药物分析第六章

1、School of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysisSchool of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis典型药物的结构与性质典型药物的结构与性质 鉴别试验鉴别试验特殊杂质及其检查法特殊杂质及其检查法含量测定含量测定4123体内药物分析体内药物分析5School of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis熟悉熟悉: : 主要芳酸类非甾体抗炎药物杂质的结

2、构,危害,检查方法与限度 了解了解: : 影响芳酸类非甾体抗炎药物稳定性的主要因素,体内样品与临床监测 掌握掌握: : 芳酸类非甾体抗炎药的结构和性质 主要芳酸类药物的鉴别,检查和含量测定的原理与特点 School of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis概述结构特点结构特点药物特点药物特点理化特性理化特性分析方法分析方法作用作用临床临床基本基本结构结构基本基本性质性质鉴别鉴别,检查检查含量测定含量测定;体内分析体内分析l抗炎抗炎, 抗风湿抗风湿, 止痛止痛, 退热退热 l关节炎关节炎, 发热发热, 慢性疼痛慢性

3、疼痛l芳基取代羧酸芳基取代羧酸l游离羧基和苯环游离羧基和苯环l酸性酸性; 水解性水解性; 光谱特性光谱特性l基团基团(酚酚)/元素元素 (硫硫)特性特性lFe3+; UV, IR, LCl中间体或水解产物中间体或水解产物l酸碱滴定酸碱滴定; UV; HPLCl体内过程与分析体内过程与分析COOR1RRn RSchool of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis一、典型药物与结构特点一、典型药物与结构特点 羧基状态 游离游离: 水杨酸水杨酸,阿司匹林阿司匹林,双水杨酯双水杨酯,二氟尼柳二氟尼柳,甲芬那酸甲芬那酸,布

4、洛芬布洛芬,酮洛芬酮洛芬,萘普生萘普生,吲哚美辛吲哚美辛盐盐/酯酯:双氯芬酸钠双氯芬酸钠,双水杨酯双水杨酯酰胺酰胺: 吡罗昔康吡罗昔康,美洛昔康美洛昔康 OHOHOCH3OOHOOOOHOOOHFOHOHOF 水杨酸水杨酸 阿司匹林阿司匹林 双水杨酯双水杨酯 二氟尼柳二氟尼柳COOR1RRn RSchool of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis二、主要理化性质 (一) 酸性l较强酸性较强酸性: 原料药可在中性乙醇或甲醇原料药可在中性乙醇或甲醇,丙酮等丙酮等水溶性有机溶剂中水溶性有机溶剂中,用氢氧化钠直接滴定用

5、氢氧化钠直接滴定l双氯芬酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,吲哚美辛: 羧基不与苯环直接相连羧基不与苯环直接相连, 酸性较弱酸性较弱l吡罗昔康,美洛昔康,尼美舒利,对乙酰氨基酚:酰胺结构酰胺结构, 无明显酸性无明显酸性 pKa = 3.49 2.95 4.26OHOHOCH3OOHOOOHOSchool of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis(二) 水解性l酯键酯键:阿司匹林阿司匹林/双水杨酯双水杨酯l酰胺键酰胺键:吲哚美辛吲哚美辛,吡罗昔康吡罗昔康,美洛昔康美洛昔康,尼美舒利尼美舒利,对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚l水解反

6、应及其产物的特性反应水解反应及其产物的特性反应鉴别鉴别l水解可快速水解可快速,定量定量含量测定含量测定(剩余碱量法剩余碱量法)l美洛昔康 定过量的氢氧化钠水解定过量的氢氧化钠水解 剩余的氢氧化钠用盐酸回滴定剩余的氢氧化钠用盐酸回滴定美洛昔康SNNHOHCH3OOOSNCH3School of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis(三) 吸收光谱特性l紫外特征光谱紫外特征光谱 : 鉴别鉴别;含量均匀度含量均匀度,溶出度溶出度/释放度释放度l红外特征光谱红外特征光谱 : 鉴别鉴别酮洛芬l酚羟基酚羟基:对乙酰氨基酚对乙酰

