第五章食品中化学物质的一般毒性作用及评价

1、第四章第四章 食品中化学物质的一食品中化学物质的一般毒性作用及评价般毒性作用及评价食品安全教研室 理解急性毒性和急性毒性试验的概念和目的、经典急性致死性毒性试验、急性毒性的分级、急性毒性试验的其他方法。 理解亚慢性毒性和慢性毒性试验的概念和目的、亚慢性和慢性毒性试验方法。 熟悉蓄积毒性、化学物质的蓄积作用、蓄积作用的研究方法。基本概念 化学毒物：在一定条件下，以较小剂化学毒物：在一定条件下，以较小剂量给予时，可与生物体相互作用，引量给予时，可与生物体相互作用，引起生物体功能或器质性损害的化学物起生物体功能或器质性损害的化学物质。质。 毒物与非毒物没有绝对的界限毒物与非毒物没有绝对的界限 毒性：

2、外来化学物引起生物体损害的毒性：外来化学物引起生物体损害的能力，毒物毒性的大小可通过所产生能力，毒物毒性的大小可通过所产生损害的性质和程度表现出来。损害的性质和程度表现出来。 毒作用（毒效应）：毒作用（毒效应）： 化学毒物按其化学性质可分为挥发性化学毒物按其化学性质可分为挥发性毒物，金属毒物，农药兽药残留，鼠毒物，金属毒物，农药兽药残留，鼠药，有毒动植物，真菌毒素及其他化药，有毒动植物，真菌毒素及其他化学污染物等。学污染物等。 一般毒性作用（基础毒性）：外来化一般毒性作用（基础毒性）：外来化学物在一定剂量，一定接触时间和接学物在一定剂量，一定接触时间和接触方式下对试验动物产生的综合毒效触方式下

3、对试验动物产生的综合毒效应。根据接触毒物的时间长短又可分应。根据接触毒物的时间长短又可分为急性毒性，亚慢性毒性和慢性毒性为急性毒性，亚慢性毒性和慢性毒性，相应的试验称急性毒性试验，亚慢，相应的试验称急性毒性试验，亚慢性毒性试验和慢性毒性试验。性毒性试验和慢性毒性试验。 一般毒性试验的方法一般毒性试验的方法：一般毒性测试一般毒性测试污染物污染物理化特性理化特性了解毒性了解毒性大小和特征大小和特征了解在体内了解在体内蓄积和耐受特性蓄积和耐受特性蓄积毒性试验蓄积毒性试验确定阈和阈下剂量确定阈和阈下剂量了解对机体毒作用了解对机体毒作用靶点和指标靶点和指标急性毒性试验急性毒性试验亚急性毒性试验亚急性毒性

4、试验 亚慢性毒性试验亚慢性毒性试验慢性毒性试验慢性毒性试验急性致死试验急性致死试验 急性非致死试验急性非致死试验研究化学毒物一般毒性作用的毒理学意义研究化学毒物一般毒性作用的毒理学意义 毒理学工作的重要内容 安全性评价和危险度评定的基础 对防治化学毒物中毒、制定标准以及管理毒理学等有重要意义。& 1 急性毒性作用急性毒性作用& 2 蓄积毒性蓄积毒性& 3 亚慢性和慢性毒性作用亚慢性和慢性毒性作用 & 4 局部毒性作用局部毒性作用1 急性毒性作用急性毒性作用 一、急性毒性和急性毒性试验概述一、急性毒性和急性毒性试验概述 二、急性毒性试验及其评价二、急性毒性试验及其

5、评价 三、急性毒性分级三、急性毒性分级一、急性毒性和急性毒性试验概述一、急性毒性和急性毒性试验概述 急性毒性的概念急性毒性的概念急性毒性急性毒性(acute toxicity)(acute toxicity)是指机体是指机体( (人或试验动物人或试验动物) )一一次接触或次接触或2424小时内多次接触小时内多次接触化学物后在化学物后在短期短期( (最长到最长到1414天天) )内所发生的内所发生的毒性效应毒性效应，包括一般行为、外观改变、包括一般行为、外观改变、大体形态变化以及死亡效应。大体形态变化以及死亡效应。 急性接触的含义 “一次接触”是含有时间因素的概念； “多次接触”是指当化学物毒性

