同一平面，C C1 1和和C C2 2在平面上所处的位置在平面上所处的位置为反式为反式(trans)(trans)构型，此同构型，此同一平面上的一平面上的6 6个原子构成了个原子构成了所谓的肽单元所谓的肽单元 (peptide (peptide unit)

19、 unit) 。目目 录录 蛋白质二级构造的主要方式蛋白质二级构造的主要方式 - -螺旋螺旋 ( ( -helix ) -helix ) - -折叠折叠 ( ( -pleated sheet )-pleated sheet ) - -转角转角 ( ( -turn )-turn ) 无规卷曲无规卷曲 ( random coil ) ( random coil ) 二二 - -螺旋螺旋目目 录录目目 录录三三- -折叠折叠目目 录录四四- -转角和无规卷曲转角和无规卷曲 - -转角转角无规卷曲是指没有规律性的那部分肽无规卷曲是指没有规律性的那部分肽链构造。链构造。 目目 录录五模体五模体在许多蛋白

20、质分子中，可发现二个在许多蛋白质分子中，可发现二个或三个具有二级构造的肽段，在空间上或三个具有二级构造的肽段，在空间上相互接近，构成一个具有特殊功能的空相互接近，构成一个具有特殊功能的空间构象，被称为模体间构象，被称为模体(motif)(motif)。目目 录录钙结合蛋白中结钙结合蛋白中结合钙离子的模体合钙离子的模体 锌指构造锌指构造 目目 录录三、蛋白质的三级构造三、蛋白质的三级构造疏水键、离子键、氢键等。疏水键、离子键、氢键等。 主要的化学键主要的化学键整条肽链中全部氨基酸残基的相对空整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置间位置, , 即肽链中一切原子在三维空间的即肽链中一切原子在三维空间

21、的排布位置。排布位置。一一 定义定义 目目 录录目目 录录肌红蛋白肌红蛋白 (Mb) (Mb) N 端端 C端端目目 录录纤连蛋白分子的构造域纤连蛋白分子的构造域 二构造域二构造域大分子蛋白质的三级构造常可分割成一大分子蛋白质的三级构造常可分割成一个或数个球状或纤维状的区域，折叠得较个或数个球状或纤维状的区域，折叠得较为严密，各行使其功能，称为构造域为严密，各行使其功能，称为构造域(domain) (domain) 。目目 录录三分子伴侣三分子伴侣经过提供一个维护环境而加速蛋白质折经过提供一个维护环境而加速蛋白质折叠成天然构象或构成四级构造。叠成天然构象或构成四级构造。 可逆地与未折叠肽段的疏

22、水部分结合随后松开，可逆地与未折叠肽段的疏水部分结合随后松开，如此反复进展可防止错误的聚集发生，使肽链正如此反复进展可防止错误的聚集发生，使肽链正确折叠。确折叠。 与错误聚集的肽段结合，使之解聚后，再诱导其与错误聚集的肽段结合，使之解聚后，再诱导其正确折叠。正确折叠。 折叠中对二硫键的正确构成起重要。折叠中对二硫键的正确构成起重要。 (chaperon)目目 录录 亚基之间的结合力主要是离子键，其次亚基之间的结合力主要是离子键，其次是氢键和疏水作用。是氢键和疏水作用。四、蛋白质的四级构造四、蛋白质的四级构造蛋白质分子中各亚基的空间排布及亚蛋白质分子中各亚基的空间排布及亚基接触部位的规划和相互作

23、用，称为蛋白基接触部位的规划和相互作用，称为蛋白质的四级构造。质的四级构造。有些蛋白质分子含有二条或多条多有些蛋白质分子含有二条或多条多肽链，每一条多肽链都有完好的三级构肽链，每一条多肽链都有完好的三级构造，称为蛋白质的亚基造，称为蛋白质的亚基 (subunit)(subunit)。目目 录录血红蛋白的四级构造血红蛋白的四级构造 目目 录录 五、蛋白质的分类五、蛋白质的分类 根据折叠方式和复杂程度根据折叠方式和复杂程度 一级构造蛋白质一级构造蛋白质 二级构造蛋白质二级构造蛋白质 三级构造蛋白质三级构造蛋白质 四级构造蛋白质四级构造蛋白质 根据功能根据功能 活性蛋白质活性蛋白质 非活性蛋白质非活

24、性蛋白质 目目 录录根据组成成分根据组成成分 单纯蛋白质单纯蛋白质结合蛋白质结合蛋白质 = = 蛋白质部分蛋白质部分 + + 非蛋白质非蛋白质 部分部分 根据外观外形根据外观外形 纤维状蛋白质纤维状蛋白质球状蛋白质球状蛋白质目目 录录蛋白质构造与功能的关系蛋白质构造与功能的关系The Relation of Structure and Function of Protein第第 三三 节节目目 录录一一级构造是空间构象的根底一一级构造是空间构象的根底 一、蛋白质一级构造与功能的关系一、蛋白质一级构造与功能的关系 牛核糖核酸酶牛核糖核酸酶的一级构造的一级构造二二硫硫键键目目 录录 天然形状，天然

