溶血性弧菌的检验

1、食品中溶血性链球菌的检验 主要内容 溶血性链球菌概述 溶血性链球菌生物学特性 溶血性链球菌检验 一、概述v（一）分布：在自然界分布较广，可存在于水、空气、尘埃、牛奶、粪便及人的咽喉和病灶中。 v（二）分类 1 1、按溶血能力分类： （1 1） 甲型（）溶血性链球菌 （2 2）乙型（）乙型（）溶血性链球菌）溶血性链球菌 （3 3） 丙型（丙型（）链球菌）链球菌 v 一、概述v2、按血清学分类 主要是根据链球菌细胞壁抗原进行分类，这种方法可靠，但工作复杂。 v根据族特异性抗原的不同，将乙型（）溶血性链球菌 分成A B C D E F G H K L M N O P Q R S T，共18族 v在一

2、个族内因表面抗原（即型特异性抗原）不同，又分成若干型。如A族分成60多个型， B族分为4个血清型， C族分成13个血清型。用阿拉伯数字表示。 v与人类疾病有关的大多属于乙型溶血链球菌，其血清型 90%属于A族链球菌。 （一）形态与染色： 1 1、呈球形或卵圆形， 直径0.5um-1um 0.5um-1um 链状 排列（长短与什么有关） 2 2、革兰氏染色阳性， 衰老培养物常成阴性 3 3、无芽孢、无鞭毛、多数无夹膜 二、 生物学特性二、 生物学特性 （二）培养特性（二）培养特性 1 1、多数为需氧或兼性厌氧，少数为微需氧或专性厌氧 2 2、 对营养要求高，普通培养基不能良好生长，（需加血清、血

3、液、腹水等）。大多数菌株需苏氨酸、核黄素、维生素B6B6、烟酸等生长因子。 3 3、最适温度37 PH7.47.6 37 PH7.47.6 4 4、在液体培养基中，溶血菌株, ,呈絮状或颗粒状沉淀生长（上清下浊）；不溶血菌球，均匀浑浊生长，如粪链菌。 （二）培养特性 5 5、在血平板上，形成灰白色，半透明、表面光滑、圆形突起的细小菌落，直径0.50.50.75mm0.75mm，针尖大小。不同菌型其菌落周围的溶血现象不同。甲型在菌落周围出现1-2mm1-2mm的绿色溶血环，放冰箱一夜呈透明溶血环，且溶血环扩大；乙型在菌落周围有2-3mm2-3mm的透明溶血环；丙型菌落周围不具溶血环。 二、 生物

4、学特性甲链乙链丙链二、 生物学特性( (三三) )生化特性生化特性 1 1、均分糖葡萄糖产酸、均分糖葡萄糖产酸 2 2、对乳糖、甘露醇、水杨苷等的分解因菌株而异。、对乳糖、甘露醇、水杨苷等的分解因菌株而异。 3 3、能使牛奶产酸而不凝固，不液化明胶。、能使牛奶产酸而不凝固，不液化明胶。 4 4、乙型溶血链球菌山梨醇阴性，不被胆汁溶解、不、乙型溶血链球菌山梨醇阴性，不被胆汁溶解、不分解菊糖，可与肺炎双球菌区别。分解菊糖，可与肺炎双球菌区别。 4 4、触酶阴性可与葡萄球菌区别。、触酶阴性可与葡萄球菌区别。 5 5、 A A族菌对杆菌肽敏感，可被其抑制。族菌对杆菌肽敏感，可被其抑制。二、 生物学特性

5、（四）致病性链球菌可产生的毒素和酶 1 1、溶血素：有溶解红细胞，杀死白细胞、血小板及、溶血素：有溶解红细胞，杀死白细胞、血小板及毒害心脏的作用，有O O和S S两种。 链球菌溶血素链球菌溶血素O O为含有为含有-SH-SH基的蛋白质，能破坏基的蛋白质，能破坏白细胞和血小板，动物试验又证实对心脏有急性毒害作用，使心脏骤停，抗原性强，感染后2 23 3周，85%85%以上病上产生抗以上病上产生抗“O”O”抗体。抗体。 S S为小分子多肽，相对分子质量较小，故无抗原为小分子多肽，相对分子质量较小，故无抗原性。 S S对氧稳定，对热和酸敏感。 血平板所见透明溶血是由血平板所见透明溶血是由“S”S”所

6、引起，能破坏所引起，能破坏白细胞和血小板，给动物静注可迅速致死。注射小鼠腹腔，引起肾小管坏死。 二、 生物学特性（四）致病性链球菌可产生的毒素和酶 2 2、致热外毒素：曾称红疹毒素、致热外毒素：曾称红疹毒素(Erythrotoxin)(Erythrotoxin)或猩或猩红红热毒素(Scarletfever toxin)(Scarletfever toxin)，是人类猩红热的主要致病物质，为外毒素。主要有A A族链球菌产生。小剂量可使局部产生红疹，大剂量引起全身性红疹，并伴有发热、头痛、恶心、呕吐、周身不适等。 3 3、透明质酸酶：又称扩散因子，可溶解组织间质的透透明质酸酶：又称扩散因子，可溶解