6、很低，需要给予动物较大剂量时，可在24小时内分多次给予。 是毒理学研究中最基础的工作，是我们了解外源化学物对机体产生的急性毒性的根本依据。 1927年Trevan引入了半数致死量的概念来评价急性毒性，此后，该指标得到广泛的应用，并成为急性毒性的主要指标。化学物的急性毒性资料对于安全性评价及化学物管理方面非常重要。对急性毒性试验程序国际上和我国已有一些法规。急性毒性试验急性毒性试验观察内容 行为 外观改变 大体形态变化 死亡效应 LD50急性毒性试验的目的急性毒性试验的目的测试和求出化学毒物对一种或几种试验动物的致死量测试和求出化学毒物对一种或几种试验动物的致死量( (以以LDLD5050表示表

7、示) )以及其它的急性毒性参数，了解急性毒作用以及其它的急性毒性参数，了解急性毒作用强度。强度。并通过观察动物中毒表现和死亡的情况，了解急性毒作并通过观察动物中毒表现和死亡的情况，了解急性毒作用性质、可能的靶器官和致死原因，提供化学毒物的急性用性质、可能的靶器官和致死原因，提供化学毒物的急性中毒资料、初步评价对人体产生损害的危险性。中毒资料、初步评价对人体产生损害的危险性。探求化学毒物急性毒性的剂量探求化学毒物急性毒性的剂量反应关系与中毒特征。反应关系与中毒特征。为亚慢性、慢性毒性作用试验的染毒剂量设计提供参考为亚慢性、慢性毒性作用试验的染毒剂量设计提供参考依据。依据。研究化学毒物急性中毒的预

8、防和急救治疗措施。研究化学毒物急性中毒的预防和急救治疗措施。为毒作用机制研究提供线索为毒作用机制研究提供线索 。 急性毒性参数急性毒性参数 代号或英文缩写代号或英文缩写 试验终止效应试验终止效应 毒性上限参数毒性上限参数 半数致死剂量或浓度半数致死剂量或浓度最大致死剂量或浓度最大致死剂量或浓度最小致死剂量或浓度最小致死剂量或浓度 LD50或或LC50LD100或或LC100MLD,LD50或或MLC,LC50 死亡死亡死亡死亡死亡死亡 可替代可替代LD50的的参数参数 半数效应剂量或浓度半数效应剂量或浓度最大耐受剂量或浓度或最大耐受剂量或浓度或最大非致死剂量最大非致死剂量急性毒性估计值（急性毒

9、性估计值（LD50估估计值或范围）计值或范围）ED50或或EC50MTD,LD0或或MTC,LC0MNLDATE 非死亡非死亡不完全以死亡为终点不完全以死亡为终点动物用量少，不完全动物用量少，不完全以死亡为终点以死亡为终点 毒性下限参数毒性下限参数 观察到有害作用的最低剂量观察到有害作用的最低剂量未观察到有害作用的剂量未观察到有害作用的剂量 LOAELNOAEL 非死亡非死亡非死亡非死亡二、经典急性毒性试验及其评二、经典急性毒性试验及其评价价外源化学物的种类不同，急性毒性试验的程序和要求有所不同。但总体原则和要点是相似的。受试物的保存和配制：受试物的保存和配制： 受试物的接受、分样、保管、称量

10、、配制以及在此过程中的严格质量保证是急性毒性试验成功与否的关键。 急性毒性试验受试物配制的常用剂型水溶液、混悬液和油溶液。 所用的溶剂和助溶剂应该是基本无毒的，和受试物不起反应。( (一一) )试验动物的选择试验动物的选择 原则原则 ：急性毒性试验要求选择对化学毒物的代谢和毒效急性毒性试验要求选择对化学毒物的代谢和毒效应表现与人的反应尽可能一致的试验动物。应表现与人的反应尽可能一致的试验动物。动物易于获得动物易于获得品系纯化品系纯化价格较低和易于饲养等条件。价格较低和易于饲养等条件。 二、急性毒性试验二、急性毒性试验 1 1试验动物的种属和品系试验动物的种属和品系最好用两种种属的动物最好用两种

