红霉素眼膏的分析与检测

1、 项目一 红霉素眼膏的分析与检测 课内项目班级：生药班级：生药1313 组别：第组别：第5组组指导老师：何颖指导老师：何颖 左银虎左银虎组员：吴彩霞组员：吴彩霞 杨雪杨雪 杨青杨青 王思雅王思雅 吴晓玲吴晓玲 曹宇曹宇Page 2一简介n 红霉素，由链霉素链霉菌所产生大环内酯系的代表性的抗菌素，主要对革兰氏阳性菌具有抗菌性，是一种碱性抗生素。Page 3n 红霉素（C37H67NO13）应为标示量的90.0%110.0%，规格为0.5%。n 性状为白色至黄色的软膏，是一类大环内酯类抗生素。鉴别：取本品约0.5g，加0.1mol/L硫酸溶液5ml，置水浴上加热使溶解，冷却，倾取水层，加硫酸2ml

2、，缓缓摇匀，即显红棕色。Page 4n 可见异物n 粒度n 沉降体积比n 金属性异物n 重量差异n 装量n 渗透压摩尔浓度n 无菌质量检查质量检查Page 5含量测定： 取本品适量，精密称定（约相当于红霉素10mg），置分液漏斗中，加石油醚20ml，缓缓振摇，使基质溶解，用磷酸盐缓冲液（pH 7.88.0）提取4次，每次约25ml，合并提取液，置100ml量瓶中，加磷酸盐缓冲液（pH 7.88.0）稀释至刻度，摇匀，照红霉素项下的方法测定，即得。贮存条件： 密封，在阴凉干燥处保存。Page 6红霉素眼膏使用注意事项1.避免接触眼睛及其他黏膜（如口、鼻等）。2. 用药部位如有烧灼感、瘙痒、红肿等

3、情况应停药，并将局部药物洗净，必要时向医师咨询。3.用前应洗净双手。4. 孕妇及哺乳期妇女应在医师指导下使用。Page 75. 使用后应拧紧瓶盖，以免污染药品。6. 对本品过敏者禁用，过敏体质者慎用。7. 本品性状发生改变时禁止使用。 8. 请将本药品放在儿童不能接触的地方。9. 儿童必须在成人监护下使用。10. 如正在使用其他药品，使用本品前请咨询医师或药师。Page 8二、红霉素眼膏含量测定n 仪器、药剂： A gilent LC1100 高效液相色谱仪，A gilent LC1100 自动进器，A gilent LC1100 紫外检测器,，依利特色谱柱（大连依利特科学仪器有限公司， 填料

4、:：sinoch rom ODS2BP 5Lm; 416mm 250mm ） ，A gilent LC1100 数据处理仪。红霉素对照品由中国药品生物制品检定所（批号: 0307-9713） ；红霉素软膏3 批（批号031005、031216、040513） ，规格乙腈为色谱纯；磷酸二氢铵、三乙胺为分析纯,，水为超纯水。Page 9实验步骤n 固定相：十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：011molL - 1磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH615） 2乙腈（70:30） ；流速110m lm in- 1；检测波长210nm；进样量20LL。 在上述条件下，测得红霉素对照品溶液色谱图， 红霉素 的保留时

5、间约为615min，与杂质峰的分离度均大于115 。Page 10n 对照品溶液的制备 精密称取红霉素对照品325mg，置50mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，配成对照品贮备液,再精密量取2mL置25mL量瓶中，加流动相配制成每1mL含红霉素15mg的对照品溶液。Page 11n 供试品溶液的制备 精密称取样品5g，置分液漏斗中，加石油醚80mL，缓缓振摇,使其质溶解，用磷酸盐缓冲液（pH615）提取4次，每次约25mL，合并提取液，置100mL量瓶中，用磷酸盐缓冲液（pH615）稀释至刻度,摇匀，配制成每1mL含红霉素15mg的供试品溶液。Page 12n 线性关系 分别精密量取上

