组织分布研究实例ppt课件

1、组织分布组织分布的研讨内容一.研讨组织分布的意义二.组织分布的研讨方法三.研讨实例四.改动药物组织分布的方法一一. .为什么要进展药物组织分布研讨？为什么要进展药物组织分布研讨？ 1.药物在组织中的浓度与药理效应直接相关：药理效应取决于靶器官的浓度，药物的组织分布与药理效应的产生更加亲密。 2.药物在血液的浓度与药理效应间接相关：普通以为，当药物在体内到达稳定形状时，血浆中药物浓度与药物在作用点的浓度严密相关，即血浆中的药物浓度反映了药物在体内靶器官的情况，因而血浆浓度可作为作用部位药物浓度的可靠目的。 3.普通而言，检测药物在血液中的浓度比检测药物在组织中的浓度要简单，所以普通采用血药浓度替

2、代组织浓度。 4.当药物在组织中的分布极不均匀时，检测药物在组织中的浓度更加合理、科学。 5.组织分布研讨可使药物提高疗效、降低毒性、指点制剂设计。二. 实验方法一根本要求二分析方法的验证一根本要求 1. 动物的选择动物的选择 小鼠小鼠 大鼠大鼠 注：药动学研讨的动物选择：与药效一致注：药动学研讨的动物选择：与药效一致 2.给药剂量 选择一个剂量普通以有效剂量为宜给药 留意：药动学研讨需高、中、低三个剂量 3.时间点的选择时间点的选择 1)至少吸收相、分布相和消除相各取一个点至少吸收相、分布相和消除相各取一个点 2)上升相、下降相上升相、下降相 3)静脉注射静脉注射 留意：每个时间点至少应有留

3、意：每个时间点至少应有5只动物的数据只动物的数据 。 4.检测样品的选择检测样品的选择 1心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉 2子宫或睾丸子宫或睾丸 3效应靶器官、毒性靶器官。效应靶器官、毒性靶器官。 5.样品的前处置 取样：各组织器官用滤纸吸干残留血，生理氯化钠溶液充分冲洗，用滤纸吸干，称重，分别取各组织1g缺乏1g，取全量，加四倍量的生理盐水匀浆。 前处置：去除蛋白质；可使结合型的药物释放出来，以便测定药物的总浓度；其方法有有机溶剂 、盐析、加酸等。二分析方法的验证 生物样品的特点： 1取样量少 2药物浓度低 3内源性物质干扰 4个体差别大根本参数生物样品分析方法的根

4、本参数包括：1.准确度2.精细度3.特异性4.灵敏度5.重现性6.稳定性1.特异性 特异性：分析方法丈量和区分共存组分中分析物的才干。这些共存组分能够包括代谢物、杂质、分解产物、介质组分等。内源性物质和其他代谢物不得干扰样品的测定。实验报告(论文)中应提供: 1被实验药物规范样品的色谱图 2正常生物样品空白匀浆液的色谱图 3空白生物样品匀浆液外加被试药物的色谱图 4给药后的生物样品的色谱图2.规范曲线与定量范围 规范曲线：实验呼应值与分析物浓度间的关系。根据所测定物质的浓度与呼应的相关性，用回归分析方法如用加权最小二乘法获得规范曲线。规范曲线高低浓度范围为定量范围，在定量范围内浓度测定结果应到

5、达实验要求的精细度和准确度。 用至少5个浓度建立规范曲线，应运用与待测样品一样的生物介质，定量范围要能覆盖全部待测浓度，不允许将定量范围外推求算未知样品的浓度。建立规范曲线时应随行空白生物样品，但计算时不包括该点。 检测限 定量限 3. 精细度 要求选择3个浓度的质控样品同时进展方法的精细度和准确度调查。低浓度选择在定量下限附近，其浓度在定量下限的3倍以内；高浓度接近于规范曲线的上限；中间选一个浓度。每一浓度每批至少测定5个样品，为获得批间精细度，应至少延续3个分析批合格。 精细度用质控样品的批内天内和批间 天内 相对规范差RSD表示，相对规范差普通应小于15%，在定量下限附近相对规范差应小于