11、种属的动物啮齿类啮齿类: :小鼠、大鼠、豚鼠或家兔小鼠、大鼠、豚鼠或家兔非啮齿类：狗或猴非啮齿类：狗或猴。急性皮肤毒性试验可选用成年大鼠、豚鼠或家兔，急性皮肤毒性试验可选用成年大鼠、豚鼠或家兔，优先考虑白色家兔。而急性吸入毒性试验和经口急优先考虑白色家兔。而急性吸入毒性试验和经口急性毒性试验则优先考虑大鼠。性毒性试验则优先考虑大鼠。二、急性毒性试验二、急性毒性试验 试验动物的年龄和体重：试验动物的年龄和体重：急性试验动物不宜过老或过幼，通常要求选择刚成年急性试验动物不宜过老或过幼，通常要求选择刚成年动物进行试验，而且须是未曾交配和受孕的动物。例动物进行试验，而且须是未曾交配和受孕的动物。例如：

12、大鼠如：大鼠180180240g240g、小鼠、小鼠181825g25g、家兔、家兔2 22.5kg2.5kg、豚鼠豚鼠200200250g250g、狗、狗101015kg15kg。同一批试验动物体重同一批试验动物体重变异范围不应超过该批动物平均体重的变异范围不应超过该批动物平均体重的2020。 二、急性毒性试验二、急性毒性试验 3.3.试验动物的性别：试验动物的性别：急性毒性试验的主要内容是求急性毒性试验的主要内容是求LDLD5050，除特殊要求，除特殊要求外，一般急性毒性试验对动物性别要求为外，一般急性毒性试验对动物性别要求为雌雄各雌雄各半半。如果在预试验时发现化学毒物。如果在预试验时发现

13、化学毒物( (如农药如农药) )对雌对雌、雄动物毒效应的敏感性有明显差异，则应单独、雄动物毒效应的敏感性有明显差异，则应单独分别求出雌性与雄性动物各自的分别求出雌性与雄性动物各自的LDLD5050。如果试验。如果试验是为致畸试验作准备，也可仅作雌性动物的是为致畸试验作准备，也可仅作雌性动物的LDLD5050测试。测试。 二、急性毒性试验二、急性毒性试验 4.动物数量与随机分组：动物数量与随机分组： 大、小鼠等小动物大、小鼠等小动物 每组每组10只只 狗等大动物狗等大动物 每组每组6只只 分组原则分组原则随机化原则随机化原则 5.禁食：禁食： 经消化道染毒时，要求试验前对动物禁食经消化道染毒时，

14、要求试验前对动物禁食 大鼠、小鼠大鼠、小鼠隔夜进食；染毒后禁食隔夜进食；染毒后禁食4h 大动物大动物每日上午喂食前染毒每日上午喂食前染毒 染毒后继续禁食染毒后继续禁食24h，但在禁食时要保障饮水。，但在禁食时要保障饮水。 6.实验动物的预检：实验动物的预检： 选择健康动物选择健康动物 12周的检疫期周的检疫期二、急性毒性试验二、急性毒性试验 （二）试验动物的饲养环境（二）试验动物的饲养环境 恒定的温度：恒定的温度：223 湿度：湿度：3070% 照度：昼夜各半照度：昼夜各半 饲料合格、饮水合格、垫料合格饲料合格、饮水合格、垫料合格二、急性毒性试验二、急性毒性试验（三）染毒途径的选择（三）染毒途

