生物显微技术染色和组织化学课件

1、生物显微技术染色和组织化学染色 活体染色：无毒染料注入动物体内，一定时间后取材，固定切片或铺片观察 台盼蓝，台盼红，墨汁。 固定后染色：生物显微技术染色和组织化学 媒染剂：组织媒染剂-染料 复合体。 增强剂：加强染色的选择强度。 加速剂：加强染料的渗透作用。生物显微技术染色和组织化学苏木精(hematoxylin)、伊红（eosin）染色法（染色） 苏木精将细胞核染成紫蓝色，伊红将细胞质（浆）染成红色。 苏木精是具有阳离子的碱性染料，可以与具有阴离子基因的组织成分耦合成盐，凡组织结构对苏木精起紫蓝色反应的称为嗜碱性（basophil）。 伊红是具有阴离子的酸性染料，可以与具有阳离子基因的组织伊

2、红起红色分耦合成盐，凡组织结构对伊红起红色反应的称为嗜酸性（acidophil）。对碱性或酸性染料亲和力均不强者，则称为中性。 生物显微技术染色和组织化学Delafield 苏木精液 苏木精 4g 无水乙醇 25ml（溶解） 10%铵矾水 400ml， 甘油 100ml， 甲醇或95%乙醇 100ml。 阳光空气中放3-4个月生物显微技术染色和组织化学石蜡切片苏木精染色步骤 切片脱蜡：二甲苯两次，每次10-20分钟。 梯度酒精下行入水：100%-90%-80%-70%-60%-50%-水 苏木精染色10分钟左右，水洗。 分色：1%盐酸的70%乙醇中。使核着色，核以外的成分无色。水洗。 1%伊红

3、的70%酒精复染1分钟 95%乙醇分色生物显微技术染色和组织化学 95%乙醇漂洗，无水乙醇脱水。 无水乙醇：二甲苯=1：1 一次 二甲苯两次 加胶封片生物显微技术染色和组织化学染色结果 细胞核蓝紫色，细胞质、胶原纤维、肌纤维呈不同色调的粉红色。 生物显微技术染色和组织化学 进行性染色： 退行型染色： 分色生物显微技术染色和组织化学 组织化学生物显微技术染色和组织化学定义 组织化学也称细胞化学，是在组织的原位上显示并研究其化学性质和功能关系的一门科学技术。 组织化学是细胞形态学与化学、生物化学之间的边缘科学。根据已知的化学反应，在细胞原位上以化学反应显示出该细胞中的化学成分、性质、及其变化，从而

4、将结构和机能更紧密的联系在一起。生物显微技术染色和组织化学借助这一技术可以： 直接观察到细胞的形态特征； 可以观察到该细胞的化学成分、化学性质； 在不同生理状态下，组织形态、化学性质的变化研究可以阐明细胞的功能。生物显微技术染色和组织化学组织化学的技术要求 保存细胞的生前结构。 保存细胞生前的化学成分和酶活性。 所用的化学方法是已知的化学反应，具有高度的特异性。 反应产物应是一种能形成稳定沉淀的有色物质，供光镜观察；或电子密度高的物质供电镜观察。生物显微技术染色和组织化学组织化学的特点 定性 定位 相对定量研究细胞或组织中的化学物质。生物显微技术染色和组织化学研究内容 蛋白质：酶类、抗原等具有

5、某种特异功能的蛋白。 核酸：DNA和RNA 糖类 脂类 无机盐和微量元素生物显微技术染色和组织化学糖类显示最常用于显示细胞、组织内的多糖和蛋白多糖的方法是过碘酸-雪夫反应（periodic acid Schiff，PAS反应)。基本原理是：糖被强氧化剂过碘酸（HIO4)氧化后，形成2-醛基；后者与Schiff试剂中的无色品红亚硫酸复合物结合，形成紫红色反应产物,PAS反应阳性部位即表示多糖的存在。 生物显微技术染色和组织化学 脂类显示 脂类物质包括脂肪与类脂。标本可用甲醛固定、冷冻切片、用油红、苏丹、苏内、苏丹黑B、尼罗蓝等脂溶性染料染色；亦可用饿酸固定兼染色，脂类呈黑色。 生物显微技术染色和

6、组织化学核酸显示显示DNA的传统方法为Feulgen反应。切片先经稀盐酸处理后， 使细胞内DNA水解，打开DNA分子中胶氧核糖核酸和嘌呤碱之间的连接按键，使其释放出醛基，再用Schiff试剂处理，形成紫红色反应产物。如用甲基绿-派若宁反应，可同时显示细胞内的DNA和RNA甲基绿与细胞核中的DNA结合呈蓝绿色，派若宁与核仁及胞质内的RNA结合呈红色。 生物显微技术染色和组织化学分类v一般组织化学一般组织化学 它的基本原理是在组织切片上滴加一定试剂，使它与组织细胞内某种化学物质起反应，并在原位形成有色沉淀产物，通过观察该产物，可对某种化学物质进行定位、定性及定量的研究。 v荧光组织化学荧光组织化学

7、 它的基本原理是用荧光显微镜以短光波紫外线作光源，紫外线可激发标本内的荧光物质，使其呈现荧光图象，借以了解细胞组织中的不同化学成分的分布。 v免疫组织化学免疫组织化学 是近年来发展起来的新技术。它的基本原理是利用抗原与抗体特异性结合的特点，检测细胞中某种肽类及蛋白质等大分子物质的分布生物显微技术染色和组织化学生物显微技术染色和组织化学酶类的显色方法酶的分类 水解酶 氧化还原酶 转化酶 连接酶 裂解酶 异构酶生物显微技术染色和组织化学酶的组织化学反应 偶氮染料法 吲哚酚法 金属盐法 氧化-还原反应生物显微技术染色和组织化学生物显微技术染色和组织化学碱性磷酸酶钙-钴显示法原理：RPO3-ROH+H

8、3PO42H3PO4 +3Ca(NO3)2-Ca3(PO4)2 +6HNO3Ca3(PO4)2 + 3Co(NO3)2 - Co(PO4)2 + 3Ca(NO3)2Co(PO4)2 +3(NH4)2S-3CoS+2 (NH4)3 PO4生物显微技术染色和组织化学碱性磷酸酶作用液(pH93) 溶液1：2甘油磷酸纳 2巴比妥纳 2硝酸钙 2硫酸镁(或氯化镁) 蒸馏水 溶液2： 1硝酸钙。 溶液3： 1硝酸钻。 溶液4： 1硫化铵(临用时现配)生物显微技术染色和组织化学方法 切片脱蜡入水 入碱性磷酸酶作用液作用2h，但在切片入作用液前，应将作用液置37c温箱中30min(注意：对照片在作用液内免去甘油磷酸钠，或进作用液前，放在沸水中煮78min)。 过蒸馏水一次，浸入1的硝酸钙中2-3min。 过蒸馏水一次，浸入1的硝酸钴中2-3min。 蒸馏水洗1mm，人1硫化