6、述对照品贮备液015、110、210、410、810、1210、1610mL至25mL量瓶中,加流动相至刻度。分别进样20LL ，记录色谱图。以峰面积（Y） 对进样量（X）绘制标准曲线，回归方程为:：Y= 32798+ 95934X, r= 019999。结果表明，红霉素在进样量310 80Lg 的范围内，峰面积与进样量之间呈良好的线性关系。Page 13n 精密度试验 取试验用对照品溶液，重复进样5 次，记录色谱峰面积， RSD 为0.155%。n 溶液稳定性 取试验用供试品溶液在室温放置，分别于0、1、3、5h取20LL 进样，记录色谱峰面积，RSD 为0.113%。Page 14三、微生

7、物限度检查方法实验材料：n 样品： 市售红霉素眼膏 规格：2g/支，含量0.5%n 菌种： 金黄色葡萄球菌n 培养基及试药： 营养琼脂培养基，吐温80，司盘80，自配灭菌液（生理盐水，1mol/l的盐酸，0.1mol/l的盐酸，1mol/l的氢氧化钠，0.1mol/l氢氧化钠）Page 15试验步骤n 菌液制备： 将在(371)的培养箱中培养24小时的金黄色葡萄球菌，用生理盐水稀释10-6备用。 Page 16n 取红霉素眼膏5g至烧杯中，加无菌乳化剂（司盘80 5g，吐温80 10g），用玻璃棒搅拌成团，使样品充分乳化，加生理盐水至100ml，作为1:20供试液。依此法制备供试液若干份，分别

8、加金黄色葡萄球菌菌液1ml,用1mol/l盐酸，0.1mol/l盐酸调节供试液pH值，置常温(25)及水浴（45），放置不同时间后立即吸取1ml，分别置于5个平皿，每个平皿0.2ml,倾注约15ml，营养琼脂培养基至（371）培养箱内培养，计数，计算出每克红霉素眼膏，检出的阳性对照菌个数。Page 17 吸取供试液以后，立即加1mol/l氢氧化钠或0.1mol/l的氢氧化钠，调节pH值，依上法计数，计算每克红霉素眼膏检出的阳性对照菌个数。 进行5次重复试验。Page 18四、红霉素眼膏效价的浊度法测定 建立了浊度法测定红霉素眼膏效价。采用标准曲线法，以金黄色葡萄球菌为实验菌，加菌量03(价)，

9、37培养34h，于530nm在线测定。4.1仪器与试药： wBS100型微生物比浊法测定仪及石英培养杯 金黄色葡萄球菌和红霉素眼膏标准品Page 19实验步骤n 4.1溶液配制 实验菌液：取金黄色葡萄球菌斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，置3537培养18h，用灭菌生理盐水洗下菌苔，加生理盐水稀释，使其在580nm波长处的吸光度D约为1.0。取菌液0.3ml加至100ml抗生素检定培养基III中，摇匀，得实验菌液。Page 20 标准品溶液：精密称取1标准品约25mg，置25ml量瓶中，加乙醇溶解后，用灭菌水定容，作为标准品贮备液。精密量取2ml用pH78灭菌磷酸缓冲液(PBs)定容至200m

10、l，摇匀。分别精密量取2、25、3、4、5ml，用PBS定容至50ml，得1浓度O41pgml的系列标准品溶液。Page 21 供试品溶液：精密称取红霉素眼膏适量(约相当于l10mg)，置分液漏斗中，加石油醚20ml，溶解后用PBS提取(25mlx4)，合并提取液置l 00ml量瓶中，用PBS定容，作为供试品贮备液。精密量取适量，用PBs稀释至浓度为05pgml的溶液，作为供试品溶液。Page 22n 4.2线性试验 分别精密量取系列标准品溶液，按拉丁方排列分别加入灭菌培养管中，每个浓度各5管，再精密加入实验菌液9ml，立即摇匀，置测定仪内，于(37士1)培养4h。另取PBS lml，加入9ml空白培养基，混匀，作为空白对照；取PBs 1ml，加入实验菌液9ml，混匀，作为阳性对照。于530nm在线测定各管中金黄色葡萄球菌对数生长期内不同培养时间下的吸光度)。以1浓度的对数值(lgc)为横坐标，D为纵坐标绘制标准曲线，按标准曲线法计算供试品的效价。Page 23n 4.3回收率试验 取己知l效价的红霉素眼膏适量，加入标准品贮备液，按“41”项下方法提取，用PBS稀释制成1浓度为O