6、20%。 分析批：包括待测样品、适当数目的规范样品和质控样品的完好系列。一天内可以完成几个分析批，一个分析批也可以继续几天完成。 质控样品：即QC样品，系指在生物介质中参与知量分析物配制的样品，用于监测生物分析方法的反复性和评价每一分析批中未知样品分析结果的完好性和正确性。 规范样品：在生物介质中参与知量分析物配制的样品，用于建立规范曲线，计算质控样品和未知样品中分析物浓度。 4. 准确度方法回收率 准确度：在确定的分析条件下，测得值与真实值的接近程度。 准确度普通应在85%115%范围内，在定量下限附近应在80%120%范围内。5. 定量下限 定量下限是规范曲线上的最低浓度点，要求至少能满足

7、测定35个半衰期时样品中的药物浓度，或Cmax的1/101/20时的药物浓度，其准确度应在真实浓度的80%120%范围内，RSD应小于20%。应由至少5个规范样品测试结果证明6. 样品稳定性 目的：确定生物样品的存放条件和时间。方法： 1生物样品在处置前,室温、4放置放置的稳定性。 2生物样品经处置后,待测样品放置一定时间的稳定性 3多次冻-融的稳定性：用来调查生物样品经较长时间的低温存放的稳定性,以确定质控样品能否长期存放。7. 提取回收率 定义：分析过程的提取效率，以样品提取和处置过程前后分析物含量百分比表示。 方法： 高、中、低3个浓度 有机溶剂的规范品峰面积与空白生物介质经提取后的峰面

8、积之比。小结 1.准确度：在确定的分析条件下，测得值与真实值的接近程度。 2.精细度：在确定的分析条件下，一样介质中一样浓度样品的一系列丈量值的分散程度。 3.特异性：分析方法丈量和区分共存组分中分析物的才干。这些共存组分能够包括代谢物、杂质、分解产物、介质组分等。 4.灵敏度：生物样品分析方法的灵敏度经过规范曲线来表征，主要包括定量下限和浓度-呼应函数。 5.重现性：不同实验室间测定结果的分散程度，以及一样条件下分析方法在间隔一段短时间后测定结果的分散程度。 6.稳定性：一种分析物在确定条件下，一定时间内在给定介质中的化学稳定性。 7.规范曲线：实验呼应值与分析物浓度间的关系。应采用适当的加

9、权和统计检验，用简单的数学模型来最适当地描画。规范曲线应是延续的和可重现的，应以回归计算结果的百分偏向最小为根底。 8.提取回收率：分析过程的提取效率，以样品提取和处置过程前后分析物含量百分比表示。 9.定量范围：包括定量上限ULOQ和定量下限LLOQ的浓度范围， 在此范围内采用浓度-呼应关系能进展可靠的、可反复的定量，其准确度和精细度可以接受。 10.生物介质：一种生物来源物质，可以以可反复的方式采集和处置。例如全血、血浆、血清、尿、粪、各种组织等。 11.介质效应：由于样品中存在干扰物质，对呼应呵斥的直接或间接的影响。 12.分析批：包括待测样品、适当数目的规范样品和质控样品的完好系列。一

10、天内可以完成几个分析批，一个分析批也可以继续几天完成。 13.规范样品：在生物介质中参与知量分析物配制的样品，用于建立规范曲线，计算质控样品和未知样品中分析物浓度。 14.质控样品：即QC样品，系指在生物介质中参与知量分析物配制的样品，用于监测生物分析方法的反复性和评价每一分析批中未知样品分析结果的完好性和正确性。 实例1：贝母素甲组织分布研讨1.组织样品的制备空白大鼠拉颈处死后摘取其心、肝、脾、肺、肾、脑、睾丸、子宫、卵巢，脂肪，肌肉，皮肤，取样部位尽量一致，各组织器官用滤纸吸干残留血，用生理氯化钠溶液充分冲洗，用滤纸吸干，称重，分别取各组织1g缺乏1g，取全量，加四倍量的生理盐水匀浆。取匀

