培养基配制及适用性检查操作规程

1、XXXXXXXX 有限公司质量控制管理制度标 题培养基配制及适用性检查的标准操作规程共4页 第1页文件号起草人起草日期部门审阅日 期QA审阅日期批准日 期生效日期颁发部门分发部门义更记录文件修订号义更版本艾更时间交更原因/1目的：建立培养基配制及适用性检查的标准操作规程，规范实验人员的操作流程。2范围：适用于微生物检验人员对培养基的规范管理。3依据：药品生产质量管理规范（2010年修订）、中华人民 共和国药典2015年版第四部。4职责：4.1 微生物检验员：负责实验室所需求的培养基管理工作，使日 常检验可以顺利进行。4.2 微生物检验主管：负责对日常配制培养基的规范操作进行监督。5内容5.1

2、培养基的申购：根据检验项目、工作量和工作进度的需求，提前一个月进行所需 的培养基申购。申购时需指定培养基供应商，必要时进行供应商审计。5.2 培养基的验收5.2.1 培养基到货后，微生物室检验员应进行验收。验收内容包括核对品名、数量、规格、生产厂商，应与申购单一致；检查培养基包装有无破损、包装是否完整、产品是否在有效期内。5.2.2 验收合格后，登记于 培养基领用台账（附记录文件编号：ZL-041 ）5.3 培养基的贮藏5.3.1 未开封的培养基贮存低温、干燥、和避光条件下。已开封的培养基应盖紧，贮存于阴凉处。5.3.2 灭菌后培养基储存期为7天。5.4 培养基的配制5.4.1 培养基的配制和

3、使用应填写培养基配制及使用记录（附记录文件编号：ZL-025） 。5.4.2 培养基配制方法5.4.2.1 使用商品化合成培养基时，应严格按照厂商提供的使用说明配制，如重量/体积、灭菌条件和操作步骤等。5.4.2.2 水、容器具要求：培养基配制均采用纯化水，培养基配制所用容器和配套器具应洁净。5.4.2.3 称量与分装：快速称量所需量的合成培养基（必要时佩戴口罩或在通风柜中操作，以防吸入含有有毒物质的培养基粉末）。以免吸潮。先加入适量的水，充分混合。注意避免培养基结块，然后加水至所需的量。根据说明书要求选择是否加热。分装体积不超过容器体积的2/3。 配制斜面等含琼脂的培养基也需加热煮沸至完全溶

4、解后分装。5.4.3 培养基灭菌培养基和试剂采用湿热灭菌法。湿热灭菌在高压灭菌锅中进行，灭菌条件为121c灭菌15 min。培养基严格按说明书条件进行灭菌。培养基灭菌后应立即取出，不得存放于高压灭菌器中。5.5 培养基的质量控制5.6 5.1计数培养基适用性检查5.5.1.1 菌种及菌液制备菌种： 试验用菌株的传代次数不得超过5 代 （从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代） ，并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验用菌株见表1。菌液制备：按表1 规定程序培养各试验菌株。取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰

5、酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆月东琼脂培养基中，30-35C培养1824小时，取上述培养物1ml加入9ml PH7.0无菌氯化钠-蛋白月东缓冲液中，制成10-1的菌液， 依法 10倍稀释至10-7， 分取各菌悬液1ml 注入平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100CFU/ml 的菌液备用；取白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基中，20-25培养23天。取上述培养物1ml加入9ml PH7.0无菌氯化钠-蛋白月东缓冲液中，制成10-1 的菌液，依法10 倍稀释至10-7，取菌悬液1ml 注入平皿中， 立即倾注沙氏葡萄

6、糖琼脂培养基，各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100CFU/ml 的菌液备用；取黑曲霉的 新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基， 经20-25 C培养57 天，加入35ml含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的PH7.0无菌氯化 钠 -蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。然后吸出孢子悬液至无菌试管内，取上述培养物1ml 加入 9ml PH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，制成 10-1 的菌液，依法10 倍稀释至10-7，分取各菌悬液1ml 注入平皿中， 立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100CFU/ml 的菌液备用。菌液制备后若在