15、径的选择: 染毒途径（染毒途径（exposure routes）的选择需考虑：）的选择需考虑：模拟人在生活和生产环境中实际接触受试物的模拟人在生活和生产环境中实际接触受试物的途径和方式途径和方式；有利于不同化学物之间急性毒性有利于不同化学物之间急性毒性大小的比较大小的比较；受试物的性质和用途；各种受试受试物的性质和用途；各种受试物毒性评价程序的要求等。物毒性评价程序的要求等。 最常用的染毒途径为最常用的染毒途径为经口、经呼吸道、经皮及经口、经呼吸道、经皮及注射途径。注射途径。 一般来说固态或液态的化学物均先进行经口染毒途径的急性毒性试验，求出LD50值来比较不同化学物急性毒性大小。 主要方法：

16、灌胃法，喂饲法、吞咽胶囊法 灌胃法灌胃法的优缺点：优点：可以准确控制染毒剂量；缺点：工作量大，操作需谨慎。 灌胃:小鼠0.21.0ml/只或0.10.5ml/10g bw 大鼠一次灌胃体积不超过5ml/只 家兔不超过10ml/2kg bw 狗不超过50ml/10kg bw经口染毒喂饲法喂饲法 将受试物拌入饲料或饮水中，让试验动物自由摄入。 优点：简单易行，符合人类接触的实际情况 缺点：有异味，动物拒食，使摄入量达不到设计剂量；易挥发物，易挥发损失，摄入量就不够准确。吞咽胶囊吞咽胶囊 将受试物装入胶囊内，强行放入动物舌后咽部，迫使其咽下。 优点：剂量准确，尤其是适用于易挥发，易水解及有异味的受试

17、物。 缺点：动物有咬伤人的危险。经呼吸道染毒 研究生产条件下以气体、蒸汽、粉尘、烟、雾等形式存在的化学毒物和评价环境空气污染物以及吸入给药途径的药物。经皮肤染毒经注射途径染毒二、急性毒性试验二、急性毒性试验（四）染毒剂量与分组（四）染毒剂量与分组: 1 1查阅文献查阅文献 了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状态、熔点、沸点、密度、闪点、挥发度、蒸气压、水态、熔点、沸点、密度、闪点、挥发度、蒸气压、水溶性和脂溶性等理化特性，生产批号及纯度，杂质成溶性和脂溶性等理化特性，生产批号及纯度，杂质成分与含量等。分与含量等。 确定使用哪一种计算方法求确定

18、使用哪一种计算方法求LDLD5050，然后再设计剂量，然后再设计剂量分组。分组。LDLD5050的计算方法常用寇氏法、概率单位法、霍的计算方法常用寇氏法、概率单位法、霍思法等。思法等。 找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物的毒性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同的毒性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同接触途径所测得的接触途径所测得的LDLD5050(LC(LC5050) )值作为受试化学物的预期值作为受试化学物的预期毒性中值。毒性中值。 二、急性毒性试验二、急性毒性试验（四）染毒剂量与分组（四）染毒剂量与分组:2 2预试验预试验

19、设定以此预期值作为待测化学物的中间剂量组，并设定以此预期值作为待测化学物的中间剂量组，并在该剂量的上下各设计在该剂量的上下各设计l l一一2 2个剂量组作为预试验剂量个剂量组作为预试验剂量。 根据确定的剂量组进行染毒。根据确定的剂量组进行染毒。 根据预试验的死亡资料确定组距。根据预试验的死亡资料确定组距。 可根据以下公式计算出剂量分组：可根据以下公式计算出剂量分组： i=(lgLDi=(lgLD9090-lgLD-lgLD1010) )(n-1) (n-1) 或：或：i=(lgLDi=(lgLD100100-lgLD-lgLD0 0) )(n-1)(n-1) 式中式中i i为组距为组距( (相

20、邻的两个剂量组对数剂量之差相邻的两个剂量组对数剂量之差) )； n n为设计的剂量组数。为设计的剂量组数。二、急性毒性试验二、急性毒性试验（四）染毒剂量与分组（四）染毒剂量与分组:3 3正式试验正式试验; ; 一般来说、根据试验设计所选用的一般来说、根据试验设计所选用的LDLD5050计算方法来确定计算方法来确定组数。例如几率单位法、寇氏法一般设组数。例如几率单位法、寇氏法一般设6 61010个剂量组；个剂量组；霍恩法固定设霍恩法固定设4 4个剂量组。求得个剂量组。求得i i值后以最低剂量组值后以最低剂量组(LD(LD0 0或或LDLD1010) )的对数剂量加上一个的对数剂量加上一个i i值