11、浆液0.7ml，加6ml生理盐水稀释，取稀释液0.5ml进展样品处置：分别加50ul甲醇和卡马西平内标(2ug/ml)50ul，涡旋混合1min,参与氨水50ul，涡旋振荡2min，参与乙酸乙酯2ml，涡旋振荡5min，4000r/min离心10min，取上清液，于40水浴下用氮气吹干，残渣用200l乙腈-甲酸铵水35：65振荡溶解， 0.22um微孔滤膜过滤后，取10l进样。 2.方法学调查 2.1专属性调查 取空白的组织匀浆液0.5ml以脾脏为例，除不参与内标外，其他均按样品处置方法处置，获得空白样品色谱图.参与50ul对照品，除不参与甲醇外，其他均按样品处置方法处置，获得规范品色谱图.取

12、给药后的大鼠组织样品，按样品处置方法处置后，得样品色谱图。 2.2 规范曲线和线性范围 取空白组织匀浆液0.1ml，参与贝母素甲的系列规范溶液0.01ml和内标溶液0.01ml，涡旋混合1min即得组织浓度分别为1, 2.5, 5, 25, 50, 100, 250 , 500 ngmL-1的组织规范溶液，除不加0.01ml甲醇外，建立规范曲线。以待测物浓度为横坐标，待测物与内标物的峰面积比值为纵坐标，进展线性回归运算，求得的直线回归方程。 2.3 方法的精细度和准确度调查 取空白组织匀浆液0.1ml，按“规范曲线和线性范围项下的方法制备贝母素甲低、中、高三个浓度的质量控制QC样品，每一浓度进

13、展6样本分析，延续测定三天，并与规范曲线同时进展，计算QC样品测得的浓度，与配制浓度对照，求算方法的准确度和精细度， 2.4 提取回收率调查 取空白组织匀浆液0.1ml，按“规范曲线和线性范围项下的方法制备3种药物低、中、高三个浓度的质量控制QC样品，将样品的峰面积与未经处置的规范溶液峰面积进展比较以调查样品及内标的提取回收率。 2.5 样品稳定性调查 取空白组织匀浆液0.1ml，分别将样品室温放置6h，-20放置14d,-20冷冻-室温融化循环3次后，除不加0.01ml甲醇外，按照“血浆样品预处置项下操作，测得的药物浓度与新配制的QC样品进展比较。提取物组织分布图例 提取物灌胃给药后贝母素甲

14、雌雄大鼠体内分布图雌性雄性卵巢子宫 取样点时间的选择？单体与提取物分布研讨 贝母素甲单体灌胃后在大鼠体内的组织分布存在明显的性别差别，雄性组织中的贝母素甲含量明显高于雌性，雌性大鼠体内的主要分布在雌性的性器官。 意义：剂量确定时应该思索性别差别。实例实例2.2.麦冬多糖麦冬多糖MDG-1MDG-1静注给药后静注给药后各组织分布研讨各组织分布研讨 研讨思绪研讨思绪MDG-1抗心肌缺血抗心肌缺血作用研讨作用研讨 整体实验整体实验口服有效口服有效口服吸收机制研讨口服吸收机制研讨,如何促进口服吸收如何促进口服吸收?抗心肌缺血机理抗心肌缺血机理能否与心肌细胞能否与心肌细胞维护有关维护有关?细胞药效细胞药

15、效静注有效静注有效体内药动学特征体内药动学特征?心脏等组织分布如何心脏等组织分布如何? 从分布讨论抗心肌缺血机理从分布讨论抗心肌缺血机理须建立灵敏度更高须建立灵敏度更高的分析方法的分析方法如何满足如何满足分析要求分析要求? 一正常动物静注给药后各组织分布研讨1.组织样品高效凝胶色谱分析方法的建立略2.大鼠体内各组织中MDG-1浓度的测定 取样点时间的选择？数据处置数据处置 根据MDG-1静注后各组织的浓度绘制浓度-时间曲 线，梯形法计算各组织中药物的AUC。 组织组织 心心 肝肝 脾脾 肺肺 胃胃 肾肾 脑脑 AUC AUC (ug(ugh/ml) 3.270 2.031 2.303 6.17