7、氨基酚,水杨酸与水杨酸与Fe3+显色显色鉴别鉴别 l二苯甲酮二苯甲酮:酮洛芬与苯肼缩合显色酮洛芬与苯肼缩合显色鉴别鉴别 l硫硫:美洛昔康热分解后产生的硫化氢美洛昔康热分解后产生的硫化氢与醋酸铅生成黑色硫化铅与醋酸铅生成黑色硫化铅鉴别鉴别(四) 基团/元素特性CH3OOHOSchool of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis第二节 鉴别试验一、与三氯化铁反应一、与三氯化铁反应二、缩合反应二、缩合反应三、重氮化三、重氮化-偶合反应偶合反应四、氧化反应四、氧化反应五、水解反应五、水解反应六、特征元素反应六、特征元素反

8、应七、光谱法七、光谱法八、色谱法八、色谱法School of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysisn 中性或弱酸性中性或弱酸性(pH值值46)条件下进行条件下进行, 强酸性强酸性溶液中配位化合物分解溶液中配位化合物分解l阿司匹林阿司匹林 加水煮沸加水煮沸l双水杨酯双水杨酯 在氢氧化钠试液中煮沸在氢氧化钠试液中煮沸p水解生成水杨酸水解生成水杨酸, 与三氯化铁试液显紫堇色与三氯化铁试液显紫堇色n二氟尼柳二氟尼柳 于乙醇中与三氯化铁试液呈深紫色于乙醇中与三氯化铁试液呈深紫色 +FeCl3OOHOH+FeOOOOHH2O+

9、3HCl一、与三氯化铁反应一、与三氯化铁反应School of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysisn对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚:水溶液加三氯化铁试液显蓝紫色水溶液加三氯化铁试液显蓝紫色n吡罗昔康吡罗昔康(三氯甲烷三氯甲烷): 与三氯化铁显玫瑰红色与三氯化铁显玫瑰红色n美洛昔康显淡紫红色美洛昔康显淡紫红色 l烯醇式羟基具有酚羟基性质烯醇式羟基具有酚羟基性质,与与FeCl3生成红色配位生成红色配位化合物化合物3NHCOCH3OH+ FeCl3NHCOCH3O-3Fe + 3HClSchool of Pharmacy J

10、iamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis二、缩合反应n 酮洛芬的二苯甲酮酮洛芬的二苯甲酮, 在酸性下与二硝基苯肼缩在酸性下与二硝基苯肼缩合生成橙色偶氮化合物沉淀合生成橙色偶氮化合物沉淀CH3OOHONH-NH2NO2NO2NHO2NNO2CH3OOHN+H2SO4-H2OSchool of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis三、重氮化-偶合反应NHCOCH3 + HCl + H2OHOHONH2HCl + CH3COOHHONH2HCl +HNO2HON2+

11、Cl- + 2H2OHON2+Cl- +OH+ NaOHNNOHOH+ NaCl + H2OSchool of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis四、氧化反应l 甲芬那酸甲芬那酸: 溶于硫酸溶于硫酸, 被重铬酸钾氧化显深蓝被重铬酸钾氧化显深蓝色色随即变为棕绿色随即变为棕绿色l 吲哚美辛吲哚美辛: 溶液在硫酸酸性下与重铬酸钾溶液溶液在硫酸酸性下与重铬酸钾溶液共热共热, 被氧化显紫色被氧化显紫色l在盐酸溶液中与亚硝酸钠溶液反应显绿色在盐酸溶液中与亚硝酸钠溶液反应显绿色, 放置后放置后渐变黄色渐变黄色 School o

12、f Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis五、水解反应l 阿司匹林阿司匹林, 水解得水杨酸钠与醋酸钠水解得水杨酸钠与醋酸钠, 酸化生酸化生成水杨酸白色沉淀成水杨酸白色沉淀; 并发生醋酸的臭气并发生醋酸的臭气l 双水杨酯水解后酸化双水杨酯水解后酸化, 生成白色水杨酸沉淀生成白色水杨酸沉淀;COOHOCOCH3COONaOH+ Na2CO3+ CH3COONa + CO2COOHOHCOONaOH2+ H2SO42+ Na2SO42 CH3COONa + H2SO4 2 CH3COOH +Na2SO4School of

