实验九细胞组分分级分离

1、细胞组分的分级分离细胞组分的分级分离实验九实验九 通过细胞匀浆和离心的方法分级分离细胞通过细胞匀浆和离心的方法分级分离细胞的组分，了解其原理、过程及作用。的组分，了解其原理、过程及作用。 实验目的实验目的 细胞内不同结构的比重和大小都不同。细胞内不同结构的比重和大小都不同。在同一离心场内的沉降速度也不相同。根在同一离心场内的沉降速度也不相同。根据这一原理，用不同的转速的离心法，可据这一原理，用不同的转速的离心法，可将细胞内各种组分分级分离出来。将细胞内各种组分分级分离出来。 实验原理实验原理速度逐渐提高，样品按大小先后沉淀速度逐渐提高，样品按大小先后沉淀 实验内容实验内容 细胞核的分离提取细胞

2、核的分离提取 高速离心分离提取线粒体高速离心分离提取线粒体细胞核的分离提取步骤：细胞核的分离提取步骤： 1.椎脱臼法法处死小鼠，迅速开腹取肝脏，剪成小椎脱臼法法处死小鼠，迅速开腹取肝脏，剪成小块，置于盛有块，置于盛有0.9NaCl烧杯中，反复洗涤，除去烧杯中，反复洗涤，除去血污，用滤纸吸去表面的溶液。血污，用滤纸吸去表面的溶液。 2.将湿重约将湿重约1g的肝组织放在小平皿中，取的肝组织放在小平皿中，取8ml预冷预冷的的0.25mol/L蔗糖蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液，先加入氯化钙溶液，先加入少量该溶液于平皿中，尽量剪碎组织后，再全部少量该溶液于平皿中，尽量剪碎组织后，再全部加入。加入

3、。 3.将剪碎的肝组织倒入匀浆管中，使匀浆器下端浸将剪碎的肝组织倒入匀浆管中，使匀浆器下端浸入盛有冰块的器皿中，研磨入盛有冰块的器皿中，研磨35次，用次，用8层湿纱布层湿纱布过滤匀浆于离心管中。然后制备一张涂片，做过滤匀浆于离心管中。然后制备一张涂片，做好标记，自然干燥。好标记，自然干燥。 4.将装有滤液的离心管配平后，放入离心机，将装有滤液的离心管配平后，放入离心机，2500r/min离心离心15分钟；取上清液，移入高速离分钟；取上清液，移入高速离心管中，保存于有冰块的烧杯中，待分离线粒体心管中，保存于有冰块的烧杯中，待分离线粒体用用;同时涂一张上清液片做好标记，自然干燥；同时涂一张上清液片

4、做好标记，自然干燥；余下的沉淀物进行以下步骤。余下的沉淀物进行以下步骤。 5.用用6ml 0.25mol/L蔗糖蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液，氯化钙溶液，悬浮沉淀物，以悬浮沉淀物，以2500r/min离心离心15分钟弃上清，将分钟弃上清，将残留液体用吸管吹打成悬液，滴一滴于干净的载残留液体用吸管吹打成悬液，滴一滴于干净的载玻片上，涂片，自然干燥。玻片上，涂片，自然干燥。 6.将、涂片用将、涂片用1甲苯胺兰染色后盖上盖甲苯胺兰染色后盖上盖片即可观察。片即可观察。高速离心分离提取线粒体步骤：高速离心分离提取线粒体步骤：1. 将上述装有上清液的高速离心管，从装有冰块的烧杯中取将上述装有上清液

5、的高速离心管，从装有冰块的烧杯中取出，配平后，以出，配平后，以17000r/min离心离心20分钟，弃上清，留取沉分钟，弃上清，留取沉淀物。淀物。2.加入加入0.25mol/L蔗糖蔗糖-0.003mol/L 氯化钙液氯化钙液 1ml ， 用吸用吸管吹打成悬液，管吹打成悬液， 以以17000r/min离心离心20分钟。将上清吸入分钟。将上清吸入另一试管。留取沉淀物，加入另一试管。留取沉淀物，加入0.1ml 0.25mol/L蔗糖蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液混匀成悬液。氯化钙溶液混匀成悬液。3.取沉淀物上清液和悬液，分别滴一滴于干净的载玻片上（分取沉淀物上清液和悬液，分别滴一滴于干净的载玻片上（分别标记为、），涂片，各滴一滴别标记为、），涂片，各滴一滴0.02詹纳斯绿詹纳斯绿B染液，染液，盖上盖片染盖上盖片染20分钟。分钟。 4.油镜下观察，颗粒状的线粒体被詹纳斯绿油镜下观察，颗粒状的线粒体被詹纳斯绿B染成兰绿色。染成兰绿色。 1研磨时要在低温进行。研磨时要在低温进行。 2过滤前要先将纱布湿润。过滤前要先将纱布湿润。 3离心前要注意配平。离心前要注意配平。注意事项 1.简要说明分级分离细胞的原理及其意义。简要说明分级分离细胞的原理及其意义。 2.比较一下分离细胞核时涂片、比较