21、，即是第二个剂量组值，即是第二个剂量组的对数剂量，依此类推直至最高剂量组，查各自的反对的对数剂量，依此类推直至最高剂量组，查各自的反对数即得出各组剂量的真实值。数即得出各组剂量的真实值。 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 LgLD0 LgLD0+i LgLD0+2i LgLD0+3i LgLD0+4i 染毒剂量与分组染毒剂量与分组（归纳总结）（归纳总结）二、急性毒性试验二、急性毒性试验（五）试验周期与毒效应观察五）试验周期与毒效应观察 1.中毒症状中毒症状二、急性毒性试验二、急性毒性试验（五）试验周期与毒效应观察（五）试验周期与毒效应观察: 2.体重体重 在观察试验动物中毒症状的

22、过程中，应同时观察在观察试验动物中毒症状的过程中，应同时观察体重的变化。体重的变化。体重可以反映动物中毒后的整体变体重可以反映动物中毒后的整体变化。化。体重改变的原因很多，若化学毒物刺激或损体重改变的原因很多，若化学毒物刺激或损伤消化道可出现试验动物饮食减少甚至拒食，表伤消化道可出现试验动物饮食减少甚至拒食，表现为体重减轻。若化学毒物引起腹泻，将影响食现为体重减轻。若化学毒物引起腹泻，将影响食物吸收和利用，体重也会减轻。如果化学毒物影物吸收和利用，体重也会减轻。如果化学毒物影响水的摄取或肾功能急性损伤，也可能在体重上响水的摄取或肾功能急性损伤，也可能在体重上反映出来。所以，对存活动物尤其是对低

23、于反映出来。所以，对存活动物尤其是对低于LDLD5050剂量组的存活动物应在观察期剂量组的存活动物应在观察期1414天内称量其体天内称量其体重的变化以便了解受试物引起毒效应的持续时重的变化以便了解受试物引起毒效应的持续时间。间。 二、急性毒性试验二、急性毒性试验（五）试验周期与毒效应观察（五）试验周期与毒效应观察:3.3.病理检查及其他指标病理检查及其他指标: : 对死亡的动物：均应及时进行大体解剖和病对死亡的动物：均应及时进行大体解剖和病理组织学检查，肉眼观察主要脏器的大体病理组织学检查，肉眼观察主要脏器的大体病理变化，如脏器大小、外观、色泽的变化，理变化，如脏器大小、外观、色泽的变化，有无

24、充血、出血、水肿或其它改变，对有改有无充血、出血、水肿或其它改变，对有改变的脏器进行取材做组织病理学检查。变的脏器进行取材做组织病理学检查。 对存活动物：在观察期结束时进行大体病理对存活动物：在观察期结束时进行大体病理检查必要时做组织病理学检查。根据试验检查必要时做组织病理学检查。根据试验需要可进一步扩大观察项目如体温、心电需要可进一步扩大观察项目如体温、心电图、脑电图或进行某些生化指标测定等。图、脑电图或进行某些生化指标测定等。二、急性毒性试验二、急性毒性试验（五）试验周期与毒效应观察五）试验周期与毒效应观察 4.死亡和死亡时间死亡和死亡时间 重点观察和记录每只动物死亡的时间，重点观察和记录

25、每只动物死亡的时间，特别是最早出现死亡的时间以及各个剂特别是最早出现死亡的时间以及各个剂量组动物的死亡数。分析中毒死亡时间量组动物的死亡数。分析中毒死亡时间的规律具有一定意义，可为深人研究化的规律具有一定意义，可为深人研究化学物的毒作用机制提供参考。学物的毒作用机制提供参考。 二、急性毒性试验二、急性毒性试验(六六)经典急性毒性试验的局限性经典急性毒性试验的局限性 1.消耗的动物量大消耗的动物量大 2.获得的信息有限获得的信息有限 3.测得的测得的LD50仅仅是一个近似值仅仅是一个近似值 4.在安全性评价中仅评价动物死亡和简单在安全性评价中仅评价动物死亡和简单的症状观察是不够的，更需要的是生理

