第5组短命植物对盐胁迫的生理响应

1、短命植物对盐胁迫的生理响应 组长：吴凯凯组长：吴凯凯 组员：张玲、杨春艳、组员：张玲、杨春艳、 禹飞雄、翟鹏飞禹飞雄、翟鹏飞过氧化物酶活性的测定f一、实验目的一、实验目的f 过氧化物酶是植物体内重要的呼吸酶类，其活性高过氧化物酶是植物体内重要的呼吸酶类，其活性高低与酶类物质代谢，植物抗性密切相关。通过实验掌握提低与酶类物质代谢，植物抗性密切相关。通过实验掌握提取取PODPOD和测定其活性方法和原理。和测定其活性方法和原理。 f二、实验原理二、实验原理f 过氧化物酶催化过氧化物酶催化H H2 2O O2 2氧化酶类，生成醌类化合物，氧化酶类，生成醌类化合物，此化合物进一步缩合或与其它分子缩合，产

2、生颜色较深产此化合物进一步缩合或与其它分子缩合，产生颜色较深产物。本实验以愈创木酚为底物，过氧化物酶催化物。本实验以愈创木酚为底物，过氧化物酶催化H2O2H2O2将愈将愈创木酚氧化成茶褐色产物，次产物在创木酚氧化成茶褐色产物，次产物在470nm470nm波长处有最大波长处有最大吸收峰，故可通过测定吸收峰，故可通过测定470nm470nm波长下的吸收光度变化得知波长下的吸收光度变化得知过氧化物酶的活性。过氧化物酶的活性。 f三、材料与试剂及仪器三、材料与试剂及仪器 f材料：马铃薯材料：马铃薯 试剂：试剂：20m mol/L KH20m mol/L KH2 2PO4,PO4,反应混合液反应混合液

3、f仪器：分光光度计，研钵，恒温水浴锅，仪器：分光光度计，研钵，恒温水浴锅， 100 mL 100 mL 容量瓶，吸管，容量瓶，吸管， 离心机。离心机。 f四、方法步骤：四、方法步骤： f 1 1、 酶液制备：称取材料酶液制备：称取材料1.079g1.079g，加入，加入20m mol/L KH20m mol/L KH2 2PO4 5ml,PO4 5ml,于研于研钵中研磨成匀浆，在钵中研磨成匀浆，在 3000r/min 3000r/min，下离心，下离心10min,10min,上清液转入上清液转入25ml,25ml,容量瓶，容量瓶，残渣再用残渣再用5ml, KH5ml, KH2 2PO4,PO4

4、,提取一次，定容，混匀，贮于冷凉处备用。提取一次，定容，混匀，贮于冷凉处备用。 f（反应混合液：（反应混合液： 100 mol 100 mol L L 磷酸缓冲液（磷酸缓冲液（ pH6.0 pH6.0 ） 50 mL 50 mL 于烧杯中，加入愈创木酚于烧杯中，加入愈创木酚 28 l 28 l ，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷却后，加入于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷却后，加入 30 % 30 % 过氧化氢过氧化氢 19 l 19 l ，混合均，混合均匀，保存于冰箱中。）匀，保存于冰箱中。）f疑问为什么制备方法不一样疑问为什么制备方法不一样2 2、 比色测

5、定：光径比色测定：光径1cm1cm比色杯两只，比色杯两只，1 1只先加只先加1ml KH2PO41ml KH2PO4，再加，再加3ml3ml混合混合液作参比液；液作参比液； 另一只加另一只加1ml,1ml,酶液，酶液，3ml3ml混合液，立即计时并置于分光光混合液，立即计时并置于分光光度计中，在度计中，在470nm470nm下测定光密度，每隔下测定光密度，每隔1min1min读数一次，连续测读数一次，连续测8min8min，每次，每次测定前重新对照校准。测定前重新对照校准。五、实验结果f吸光度变化值吸光度变化值A= A2-A1A= A2-A1fV1V1提取酶液的总量提取酶液的总量 fV2V2测

6、定取酶液的量测定取酶液的量 f酶活力（酶活力（0.01 A470/L0.01 A470/L）=(A2-A1)/0.01(t2-t1)=(A2-A1)/0.01(t2-t1)* *(V2/V1) (V2/V1) f =328.2 =328.2f 酶的比活力（酶的比活力（/g/g） = =酶活力酶活力/ /样品重样品重 f =304.2/g =304.2/g 过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）f一、实验目的一、实验目的f 过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测物的代谢强度及抗寒、抗病能力有