13、Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis六、特征元素的反应l 氯的鉴别氯的鉴别与碱共热分解产生氯化物与碱共热分解产生氯化物, 显氯显氯化物的鉴别反应化物的鉴别反应u双氯芬酸钠双氯芬酸钠: 与碳酸钠炽灼灰化与碳酸钠炽灼灰化, 加水煮沸加水煮沸, 滤过滤过, 滤液显氯化物鉴别反应滤液显氯化物鉴别反应 l 硫的鉴别硫的鉴别经高温分解产生硫化氢气体经高温分解产生硫化氢气体, 遇遇醋酸铅生成硫化铅黑色沉淀醋酸铅生成硫化铅黑色沉淀u美洛昔康美洛昔康: 试管中炽灼试管中炽灼, 产生的气体使湿润的醋酸产生的气体使湿润的醋酸铅试纸显黑色

14、铅试纸显黑色School of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis七、光谱法(一一) 紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法1.最大吸收波长法最大吸收波长法: 双氯芬酸钠溶液双氯芬酸钠溶液: 276nm有最大吸收有最大吸收吡罗昔康片吡罗昔康片,含量测定溶液含量测定溶液: 243与与334nm最大吸收最大吸收2.最大与最小吸收波长法最大与最小吸收波长法: 布洛芬及制剂氢氧化钠溶液布洛芬及制剂氢氧化钠溶液: 265,273nm最大吸收最大吸收245,271nm最小吸收最小吸收259nm肩峰肩峰 School of P

15、harmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis(一一) 紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法3.吸光度法吸光度法: 甲芬那酸盐酸甲芬那酸盐酸-甲醇溶液甲醇溶液: 279与与350nm最大吸收最大吸收吸光度吸光度(20g/ml)分别分别:0.690.74与与0.560.604.吸光度比值法吸光度比值法: 二氟尼柳盐酸二氟尼柳盐酸-乙醇溶液乙醇溶液: 251与与315nm最大吸收最大吸收吸光度比值应为吸光度比值应为4.24.6 School of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharma

16、ceutical analysis(二二) 红外分光光度法红外分光光度法阿司匹林阿司匹林 峰位峰位(cm-1)归属归属33002300vO-H(羧基羧基)1760, 1690vC=O(羧酸酯和羧酸羧酸酯和羧酸)1610, 1570, 1480, 1460vC=C(苯环苯环)1310, 1230, 1180vC-O(羧酸酯和羧酸羧酸酯和羧酸)775Ar-H(邻位取代苯环邻位取代苯环)330023001760,169016101460chool of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis八、色

17、谱法(一一) 薄层色谱法薄层色谱法个别药物制剂采用溶剂提取法去除辅料后个别药物制剂采用溶剂提取法去除辅料后IR鉴别鉴别;部分药物制剂采用部分药物制剂采用TLC鉴别鉴别: 二氟尼柳二氟尼柳, 美洛昔康等美洛昔康等 (二二) 高效液相色谱法高效液相色谱法随着随着HPLC在药物制剂含量测定中的大量应用在药物制剂含量测定中的大量应用, 更多更多应用应用HPLC进行制剂的鉴别进行制剂的鉴别:阿司匹林等多种制剂均直接取含量测定项下记录的阿司匹林等多种制剂均直接取含量测定项下记录的HPLC色谱图进行鉴别色谱图进行鉴别 School of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of

18、Pharmaceutical analysis药物名称药物名称特殊杂质特殊杂质游离水杨酸与有关物质游离水杨酸与有关物质/FeCl3阿司匹林/双水杨酯甲芬那酸二氟尼柳第三节 特殊杂质及其检查法2.3-二甲基苯胺有关物质 6-甲氧基-2-萘乙酮 氨基酚和对氯苯乙酰胺A.TLC; B.HPLCGC萘普生对乙酰氨基酚School of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis一、阿司匹林与双水杨酯(一一) 阿司匹林阿司匹林与与双水杨酯的合成双水杨酯的合成ONaONaCOOHH+OHCOOHOHCOOH(CH3CO)2OOCOC

19、H3COOHOHHOOCOCOOHOOHCO2CH3COOHHOHSchool of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis(二二) 阿司匹林中游离水杨酸与有关物质阿司匹林中游离水杨酸与有关物质COOHOHOOCOOHOHHOCOOHOOHOOHCOOHOOCOOHHOOCOOHOCOOH+HO-OO+COOHOCOOH或1. 游离水杨酸游离水杨酸: 酚羟基易被空气酚羟基易被空气(氧氧)逐渐氧化逐渐氧化生成淡黄生成淡黄,红红棕至深棕色棕至深棕色醌型化合物醌型化合物School of Pharmacy Jiamusi