7、组织间质的透明质酸，故能增加细菌的侵袭力。 4 4、链激酶：又、链激酶：又称溶纤维蛋白酶，具有增强细菌在组织称溶纤维蛋白酶，具有增强细菌在组织中的扩散作用。 5 5、杀白细胞素：在肉汤培养基中培养可产生。、杀白细胞素：在肉汤培养基中培养可产生。可使白可使白细胞失去动力，变为球形，最后膨胀破裂。 v 二、 生物学特性（五）抵抗力 抵抗力一般不强，抵抗力一般不强，6030min6030min即被杀死，对常用即被杀死，对常用消毒剂敏感。 乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四环乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四环素、磺胺均敏感。青霉素是溶血链球菌感染的首选药物。 v( (六六) )流行病学与致病

8、性流行病学与致病性 溶血性链球菌在自然界中分布较广，存在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染，被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也会对人类进行感染。上呼吸道感染患者、人畜化脓性感染部位常成为食品污染的污染源。二、 生物学特性v一般来说，溶血性链球菌常通过以下途径污染食品： 1、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化脓性炎症时造成食品的污染； 2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺炎或畜禽局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染； 3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。 溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、呼

9、吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等变态反应。化脓性链球菌) 三、微生物检验 （一）检验程序 液体检样 v固体检样样品处理增菌培养分离培养分纯培养生化鉴定报告 v（二）检验操作要点 1 1、采样：食品：按常规、采样：食品：按常规 2 2、增菌培养：、增菌培养： 葡萄糖肉浸液肉汤葡萄糖肉浸液肉汤 ：一般情况：一般情况 36361 24h1 24h 匹克氏肉汤：在污染严重时用匹克氏肉汤：在污染严重时用 （二）检验操作要点 3 3、分离培养：血平板，、分离培养：血平板， 37 24h,37 24h,菌落菌落: :灰白色，灰白色，半透明或不透明

10、，表面光滑，有透明溶血环半透明或不透明，表面光滑，有透明溶血环 4 4、分纯培养：血平板、分纯培养：血平板 37 24h37 24h 5 5、镜检：革兰氏染色，阳性，、镜检：革兰氏染色，阳性，G G+ +链状排列，符合者可做生化鉴定。 三、微生物检验 （二）检验操作要点 6 6、生化鉴定：、生化鉴定： （1 1）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验） 吸取草酸钾血浆吸取草酸钾血浆0.2mL0.2mL，加，加0.8mL0.8mL灭菌生理盐水，灭菌生理盐水，混匀，再加入链球菌混匀，再加入链球菌18-24h3618-24h36肉浸液肉汤培养物肉浸液肉汤培养物0.5mL0.5mL

11、及及0.25%0.25%氯化钙氯化钙0.25mL0.25mL，混匀，置于，混匀，置于3636水浴水浴10min,10min,血浆混合物自行凝固，观察凝块重新完全溶血浆混合物自行凝固，观察凝块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如解的时间，完全溶解为阳性，如24h24h后不溶解即为后不溶解即为阴性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已知的链阴性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。激酶阳性的菌株做阳性对照。三、微生物检验 三、微生物检验 （二）检验操作要点 6 6、生化鉴定：、生化鉴定： （2 2）杆菌肽敏感试验）杆菌肽敏感试验 将分纯的乙型溶血性链球菌接种血平板，在划将

12、分纯的乙型溶血性链球菌接种血平板，在划线处贴附杆菌肽纸片，线处贴附杆菌肽纸片，3718h3718h，出现抑菌带为阳，出现抑菌带为阳性，据此可推测为乙型溶血性链球菌。性，据此可推测为乙型溶血性链球菌。 （二）检验操作要点 v7 7、报告：、报告： 根据培养后的形态，菌落特征及生化试验可报告： 有乙型溶血性链球菌生长。 三、微生物检验思考题1 1、链球菌的溶血现象有哪几个类型，各类型的溶、链球菌的溶血现象有哪几个类型，各类型的溶血特征如何？血特征如何？ 2 2、溶血性链球菌能产生什么毒素和酶？、溶血性链球菌能产生什么毒素和酶？ 3 3、溶血性链球菌在血平板中生长有何特征？、溶血性链球菌在血平板中生

13、长有何特征？ 一、概述v（一）分布：在自然界分布较广，可存在于水、空气、尘埃、牛奶、粪便及人的咽喉和病灶中。 v（二）分类 1 1、按溶血能力分类： （1 1） 甲型（）溶血性链球菌 （2 2）乙型（）乙型（）溶血性链球菌）溶血性链球菌 （3 3） 丙型（丙型（）链球菌）链球菌 v （二）检验操作要点 3 3、分离培养：血平板，、分离培养：血平板， 37 24h,37 24h,菌落菌落: :灰白色，灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有透明溶血环半透明或不透明，表面光滑，有透明溶血环 4 4、分纯培养：血平板、分纯培养：血平板 37 24h37 24h 5 5、镜检：革兰氏染色，阳性，、镜检：革兰氏染色，阳性，G G+ +链状排列，符合者可做生化鉴定。 三、微生物检验 （二）检验操作要点 6 6、生化鉴定：、生化鉴定： （1 1）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验） 吸取草酸钾血浆吸取草酸钾血浆0.2mL0.2mL，加，加0.8mL0.8mL灭菌生理盐水，灭菌生理盐水，混匀，再加入链球菌混匀，再加入链球菌18-24h3618-24h36肉浸液肉汤培养物肉浸液肉汤培养物0.5mL0.5mL及及0.25%