7、一定关系，故常加以测定。定。f二、原理二、原理 f 过氧化氢酶（过氧化氢酶（catalasecatalase）属于血红蛋白酶，含有）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。可传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。可根据根据H2O2H2O2的消耗量或的消耗量或O2O2的生成量测定该酶活力大小。在反的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性

8、条件下）滴定多促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。即可求出消耗的余的过氧化氢。即可求出消耗的H H2 2O O2 2的量。的量。三、材料、仪器设备及试剂（一）材料：小麦叶片（一）材料：小麦叶片 （二）仪器设备：（二）仪器设备：1. 1. 研钵；研钵；2. 2. 三角瓶；三角瓶；3. 3. 酸式滴定管；酸式滴定管；4. 4. 恒温水恒温水浴；浴；5. 5. 容量瓶。容量瓶。（三）试剂：（三）试剂：1. 10%H2SO41. 10%H2SO4；2. 0.2 mol/L pH7.82. 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；磷酸缓冲液；3. 0.1mol/L 3. 0

9、.1mol/L 高锰酸钾标准液称：取高锰酸钾标准液称：取KMnO4KMnO4（ARAR）3.1605g3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml1000ml，再用，再用0.1mol/L 0.1mol/L 草酸溶草酸溶液液标定；标定；4. 0.1mol/L H2O24. 0.1mol/L H2O2（30%H2O230%H2O2大约等于大约等于17.6mol/L17.6mol/L）取）取30%H2O230%H2O2溶液溶液5.68ml5.68ml，稀释至，稀释至1000ml1000ml，用标准，用标准0.1mol/L KMnO40.1mol/L KMnO4溶液溶液

10、（在酸性条件下）进行标定；（在酸性条件下）进行标定；5. 0.1mol/L 5. 0.1mol/L 草酸：称取优级纯草酸：称取优级纯H2C2O4.2H2O 12.607gH2C2O4.2H2O 12.607g，用，用蒸馏水溶解后，定容至蒸馏水溶解后，定容至1000ml1000ml。四、实验步骤 1. 1. 酶液提取：酶液提取： 取小麦叶片取小麦叶片2.5g2.5g加入加入pH7.8pH7.8的磷酸缓冲液少量，研磨成匀浆，转移至的磷酸缓冲液少量，研磨成匀浆，转移至25ml25ml容量瓶中，将研钵冲洗干净，冲洗液转容量瓶中，将研钵冲洗干净，冲洗液转移至容量瓶中，并用同一缓冲液定容，移至容量瓶中，并

11、用同一缓冲液定容，4000rpm4000rpm离心。离心。（上清液即为过氧化氢酶粗提液）（上清液即为过氧化氢酶粗提液） 2. 2. 取取50ml50ml三角瓶三角瓶4 4个个 （两个测定两个对（两个测定两个对照）照） ， 测定加入酶液测定加入酶液2.5ml2.5ml， 对照为煮死对照为煮死酶液酶液2.5ml2.5ml； 再加入再加入2.5ml 0.1mol/l H2O22.5ml 0.1mol/l H2O2，同时计时间，于同时计时间，于3030恒温水浴中保温恒温水浴中保温1010分钟，分钟，立即加入立即加入1010H2SO4 2.5mlH2SO4 2.5ml。 3. 3. 用用0.1mol/l

12、 KMnO40.1mol/l KMnO4标准溶液滴定标准溶液滴定H2O2H2O2，至出现粉红色（在至出现粉红色（在3030分钟内不消失）为终点。分钟内不消失）为终点。五、结果计算f酶活性用每克鲜重样品在酶活性用每克鲜重样品在1010分钟内分解分钟内分解H2O2H2O2的毫克数表示：的毫克数表示： 酶活（酶分解的酶活（酶分解的H2O2 mg/gH2O2 mg/g鲜重）鲜重） f式中：式中： -对照用对照用KMnO4 mlKMnO4 ml数数 -酶反酶反应后应后KMnO4KMnO4滴定滴定mlml数数f t-t-酶液总量酶液总量ml ml 1-1-反应所反应所用酶液量用酶液量ml ml -样品鲜重

13、样品鲜重(g)(g)f 1.7-1ml 0.1mol/l KMnO4 1.7-1ml 0.1mol/l KMnO4相当于相当于1.7mg 1.7mg H2O2H2O2f 注意注意 所用所用KMnO4KMnO4溶液及溶液及H2O2H2O2溶液使用前要经过标溶液使用前要经过标定，定，0.1mol/l H2O20.1mol/l H2O2要新配制。要新配制。 脯氨酸含量的测定f一、实验目的一、实验目的 f1.1.了解植物对环境胁迫的抗性生理作用，及植物对胁迫的影了解植物对环境胁迫的抗性生理作用，及植物对胁迫的影响机制；响机制； 2. 2.了解脯氨酸对植物水分胁迫下的抗性生理。了解脯氨酸对植物水分胁迫下