26、学的症状观察是不够的，更需要的是生理学、血液学及其它化验检查所提供的深入细、血液学及其它化验检查所提供的深入细致的毒性信息。致的毒性信息。(七七)经典急性毒性试验评价经典急性毒性试验评价WHO和欧盟对食品毒物急性毒性的分级和欧盟对食品毒物急性毒性的分级WHO 5级（大鼠）级（大鼠）欧盟欧盟 4级级毒性分级毒性分级 经口经口LD50（mg/kg）毒性分级毒性分级 经口经口LD50（mg/kg）剧毒剧毒1高毒高毒150高毒高毒50000不分不分2000我国食品毒物急性毒性分级级别级别大鼠经口大鼠经口LD50（mg/kg）相当于体重相当于体重70kg人人的致死量的致死量第第6级级 极毒极毒1稍尝，稍

27、尝，150001050g急性毒性替代试验 一、一、基本概念基本概念二二、 蓄积毒性试验方法及其评价蓄积毒性试验方法及其评价 2 蓄积毒性蓄积毒性 化学毒物进入机体后，经过生物转化以代化学毒物进入机体后，经过生物转化以代谢产物或化学物原型排出体外。但是，当化学谢产物或化学物原型排出体外。但是，当化学毒物反复多次给动物染毒，化学毒物进入机体毒物反复多次给动物染毒，化学毒物进入机体的速度的速度( (或总量或总量) )超过代谢转化的速度和排泄的超过代谢转化的速度和排泄的速度速度( (或总量或总量) )时，化学毒物或其代谢产物就有时，化学毒物或其代谢产物就有可能在机体内逐渐增加并贮留，这种现象称为可能在

28、机体内逐渐增加并贮留，这种现象称为化学毒物的化学毒物的蓄积作用蓄积作用(accumulation)(accumulation)。 一、基本概念一、基本概念一、基本概念一、基本概念二、蓄积毒性试验方法及其评价二、蓄积毒性试验方法及其评价化学毒物的化学毒物的蓄积作用是发生慢性中毒的物质基础蓄积作用是发生慢性中毒的物质基础，因此研究化学毒物在机体内的蓄积性是评价化因此研究化学毒物在机体内的蓄积性是评价化学毒物能否引起潜在慢性毒性的依据之一，也是学毒物能否引起潜在慢性毒性的依据之一，也是卫生标准制订过程选择安全系数的主要依据。卫生标准制订过程选择安全系数的主要依据。蓄积毒性试验是研究化学毒物基础毒性的

29、重要内蓄积毒性试验是研究化学毒物基础毒性的重要内容之一，容之一，目的是通过试验求出蓄积系数目的是通过试验求出蓄积系数K K，了解化，了解化学毒物蓄积毒性的强弱，学毒物蓄积毒性的强弱，并为慢性毒性试验及其并为慢性毒性试验及其他有关毒性试验的剂量选择提供参考。他有关毒性试验的剂量选择提供参考。 (一一)蓄积系数法蓄积系数法 蓄积系数蓄积系数(accumulation coefficient)(accumulation coefficient)是是多次染毒使半数动物出现效应多次染毒使半数动物出现效应( (或死亡或死亡) )的的累积剂量累积剂量EDED5050(n)(n)与一次染毒使半数动物与一次染毒

30、使半数动物出现相同效应出现相同效应( (或死亡或死亡) )的剂量的剂量EDED5050(1)(1)的的比值，即：比值，即：K KEDED5050(n)/ED(n)/ED5050(1)(1)K KLDLD5050(n)/LD(n)/LD5050(1) (1) 二、蓄积毒性试验方法及其评价二、蓄积毒性试验方法及其评价 1 1固定剂量法：固定剂量法： 一般常选用大、小鼠灌胃或腹腔注射方法进行染毒一般常选用大、小鼠灌胃或腹腔注射方法进行染毒。先求出。先求出LDLD5050，然后选取相同条件的，然后选取相同条件的4040只只( (或更多或更多) )实验实验动物，分为两组，一为染毒组，一为对照组，每组至动