25、形状，有催化活性有催化活性 尿素、尿素、 -巯基乙醇巯基乙醇 去除尿素、去除尿素、-巯基乙醇巯基乙醇非折叠形状，无活性非折叠形状，无活性目目 录录二一级构造与功能的关系二一级构造与功能的关系例：镰刀形红细胞贫血例：镰刀形红细胞贫血N-val his leu thr pro glu glu C(146) HbS 肽链肽链HbA 肽肽 链链N-val his leu thr pro val glu C(146) 这种由蛋白质分子发生变异所导致的疾病，这种由蛋白质分子发生变异所导致的疾病，称为称为“分子病。分子病。目目 录录一肌红蛋白与血红蛋白的构造一肌红蛋白与血红蛋白的构造 二、蛋白质空间构造与功

26、能的关系二、蛋白质空间构造与功能的关系 目目 录录目目 录录HbHb与与MbMb一样能可逆地与一样能可逆地与O2O2结合，结合， HbHb与与O2O2结合后称为氧合结合后称为氧合HbHb。氧合。氧合HbHb占总占总HbHb的百分数称百分饱和度随的百分数称百分饱和度随O2O2浓度变浓度变化而改动。化而改动。二血红蛋白的构象变化与结合氧二血红蛋白的构象变化与结合氧 目目 录录肌红蛋白肌红蛋白(Mb)(Mb)和血红蛋白和血红蛋白(Hb)(Hb)的氧解离曲线的氧解离曲线目目 录录 协同效应协同效应(cooperativity)(cooperativity)目目 录录目目 录录O2血红素与氧血红素与氧结

27、合后，铁原子结合后，铁原子半径变小，就能半径变小，就能进入卟啉环的小进入卟啉环的小孔中，继而引起孔中，继而引起肽链位置的变动。肽链位置的变动。目目 录录变构效应变构效应(allosteric effect)(allosteric effect)在变构剂的作用下，变构蛋白质的在变构剂的作用下，变构蛋白质的空间构象发生改动，导致其功能发生改空间构象发生改动，导致其功能发生改动的景象称为变构效应。动的景象称为变构效应。目目 录录目目 录录目目 录录疯牛病中的蛋白质构象改动疯牛病中的蛋白质构象改动疯牛病是由朊病毒蛋白疯牛病是由朊病毒蛋白(prion protein, PrP)引起的一组人和动物神引起的

28、一组人和动物神经退行性病变。经退行性病变。正常的正常的PrP富含富含-螺旋，称为螺旋，称为PrPc。PrPc在某种未知蛋白质的作用下可在某种未知蛋白质的作用下可转变成全为转变成全为-折叠的折叠的PrPsc，从而致病。，从而致病。PrPc-螺旋螺旋PrPsc-折叠折叠正常正常疯牛病疯牛病目目 录录第四节第四节蛋白质的理化性质与分别纯化蛋白质的理化性质与分别纯化The Physical and Chemical Characters and Separation and Purification of Protein目目 录录一蛋白质的两性解离一蛋白质的两性解离 一、理化性质一、理化性质 蛋白质分

29、子除两端的氨基和羧基可解离外，蛋白质分子除两端的氨基和羧基可解离外，氨基酸残基侧链中某些基团，在一定的溶液氨基酸残基侧链中某些基团，在一定的溶液pHpH条条件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。 蛋白质的等电点蛋白质的等电点( isoelectric point, ( isoelectric point, pI) pI) 当蛋白质处于某一当蛋白质处于某一pHpH时，解离成正、负时，解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的荷为零，此时溶液的pHpH称为蛋白质的等电称为蛋白质的等电点。点。目目 录录

30、二蛋白质的胶体性质二蛋白质的胶体性质 蛋白质属于生物大分子之一，分子量蛋白质属于生物大分子之一，分子量可自可自1 1万至万至100100万之巨，其分子的直径可万之巨，其分子的直径可达达1 1100nm100nm，为胶粒范围之内。，为胶粒范围之内。 蛋白质胶体稳定的要素蛋白质胶体稳定的要素颗粒外表电荷颗粒外表电荷水化膜水化膜目目 录录+带正电荷的蛋白质带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质在等电点的蛋白质在等电点的蛋白质水化膜水化膜+带正电荷的蛋白质带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质不稳定的蛋白质颗粒不稳定的蛋白质颗粒酸酸碱碱酸酸碱碱酸酸碱碱脱水作用脱水作用脱水作用脱水作

31、用脱水作用脱水作用溶液中蛋白质的聚沉溶液中蛋白质的聚沉目目 录录三蛋白质的变性、沉淀和凝固三蛋白质的变性、沉淀和凝固 蛋白质的变性蛋白质的变性(denaturation)(denaturation)在某些物理或化学要素作用下，其特在某些物理或化学要素作用下，其特定的空间构象被破坏，即有序的空间构造定的空间构象被破坏，即有序的空间构造变成无序的空间构造，从而导致其理化性变成无序的空间构造，从而导致其理化性质改动和生物活性的丧失。质改动和生物活性的丧失。目目 录录 呵斥变性的要素呵斥变性的要素 如加热如加热, ,乙醇等有机溶剂乙醇等有机溶剂, ,强酸、强碱、重强酸、强碱、重金属离子及生物碱试剂等金