14、的抗性生理。f二、实验原理二、实验原理 f 在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（氨酸（prolineproline，ProPro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲水性极强，能稳定原生质的生理指标。另外，由于脯氨酸亲水性极强，能稳定原生质胶体及组织内的代谢过程，因

15、而能降低冰点，有防止细胞脱胶体及组织内的代谢过程，因而能降低冰点，有防止细胞脱水的作用。在低温条件下，植物组织中脯氨酸增加，可提高水的作用。在低温条件下，植物组织中脯氨酸增加，可提高植物的抗寒性，因此，亦可作为抗寒育种的生理指标。植物的抗寒性，因此，亦可作为抗寒育种的生理指标。 在在酸性条件下，茚三酮和脯氨酸反应生成稳定的红色化合物，酸性条件下，茚三酮和脯氨酸反应生成稳定的红色化合物，产物在产物在520nm520nm波长下具有最大吸收峰。用磺基水杨酸提取植波长下具有最大吸收峰。用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中，然后

16、用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。三、材料、仪器及试剂f1.1.实验材料：实验材料：f小麦幼苗：对照；小麦幼苗：对照；100mM100mM、200mM NaCl200mM NaCl处理处理48h48h；5%5%、15% PEG-600015% PEG-6000处理处理48h 48h f2.2.仪器：仪器：f天平，烧杯天平，烧杯 ，分光光度计，研钵，容量瓶，具塞试管，移液管，胶头，分光光度计，研钵，容量瓶，具塞试管，

17、移液管，胶头滴管，水浴锅滴管，水浴锅 f3.3.主要试剂：主要试剂：f3%3%磺基水杨酸、冰醋酸、甲苯（使用完勿弃入下水道，请回收）、磺基水杨酸、冰醋酸、甲苯（使用完勿弃入下水道，请回收）、 f2.5% 2.5% 酸性茚三酮溶液（酸性茚三酮溶液（60 ml60 ml冰醋酸、冰醋酸、16.4 ml16.4 ml磷酸加蒸馏水定容至磷酸加蒸馏水定容至100 100 mlml，再加入，再加入2.5 g2.5 g茚三酮，溶解后避光保存）、茚三酮，溶解后避光保存）、f脯氨酸标准母液：精确称取脯氨酸标准母液：精确称取25 mg25 mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，

18、然后倒入水溶解，然后倒入500 ml500 ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中脯氨酸浓度脯氨酸浓度50 g /ml50 g /ml。四、实验步骤 f（一）、样品的测定一）、样品的测定 f 1. 1. 脯氨酸的提取：准确称取不同处理的待脯氨酸的提取：准确称取不同处理的待测植物叶片各测植物叶片各0.2g0.2g（每种处理至少做三个平行），（每种处理至少做三个平行），用用3%3%磺基水杨酸研磨提取，分别转移至试管中，磺基水杨酸研磨提取，分别转移至试管中，然后向各试管分别加入然后向各试管分别加入5ml 35ml 3的磺基水杨酸溶液，的磺基水杨酸溶液，在

19、沸水浴中提取在沸水浴中提取10min10min，（提取过程中要经常摇，（提取过程中要经常摇动），冷却后过滤于干净的试管中，滤液用动），冷却后过滤于干净的试管中，滤液用3%3%磺磺基水杨酸定容至基水杨酸定容至5mL5mL，即为脯氨酸的提取液（预先，即为脯氨酸的提取液（预先湿润滤纸，尽量全部收集湿润滤纸，尽量全部收集ProPro提取液）。提取液）。 f 2.2.吸取吸取2ml2ml提取液于另一干净的带玻塞试管提取液于另一干净的带玻塞试管中，加入中，加入 2ml2ml冰醋酸及冰醋酸及2ml2ml酸性茚三酮试剂，封口酸性茚三酮试剂，封口以防过分蒸发，在沸水浴中加热以防过分蒸发，在沸水浴中加热30min