31、物，分为两组，一为染毒组，一为对照组，每组至少少2020只，雌雄各半。试验组在只，雌雄各半。试验组在1 12020l l50LD50LD5050的范围的范围内选定一个剂量，每日以固定剂量、定时和相同途径内选定一个剂量，每日以固定剂量、定时和相同途径进行染毒进行染毒, ,试验期间观察记录每组动物死亡数。当试验试验期间观察记录每组动物死亡数。当试验组累积发生一半动物死亡即可终止试验。此时，计算组累积发生一半动物死亡即可终止试验。此时，计算累积总接触剂量累积总接触剂量LDLD5050(n)(n)，根据公式计算，根据公式计算K K值，然后依值，然后依表表6565进行评价。但若接触剂量已累积达到进行评价

32、。但若接触剂量已累积达到5 5个个LDLD5050剂剂量，也可终止试验。量，也可终止试验。二、蓄积毒性试验方法及其评价二、蓄积毒性试验方法及其评价 2 2剂量递增法：剂量递增法： 在试验期间，当化学毒物引起动物累积死亡一半时即可终止试在试验期间，当化学毒物引起动物累积死亡一半时即可终止试验，计算验，计算K K值进行评价。一般来说，在试验第值进行评价。一般来说，在试验第2l2l天也可结束试验，天也可结束试验，因为这之前如果动物没有死亡或死亡数不足一半，说明其累积剂因为这之前如果动物没有死亡或死亡数不足一半，说明其累积剂量已达量已达5.26LD5.26LD5050，即，即K K5 5。使用本方法时

33、要注意染毒期间定期。使用本方法时要注意染毒期间定期( (每每4 4天一次天一次) )给动物称重，按实测体重，调整化学毒物的染毒绝对量。给动物称重，按实测体重，调整化学毒物的染毒绝对量。二、蓄积毒性试验方法及其评价二、蓄积毒性试验方法及其评价3 3剂量固定的剂量固定的2020天蓄积法：天蓄积法： 它通常采用经口灌胃染毒方式，将动物随机分为它通常采用经口灌胃染毒方式，将动物随机分为5 5个组，个组，包括阴性对照组和包括阴性对照组和1/20 LD1/20 LD5050、l/10 LDl/10 LD5050、1/5 LD1/5 LD5050和和1/2 LD1/2 LD5050四个剂量组，每组动物数四个

34、剂量组，每组动物数1010只，雌雄各半。每日染毒一次，只，雌雄各半。每日染毒一次，连续染毒连续染毒2020天。观察每组雌雄合计的死亡动物数量。试验结天。观察每组雌雄合计的死亡动物数量。试验结束时根据下列标准进行评定：各剂量组均无死亡，即为蓄束时根据下列标准进行评定：各剂量组均无死亡，即为蓄积性不明显；如仅积性不明显；如仅1/2LD1/2LD5050剂量组有死亡，其他组均无死亡剂量组有死亡，其他组均无死亡，则为弱蓄积性；如，则为弱蓄积性；如1/20LD1/20LD5050剂量组无死亡，其他各组间死剂量组无死亡，其他各组间死亡数有剂量反应关系时，则为中等蓄积性；如亡数有剂量反应关系时，则为中等蓄积

35、性；如1/20LD1/20LD5050剂量剂量组有死亡，且有剂量反应关系，则为强蓄积性。组有死亡，且有剂量反应关系，则为强蓄积性。 二、蓄积毒性试验方法及其评价二、蓄积毒性试验方法及其评价( (二二) )生物半减期法：生物半减期法： 生物半减期生物半减期(biological half-life(biological half-life，t t1/21/2) )法是用毒物动力学原理法是用毒物动力学原理描述化学毒物在机体内的蓄积作用。描述化学毒物在机体内的蓄积作用。 化学毒物在体内蓄积的速度和量与机体单位时间内吸收该物质的速化学毒物在体内蓄积的速度和量与机体单位时间内吸收该物质的速度以及清除速度