32、属离子及生物碱试剂等 。 变性的本质变性的本质破坏非共价键和二硫键，不改破坏非共价键和二硫键，不改 变蛋白质的一级构造。变蛋白质的一级构造。目目 录录 运用举例运用举例 临床医学上临床医学上, ,变性常被运用来消毒及灭菌。变性常被运用来消毒及灭菌。此外此外, , 防止蛋白量变性也是有效保管蛋白质防止蛋白量变性也是有效保管蛋白质制剂如疫苗等的必要条件。制剂如疫苗等的必要条件。 目目 录录假设蛋白量变性程度较轻，去除变性假设蛋白量变性程度较轻，去除变性要素后，蛋白质仍可恢复或部分恢复其原要素后，蛋白质仍可恢复或部分恢复其原有 的 构 象 和 功 能 ， 称 为 复 性有 的 构 象 和 功 能 ，

33、 称 为 复 性(renaturation) (renaturation) 。目目 录录 天然形状，天然形状，有催化活性有催化活性 尿素、尿素、 -巯基乙醇巯基乙醇 去除尿素、去除尿素、-巯基乙醇巯基乙醇非折叠形状，无活性非折叠形状，无活性目目 录录蛋白质沉淀蛋白质沉淀在一定条件下，蛋白疏水侧链暴露在一定条件下，蛋白疏水侧链暴露在外，肽链融会相互缠绕继而聚集，因在外，肽链融会相互缠绕继而聚集，因此从溶液中析出。此从溶液中析出。变性的蛋白质易于沉淀，有时蛋白变性的蛋白质易于沉淀，有时蛋白质发生沉淀，但并不变性。质发生沉淀，但并不变性。 蛋白质的凝固作用蛋白质的凝固作用蛋白量变性后的絮状物加热可变

34、成比蛋白量变性后的絮状物加热可变成比较巩固的凝块，此凝块不再溶于强酸和较巩固的凝块，此凝块不再溶于强酸和强碱中。强碱中。 目目 录录四蛋白质的紫外吸收四蛋白质的紫外吸收蛋白质分子中含有共轭双键的苯丙氨蛋白质分子中含有共轭双键的苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸，在酸、酪氨酸和色氨酸，在280nm280nm波优点有波优点有特征性吸收峰。蛋白质的特征性吸收峰。蛋白质的OD280OD280与其浓度与其浓度呈正比关系，可作蛋白质定量测定。呈正比关系，可作蛋白质定量测定。目目 录录五蛋白质的呈色反响五蛋白质的呈色反响茚三酮反响茚三酮反响(ninhydrin reaction) (ninhydrin reactio

35、n) 蛋白质经水解后产生的氨基酸可发生茚三蛋白质经水解后产生的氨基酸可发生茚三酮反响。酮反响。 双缩脲反响双缩脲反响(biuret reaction)(biuret reaction)蛋白质和多肽中肽键在稀碱溶液中与硫酸蛋白质和多肽中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫红色，用来检测蛋白质水铜共热，呈现紫红色，用来检测蛋白质水解程度。解程度。目目 录录二、蛋白质的分别和纯化二、蛋白质的分别和纯化一透析及超滤法一透析及超滤法 透析透析(dialysis)利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。分开的方法。 超滤法超滤法 运用正压或离心力使蛋白质溶液

36、透过有一定运用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量的超滤膜，到达浓缩蛋白质溶液截留分子量的超滤膜，到达浓缩蛋白质溶液的目的。的目的。目目 录录二丙酮沉淀、盐析及免疫沉淀二丙酮沉淀、盐析及免疫沉淀 丙酮丙酮(或乙醇沉淀时，必需在或乙醇沉淀时，必需在04低温下低温下进展，丙酮用量普通进展，丙酮用量普通10倍于蛋白质溶液体积。倍于蛋白质溶液体积。蛋白质被丙酮沉淀后，应立刻分别。蛋白质被丙酮沉淀后，应立刻分别。 盐析法盐析法(salt precipitation)(salt precipitation)，是将硫，是将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等中性盐参与蛋酸铵、硫酸钠或氯化钠等中性盐参与蛋白质溶液，使蛋白质外表电荷被中和及白质溶液，使蛋白质外表电荷被中和及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。 目目 录录 免疫沉淀法：免疫沉淀法： 将某一纯化蛋白质免疫动物可获得抗将某一纯化蛋白质免疫动物可获得抗该蛋白的特异抗体。利用特异抗体识别该蛋白的特异抗体。利用特异抗体识别相应的抗原蛋白，并构成抗原抗体复合相应的抗原蛋白，并构成抗原抗体复