20、30min，溶液即呈，溶液即呈红色。红色。f3. 3. 冷却后加入冷却后加入4ml4ml甲苯，摇荡甲苯，摇荡30s30s，静置，静置2h2h。 f4.4.用吸管轻轻吸取上层脯氨酸红色甲苯溶液于比用吸管轻轻吸取上层脯氨酸红色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯为空白对照，在分光光度计上色杯中，以甲苯为空白对照，在分光光度计上520nm520nm波长处比色，求得吸光度值（注意甲苯有毒，波长处比色，求得吸光度值（注意甲苯有毒，尽量防止挥发；尽量防止挥发；OD520OD520大小为大小为0.2-0.80.2-0.8之间为佳，之间为佳，若值太高，应适当用甲苯稀释）。若值太高，应适当用甲苯稀释）。f（二）、标准曲线

21、的绘制（二）、标准曲线的绘制 f1.1.在分析天平上精确称取在分析天平上精确称取25mg25mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入少量蒸馏水溶解，然后倒入250ml250ml容量瓶中，加蒸馏水定容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每容至刻度，此标准液中每mlml含脯氨酸含脯氨酸100g100g。 f2.2.系列脯氨酸浓度的配制取系列脯氨酸浓度的配制取6 6个个50ml50ml容量瓶，分别盛入脯容量瓶，分别盛入脯氨酸原液氨酸原液0.50.5，1.01.0，1.51.5，2.02.0，2.52.5及及 3.0ml3.0ml，用蒸馏水，用蒸馏水定容至刻度，摇

22、匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为定容至刻度，摇匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为1 1，2 2，3 3，4 4，5 5及及6g/ml6g/ml。 f3.3.取取6 6支试管，分别吸取支试管，分别吸取2ml2ml系列标准浓度的脯氨酸溶液及系列标准浓度的脯氨酸溶液及2ml2ml冰醋酸和冰醋酸和2ml2ml酸性茚三酮溶液，每管在沸水浴中加热酸性茚三酮溶液，每管在沸水浴中加热30min30min。 f 4.4.冷却后各试管准确加入冷却后各试管准确加入4ml4ml甲苯，振荡甲苯，振荡30S30S，静，静置片刻，使色素全部转至甲苯溶液。置片刻，使色素全部转至甲苯溶液。 f 5 .5 .用注射器轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯

23、溶液用注射器轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，于至比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，于520nm520nm波波长处进行比色。长处进行比色。 f6.6.标准曲线的绘制：先求出吸光度值（标准曲线的绘制：先求出吸光度值（Y Y）依脯氨）依脯氨酸浓度（酸浓度（X X）而变的回归方程式，再按回归方程式）而变的回归方程式，再按回归方程式绘制标准曲线，计算绘制标准曲线，计算2ml2ml测定液中脯氨酸的含量测定液中脯氨酸的含量（g/2mlg/2ml）。）。五、结果计算 f根据标准曲线计算出根据标准曲线计算出2ml2ml样品液中脯氨酸的浓度样品液中脯氨酸的浓度, ,然后换算然后换算出

24、样品中脯氨酸的含量（出样品中脯氨酸的含量（g g脯氨酸脯氨酸/gFW/gFW）。）。f计算公式如下：计算公式如下： 脯氨酸含量（脯氨酸含量（g.g-1g.g-1） c c (v(va)a)w w fc c为由标准曲线查得脯氨酸含量为由标准曲线查得脯氨酸含量g g、V V为提取液总体积为提取液总体积mlml、a a为测定液体积为测定液体积mLmL、W W为样品质量为样品质量g.g.f脯氨酸含量（脯氨酸含量（g/gg/g）（）（c c 5 / 2 5 / 2）/ /样重（样重（g g） 丙二醛含量的测定f 一、实验目的一、实验目的f 植物器官衰老或在逆境下遭受伤害，植物器官衰老或在逆境下遭受伤害，

25、往往发生膜脂过氧化作用，丙二醛（往往发生膜脂过氧化作用，丙二醛（MDAMDA）是膜脂过）是膜脂过氧化的最终分解产物，从膜上产生的位置释放出后，氧化的最终分解产物，从膜上产生的位置释放出后，与蛋白质、核酸起反应修饰其特征；使纤维素分子与蛋白质、核酸起反应修饰其特征；使纤维素分子间的桥键松驰，或抑制蛋白质的合成。间的桥键松驰，或抑制蛋白质的合成。MDAMDA的积累可的积累可能对膜和细胞造成一定的伤害。能对膜和细胞造成一定的伤害。f二、二、 原理原理f 丙二醛（丙二醛（MDAMDA）是常用的膜脂过氧化指标，在）是常用的膜脂过氧化指标，在f酸性和高温度条件下，可以与硫代巴比妥酸（酸性和高温度条件下，可