20、UniversityRoom of Pharmaceutical analysis1. 游离水杨酸游离水杨酸:l ChP 用水杨酸与用水杨酸与 Fe3+ 生成紫堇色配离子的生成紫堇色配离子的原理原理, 用稀硫酸铁铵溶液显色法检查用稀硫酸铁铵溶液显色法检查p 供试品溶液制备过程中阿司匹林水解供试品溶液制备过程中阿司匹林水解l ChP2010采用采用1%冰醋酸甲醇溶液制备供试冰醋酸甲醇溶液制备供试品溶液品溶液(防阿司匹林水解防阿司匹林水解); 并用并用RP-HPLC检查检查 School of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical an

21、alysis2. 有关物质有关物质:l阿司匹林中阿司匹林中“有关物质有关物质”系指除系指除“游离水杨游离水杨酸酸”外的合成原料外的合成原料(苯酚苯酚)及副产物及副产物OHOHCOOHCOOOHCOOOCOCH3OHCOCOOHOCOOCOCH3COOHOCOOOHOHCOCOOOCOCH3OCOCH3COOCOCH3OHOHCOOHOHCOOH(CH3CO)2O(CH3CO)2O醋酸苯酯水杨酸苯酯乙酰水杨酸苯酯水杨酰水杨酸乙酰水杨酰水杨酸水杨酸酐(CH3CO)2O乙酰水杨酸酐(CH3CO)2O苯酚水杨酸CO2School of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom o

22、f Pharmaceutical analysis阿司匹林阿司匹林 水杨酸水杨酸 乙酰水杨酰水杨酸乙酰水杨酰水杨酸a:阿司匹林供试品阿司匹林供试品(10mg/ml)；b:0.5%自身对照自身对照(50 g/ml)；c: 0.05%自身对照自身对照(灵敏度试验灵敏度试验5 g/ml)；d:水杨酸对照水杨酸对照(10 g/ml)；e:空白空白School of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis(三三) 双水杨酯双水杨酯中游离水杨酸中游离水杨酸利用水杨酸与三价铁生成有色配离子的原理利用水杨酸与三价铁生成有色配离子的原

23、理, 用硝酸铁溶液显色用硝酸铁溶液显色, 在在530nm的波长处测定的波长处测定吸光度吸光度, 限度为限度为0.5%; 双水杨酯片同法检查双水杨酯片同法检查, 限度为限度为1.5% School of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis二、萘普生 (一一) 合成工艺合成工艺 原料原料(I) : 2-萘甲醚萘甲醚中间体中间体(II): 6-甲氧基甲氧基-2-乙酰萘乙酰萘(6-甲氧基甲氧基-2-萘乙酮萘乙酮)中间体中间体(III): 2-羟基羟基-2-(6-甲氧基甲氧基-2-萘基萘基)丙酸丙酸产品产品(IV): 萘普

24、生萘普生 MeOMeOCH3OMeOCH3OHCOOHMeOCH3COOH酰化羧化催化氢化School of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis(二二) 6-甲氧基甲氧基-2-萘乙酮及其它有关物质萘乙酮及其它有关物质1. 溶液制备溶液制备l 供试品溶液供试品溶液: 0.5mg/ml流动相溶液流动相溶液l 对照品溶液对照品溶液: 6-甲氧基甲氧基-2-萘乙酮萘乙酮(杂质杂质I), 50g/mll 对照溶液对照溶液: 供试品溶液供试品溶液1ml + 对照品溶液对照品溶液2ml200ml2. 限度限度 n 杂质杂质I:

25、 不得大于杂质不得大于杂质I峰面积峰面积(0.1%) n 其他单个杂质其他单个杂质: 不得大于杂质不得大于杂质I峰面积的峰面积的2倍倍(0.2%)n 各杂质总量各杂质总量: 不得大于对照溶液中萘普生峰面积不得大于对照溶液中萘普生峰面积(0.5%) School of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis第四节 含量测定一、酸碱滴定法一、酸碱滴定法二、紫外二、紫外-可见分光光度法可见分光光度法三、高效液相色谱法三、高效液相色谱法School of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of