36、有关。即使化学毒物以相等的时间间距恒速地吸收入度以及清除速度有关。即使化学毒物以相等的时间间距恒速地吸收入血液，该物质在一定剂量范围内在机体的蓄积量也不呈直线无限地增血液，该物质在一定剂量范围内在机体的蓄积量也不呈直线无限地增加，而是呈曲线形上升并有一定的极限。这是因为化学物质吸收进入加，而是呈曲线形上升并有一定的极限。这是因为化学物质吸收进入机体的同时体内也发生着代谢转化及清除的过程机体的同时体内也发生着代谢转化及清除的过程( (包括血中化学毒物包括血中化学毒物向组织脏器的分配过程向组织脏器的分配过程) )。当化学毒物的吸收过程与代谢转化。当化学毒物的吸收过程与代谢转化清除清除的过程达到平衡

37、时，其蓄积量基本上不再增加。的过程达到平衡时，其蓄积量基本上不再增加。 一般来说，一般来说，t t1/21/2d d较短的化学毒物达到蓄积极限所需的时间也短，较短的化学毒物达到蓄积极限所需的时间也短，t t1/21/2长者达到蓄积极限的时间也长。长者达到蓄积极限的时间也长。二、蓄积毒性试验方法及其评价二、蓄积毒性试验方法及其评价一一 亚慢性毒性作用：亚慢性毒性作用： 亚慢性毒性的概念亚慢性毒性的概念 亚慢性毒性试验的目的亚慢性毒性试验的目的 亚慢性毒性试验的设计亚慢性毒性试验的设计 二二 慢性毒性作用：慢性毒性作用： 慢性毒性的概念慢性毒性的概念 慢性毒性试验的目的慢性毒性试验的目的 慢性毒性

38、试验设计慢性毒性试验设计 3 亚慢性和慢性毒性试验亚慢性和慢性毒性试验(一一) 概念：概念： 亚慢性毒性亚慢性毒性(subchronic toxicity)是指人是指人 或实验动物连续接触较长时间、较大剂量或实验动物连续接触较长时间、较大剂量的外源化合物所引起的毒性效应。的外源化合物所引起的毒性效应。慢性毒性慢性毒性(chronic toxicity)是指人或实验是指人或实验动物长期动物长期(甚至终生甚至终生)反复接触低剂量的化反复接触低剂量的化学毒物所产生的毒性效应。学毒物所产生的毒性效应。一、亚慢性和慢性毒性试验的概念、目的一、亚慢性和慢性毒性试验的概念、目的（二）试验目的：（二）试验目的

39、： 1. 1.确定受试物亚慢性和慢性毒性的效应谱，对在急性及亚急性毒确定受试物亚慢性和慢性毒性的效应谱，对在急性及亚急性毒 性试验中发现的毒作用提供新的信息，并发现在急性及亚急性毒性试验中发现的毒作用提供新的信息，并发现在急性及亚急性毒性试验中未发现的毒作用；性试验中未发现的毒作用； 2.2.研究受试物亚慢性和慢性毒作用的靶器官；研究受试物亚慢性和慢性毒作用的靶器官； 3.3.研究受试物亚慢性和慢性毒性剂量研究受试物亚慢性和慢性毒性剂量反应反应( (效应效应) )关系，确定其观关系，确定其观察到有害作用的最低剂量察到有害作用的最低剂量(LOAEL)(LOAEL)和未观察到有害作用的剂量（和未观察到有害作用的剂量（NOAELNOAEL），提出此受试物的安全限量参考值），提出此受试物的安全限量参考值; ; 4. 4.研究受试物亚慢性和慢性毒性损害的可逆性研究受试物亚慢性和慢性毒性损害的可逆性; ; 5. 5.亚慢性毒性试验为慢性毒性试验的剂量设计及观察指标选择提亚慢性毒性试验为慢性毒性试验的剂量设计及观察指标选择提 供依据供依据; ; 6. 6.确定不同动物物种对受试物亚慢性和慢性