26、以与硫代巴比妥酸（TBATBA）反应生成红棕色的三甲川（反应生成红棕色的三甲川（3,5,5-3,5,5-三甲基恶唑三甲基恶唑2,4-2,4-二酮），其最大吸收波长在二酮），其最大吸收波长在532nm532nm。但是测定。但是测定植物组织中植物组织中MDAMDA时受多种物质的干扰，其中最主要时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与的是可溶性糖，糖与TBATBA显色反应产物的最大吸收显色反应产物的最大吸收波长在波长在450nm450nm，532nm532nm处也有吸收。植物遭受干旱、处也有吸收。植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此

27、测定植物组织中定植物组织中MDAMDATBATBA反应物质含量时一定要排反应物质含量时一定要排除可溶性糖的干扰。低浓度的铁离子能够显著增除可溶性糖的干扰。低浓度的铁离子能够显著增加加TBATBA与蔗糖或与蔗糖或MDAMDA显色反应物在显色反应物在532532、450nm450nm处的处的消光度值，所以在蔗糖、消光度值，所以在蔗糖、MDAMDA与与TBATBA显色反应中需显色反应中需一定量的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量一定量的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为为100100300g/g DW300g/g DW，根据植物样品量和提取液，根据植物样品量和提取液的体积，加入的体积，加入Fe3F

28、e3的终浓度为的终浓度为0.5mol/L0.5mol/L。f A. A. 直线回归法直线回归法f MDA MDA与与TBATBA显色反应产物在显色反应产物在450nm450nm波长下的消光度值为波长下的消光度值为零。不同浓度的蔗糖（零。不同浓度的蔗糖（0 025mmol/L25mmol/L）与）与TBATBA显色反应产物显色反应产物在在450nm450nm的消光度值与的消光度值与532nm532nm和和600nm600nm处的消光度值之差成处的消光度值之差成正相关，配制一系列浓度的蔗糖与正相关，配制一系列浓度的蔗糖与TBATBA显色反应后，测定显色反应后，测定上述三个波长的消光度值，求其直线方

29、程，可求算糖分在上述三个波长的消光度值，求其直线方程，可求算糖分在532nm532nm处的消光度值。处的消光度值。UV-120UV-120型紫外可见分光光度计的直型紫外可见分光光度计的直线方程为：线方程为：fY532Y5320.001980.001980.088D450 0.088D450 B双组分分光光度计法f据朗伯据朗伯- -比尔定律：比尔定律：D DkCLkCL，当液层厚度为，当液层厚度为1cm1cm时，时，fk=D/Ck=D/C，k k称为该物质的比吸收系数。当某一溶液中有称为该物质的比吸收系数。当某一溶液中有f数种吸光物质时，某一波长下的消光度值等于此混合液数种吸光物质时，某一波长下

30、的消光度值等于此混合液f在该波长下各显色物质的消光度之和。在该波长下各显色物质的消光度之和。f 已知蔗糖与已知蔗糖与TBATBA显色反应产物在显色反应产物在450nm450nm和和532nm532nm波波f长下的比吸收系数分别为长下的比吸收系数分别为85.4085.40，7.407.40。MDAMDA在在f450nm450nm波长下无吸收，故该波长的比吸收系数为波长下无吸收，故该波长的比吸收系数为0 0，f532nm532nm波长下的比吸收系数为波长下的比吸收系数为155155，根据双组分分光度，根据双组分分光度f计法建立方程组，求解方程得计算公式：计法建立方程组，求解方程得计算公式：fC1(

31、mmol/L)=11.71D450 C1(mmol/L)=11.71D450 fC2(mol/L)=6.45(D532C2(mol/L)=6.45(D532D600)D600)0.56D450 0.56D450 式中式中 C1 C1为可溶性糖的浓度；为可溶性糖的浓度；C2C2为为MDAMDA的浓度；的浓度；D450D450、D532D532、D600D600分别代表分别代表450nm450nm、532nm532nm和和600nm600nm波长下的波长下的消光度值。消光度值。f三、仪器设备三、仪器设备f紫外可见分光光度计紫外可见分光光度计1 1台；离心机台；离心机1 1台；电子天平台；电子天平1 1台；台；10ml10ml离心管离心管4 4f支；研钵两套；试管支；研钵两套；试管4 4支；刻度吸管：支；刻度吸管：10ml 110ml 1支，支，2ml 12ml 1支；支；剪刀剪刀1 1把。把。f 【试剂】【试剂】f10%10%三氯乙酸（三氯乙酸（TCATCA）；）；