7、室温下放置，应在2 小时内使用；若保存在2? 8， 可在 24 小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2? 8 ,在验证过的贮存期内使用。5.5.1.2 阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。如阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。5.5.1.3 培养基适用性检查微生物计数用的成品培养基应进行培养基适用性检查。按表 1 规定，接种不大于l00cfu 的菌液至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板或沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，置表 1 规定条件下培养。每一试验菌株平行制备2 管。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。被检固体培养基上的菌落平

8、均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5? 2 范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。表1试验菌液的制备和使用试验菌株试验菌液的制备计数培养基适用性检查计数方法适用性试验需氧菌总数计数霉菌和酵母菌 总数计数需氧菌总数计数霉菌和酵母菌 总数计数金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)CMCC(B ) 26003胰酪大豆月东琼脂 培养基或胰酪大 豆月东液体培养基培养温度30? 35 C，培养时间1 8? 24小时胰酪大豆月东琼脂培 养基和胰酪大豆月东温度30?35C,培 养时间不超过3 天，接种量不大100

9、cfu胰酪大豆月东琼脂培养 基或胰酪大豆月东液体 培养基（MPNO ,培 养温度30? 35 C ,培 养时间不超过3天， 接种重不大丁 l00cfu铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa) CMCC(B)10104胰酪大豆月东琼脂 培养基或胰酪大 豆月东液体培养 基，培养温度30 ? 35 C,培养时 间1 8? 24小时胰酪大豆月东琼 脂培养基和胰酪 大豆月东液体培养 基，培养温度30 ? 3 5 ,培养时 间/、超过3天，接 种量不大于l00cfu胰酪大豆月东琼脂培养 基或胰酪大豆月东液体 培养基（MPN法）， 培养温度30? 35 , 培养时间不超过3天， 接种重

10、不大丁 l00cfu枯草芽抱杆菌Bacillus subtilis)CMCC(B)63501胰酪大豆月东琼脂 培养基或胰酪大 豆月东液体培养 基，培养温度30 ? 35 C,培养时 间18 -24小时胰酪大豆月东琼脂 培养基和胰酪大 豆月东液体培养基， 培养温度30-35 ,培养时 间/、超过3天,接 种量不大于100cfu胰酪大豆月东琼脂培养 基或胰酪大豆月东液体 培养基（MPN!）,培 养温度30? 35 C,培 养时间不超过3天，接 种量不大l00cfu白色念珠菌(Candida albicans)CMCC(F)98001沙氏葡萄糖琼脂 培养基或沙氏葡 萄糖液体培养 基，培养温度20 ?

11、 25 C,培养时 间2 ? 3天胰酪大豆月东琼脂 培乔基,培养温度 30? 35 C,培养时 间/、超过5天,接 种量不大于 l00cfu沙氏葡萄糖琼 脂培养基，培 养温度20?25 C,培养时 间/、超过5天, 接种量不大于 l00cfu胰酪大豆月东琼脂培养 基（MPN法不适用）， 培养温度30? 35 , 培养时间不超过5天， 接种重不大丁 100cfu沙氏葡萄糖琼 脂培养基，培 养温度2.0 ?25 C,培养时 间田超过5天, 接种量不大于 l00cfu黑曲霉(Aspergilla sniger )CMCQF) 98003沙氏葡萄糖琼脂培养基或马铃 薯葡萄糖琼脂培 养基，培养温度20? 25 C,届 时间5? 7天，或 直到获得丰富的胰酪大豆月东琼脂 培乔基,培养温度 30? 35 C,届 时间不超过5天， 接种量不大于 lOOcfu沙氏葡萄糖琼 脂培养基，培 养温度20?25 C,培养时 间