16、8 4.963 214.571 0.163 h/ml) 3.270 2.031 2.303 6.178 4.963 214.571 0.163 大鼠各组织大鼠各组织50 mg/kg50 mg/kg静注后静注后AUCAUC值值小结：组织分布数据处置方法1.直观比较各取样点药物含量的差别2.AUC 结结 果果MDG-1MDG-1静脉注射后，大多数容易聚集在肾脏，并以尿的方式静脉注射后，大多数容易聚集在肾脏，并以尿的方式排泄。排泄。根据各组织根据各组织AUCAUC值，其他组织中含药量分布顺序从高到低依值，其他组织中含药量分布顺序从高到低依此为：肺，胃，心，脾，肝，脑，心脏对多糖此为：肺，胃，心，脾，

17、肝，脑，心脏对多糖MDG-1MDG-1表现表现出有一定的摄取才干。出有一定的摄取才干。二二MDG-1MDG-1在生理组和心肌缺血组模型在生理组和心肌缺血组模型组的心脏分布比较组的心脏分布比较1.1.心肌缺血模型的制备略心肌缺血模型的制备略2.2.组织分布比较研讨组织分布比较研讨 * * * 图 正常组与心肌缺血组多糖分布比较 * P0.05,* P0.01,心肌缺血组与正常组比较 心肌缺血组各个时间点多糖分布情况，除30min时间点外，其他各时间点均比正常组的分布明显增多，且经统计有显著性差别 本课题意义本课题意义 1. 1.正常动物组织分布实验：正常动物组织分布实验：1 1 MDG-1 MD

18、G-1静注后，大多数在肾脏分布，排泄快静注后，大多数在肾脏分布，排泄快：MDG-1MDG-1的峰尖分子量分布分子量约的峰尖分子量分布分子量约50005000；粒径；粒径2.0nm2.0nm；低于肾小球的截留值。；低于肾小球的截留值。2 2提示对提示对MDG-1MDG-1进展构造修饰，如进展构造修饰，如PEGPEG化，添加化，添加其其分子量使肾去除减少，那么多糖可更多地在系统循分子量使肾去除减少，那么多糖可更多地在系统循环环，更好起效。，更好起效。 结合前期麦冬多糖的离体药效结合前期麦冬多糖的离体药效实验、心肌细胞药效实验均实验、心肌细胞药效实验均阐明其具有显著抗心肌缺血阐明其具有显著抗心肌缺血

19、的结论以及从药动学组织分的结论以及从药动学组织分布整体性研讨得出的麦冬多布整体性研讨得出的麦冬多糖在正常与缺血大鼠的组织糖在正常与缺血大鼠的组织分布特点，那么可推论麦冬分布特点，那么可推论麦冬多糖多糖MDG-1MDG-1有效抗心肌缺血有效抗心肌缺血的能够机理是麦冬多糖直接的能够机理是麦冬多糖直接作用于靶器官的病变部位起作用于靶器官的病变部位起效。效。 2. 2.模型动物：从药动学组织分布整体性研模型动物：从药动学组织分布整体性研讨得出的麦冬多糖在正常与缺血大鼠的组讨得出的麦冬多糖在正常与缺血大鼠的组织分布特点，那么可推论麦冬多糖织分布特点，那么可推论麦冬多糖MDG-1MDG-1有有效抗心肌缺血的能够机理是麦冬多糖直接效抗心肌缺血的能够机理是麦冬多糖直接作用于靶器官的病变部位起效。作用于靶器官的病变部位起效。 四.改动药物组织分布的药剂学方法实验：异长春花碱脂质体的制备及其在小鼠体内的组织分布 背景