26、Pharmaceutical analysis一、酸碱滴定法酸碱酸碱滴定法滴定法水解后剩余量滴定法阿司匹林阿司匹林 USP, BP, JP非水溶液滴定法吡罗昔康吡罗昔康具有吡啶环具有吡啶环, 显碱性显碱性, 可在冰醋酸溶液中用可在冰醋酸溶液中用高氯酸滴定液滴定高氯酸滴定液滴定 剩余量滴定法美洛昔康美洛昔康水及与水混溶的有机溶水及与水混溶的有机溶剂中难溶剂中难溶,溶于氢氧化溶于氢氧化钠滴定液后盐酸回滴定钠滴定液后盐酸回滴定 直接滴定法水杨酸水杨酸,阿司匹林阿司匹林,双水双水杨酯杨酯,二氟尼柳二氟尼柳,甲芬那甲芬那酸酸,布洛芬布洛芬,酮洛芬酮洛芬,萘普萘普生生,尼美舒利尼美舒利School of

27、Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis(一一) 直接滴定法直接滴定法1. 测定法测定法本品约本品约0.4g, 精密称定精密称定, 加中性乙醇加中性乙醇(对酚酞指示液显中对酚酞指示液显中性性)20ml溶解后溶解后,加酚酞指示液加酚酞指示液3滴滴, 用氢氧化钠滴定液用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定滴定T=18.02mg2. 讨论讨论 滴定在不断振摇下稍快进行滴定在不断振摇下稍快进行, 防阿司匹林水解防阿司匹林水解 受阿司匹林的水解产物水杨酸及醋酸的干扰受阿司匹林的水解产物水杨酸及醋酸的干扰3. 应用应用水杨酸水杨

28、酸,阿司匹林阿司匹林,双水杨酯双水杨酯,二氟尼柳二氟尼柳,甲芬那酸甲芬那酸,布洛芬布洛芬,酮洛芬酮洛芬,萘普生及尼美舒利萘普生及尼美舒利COOHOCOCH3COONaOCOCH3+ NaOH+ H2OSchool of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis(二) 剩余量滴定法1. 原理原理美洛昔康含有与羰基共轭的烯醇式羟基美洛昔康含有与羰基共轭的烯醇式羟基, 具有羧酸性质具有羧酸性质, 可用氢氧化钠滴定液滴定可用氢氧化钠滴定液滴定本品甲醇本品甲醇,乙醇乙醇,丙酮及水中难溶丙酮及水中难溶, 定量过量的氢氧化钠滴定量过

29、量的氢氧化钠滴定液溶解后定液溶解后, 用盐酸滴定液回滴定用盐酸滴定液回滴定2. 测定法测定法本品约本品约0.4g, 精密称定精密称定, 精密加氢氧化钠滴定液精密加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L) 25ml, 微温溶解微温溶解, 加中性乙醇加中性乙醇(对溴麝香草酚蓝指示液对溴麝香草酚蓝指示液显中性显中性)100ml与指示液与指示液10滴滴,用盐酸滴定液用盐酸滴定液(0.1mol/L) 滴定滴定; T=35.14mgSchool of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis(三) 水解后剩余量滴定法1. 原理原理2Na

30、OH + H2SO4Na2SO4 + 2H2O2. 测定法测定法(USP32-NF27)本品约本品约1.5g,精密称定精密称定,加氢氧化钠滴定液加氢氧化钠滴定液(0.5mol/L) 50.0ml,缓缓煮缓缓煮沸沸10min,放冷放冷,加酚酞指示液加酚酞指示液,用硫酸滴定液用硫酸滴定液(0.25mol/L)滴定滴定; T=45.40mgCOOHOCOCH3COONaOH+ 2 NaOH+ CH3COONaSchool of Pharmacy Jiamusi UniversityRoom of Pharmaceutical analysis3. 两步滴定法两步滴定法水解后剩余量滴定法的改进水解后剩余量滴定法的改进 阿司匹林片剂阿司匹林片剂: 水解产物水杨酸及醋酸水解产物水杨酸及醋酸;稳定剂酒石酸或枸橼酸稳定剂酒石酸或枸橼酸两步滴定法两步滴定法:l 第第1步步: 中和中和,