哮喘研究从基础到临床

1、 哮喘研究从基础到临床哮喘研究从基础到临床Scientific research on asthma: from bench to bedside浙江大学附属二院呼吸科浙江大学附属二院呼吸科浙江大学呼吸疾病研究所浙江大学呼吸疾病研究所 沈华浩沈华浩哮喘最新定义：哮喘最新定义：支气管哮喘支气管哮喘( (简称哮喘简称哮喘) )是一种以嗜酸性粒细胞、是一种以嗜酸性粒细胞、肥大细胞和肥大细胞和T T淋巴细胞等多种炎症细胞参与的气道淋巴细胞等多种炎症细胞参与的气道慢性炎症。这种炎症使易感者产生气道高反应性，慢性炎症。这种炎症使易感者产生气道高反应性，表现为反复发作性的喘息、呼吸困难、胸闷或咳表现为反复发

2、作性的喘息、呼吸困难、胸闷或咳嗽等症状，常在夜间和（或）清晨发作、加剧，嗽等症状，常在夜间和（或）清晨发作、加剧，常伴有广泛多变的可逆性气流受限，多数患者可常伴有广泛多变的可逆性气流受限，多数患者可自行或经治疗后缓解。自行或经治疗后缓解。 哮喘研究的动物模型哮喘研究的动物模型 Experimental models for asthma 应用动物模型的价值应用动物模型的价值建立实验动物模型的目的是更好地解释人类建立实验动物模型的目的是更好地解释人类疾病发病过程。通过动物模型，我们可以探疾病发病过程。通过动物模型，我们可以探讨许多难以直接从临床得到的疾病发病机理。讨许多难以直接从临床得到的疾病发

3、病机理。尽管各种动物模型在体现人类疾病上还存在尽管各种动物模型在体现人类疾病上还存在一定的缺陷，但不可否认的是通过动物模型一定的缺陷，但不可否认的是通过动物模型所得到的信息，使得我们对人类疾病过程有所得到的信息，使得我们对人类疾病过程有了更透彻清晰的认识。了更透彻清晰的认识。 人类哮喘的特征人类哮喘的特征气道慢性炎症：大量炎性细胞气道慢性炎症：大量炎性细胞 T T 淋巴细胞、肥大细胞、淋巴细胞、肥大细胞、嗜酸粒细胞、巨噬细胞、中性粒细胞浸润等，它们释放出嗜酸粒细胞、巨噬细胞、中性粒细胞浸润等，它们释放出LTsLTs、PGsPGs、PAFPAF等炎性介质，引起微小血管渗漏、支气管等炎性介质，引起

4、微小血管渗漏、支气管黏膜水肿、腺体分泌增加、粘液栓形成等病理改变，黏膜水肿、腺体分泌增加、粘液栓形成等病理改变， 气道高反应性（气道高反应性（AHRAHR）：气道对特异和非特异刺激的高反）：气道对特异和非特异刺激的高反应性，应性， 如组织胺，乙酰甲胆碱。如组织胺，乙酰甲胆碱。气道重建气道重建 ：上皮脱落、上皮下基底膜胶原沉积、平滑肌：上皮脱落、上皮下基底膜胶原沉积、平滑肌肥大增殖、粘膜水肿、杯状细胞及粘液腺增生分泌亢进，肥大增殖、粘膜水肿、杯状细胞及粘液腺增生分泌亢进，气道周血管扩张，新生血管形成。气道周血管扩张，新生血管形成。 临床研究哮喘受限制临床研究哮喘受限制 一、肺组织标本获取不易，具

5、有一定危险性。并一、肺组织标本获取不易，具有一定危险性。并且仅能反映疾病发展中的某一点，不能全程反映且仅能反映疾病发展中的某一点，不能全程反映疾病过程。疾病过程。 二、二、BALFBALF的获取更需疾病允许，尤其哮喘发作时的获取更需疾病允许，尤其哮喘发作时难以获取，不易将肺的结构（病理）和功能（病难以获取，不易将肺的结构（病理）和功能（病理生理）结合起来。理生理）结合起来。 三、要明确参与三、要明确参与LARLAR过程的抗体类型很不容易，过程的抗体类型很不容易，因为我们不可能将某个特异抗原免疫病人而使其因为我们不可能将某个特异抗原免疫病人而使其产生相应抗体或为其输注抗原特异性抗体。产生相应抗体

6、或为其输注抗原特异性抗体。 四、不能冒着哮喘发作的危险来探索引起哮喘发四、不能冒着哮喘发作的危险来探索引起哮喘发作的抗原。作的抗原。 研究哮喘的动物研究哮喘的动物1 1 生来具有反复发作性喘息的动物：猫、马。生来具有反复发作性喘息的动物：猫、马。2 2 抗原激发前即具有抗原激发前即具有AHRAHR的动物：狗、啮齿类动物的动物：狗、啮齿类动物 。3 3 仅在抗原激发后方具有可逆性气流阻塞和仅在抗原激发后方具有可逆性气流阻塞和/ /或或AHRAHR的动物：兔、羊、豚鼠、大鼠、小鼠。的动物：兔、羊、豚鼠、大鼠、小鼠。 生来具有反复发作性喘息的动物生来具有反复发作性喘息的动物 马亦存在自发性反复发作的

7、气流阻塞。这是因为致敏状态的马马亦存在自发性反复发作的气流阻塞。这是因为致敏状态的马经常暴露于含有真菌孢子的干草的缘故。经常暴露于含有真菌孢子的干草的缘故。 相同点：相同点：哮喘类型哮喘类型 与人类哮喘相似的特征与人类哮喘相似的特征职业性哮喘职业性哮喘 暴露于抗原时症状明显暴露于抗原时症状明显 脱离抗原环境、症状缓解脱离抗原环境、症状缓解 AHRAHR可因脱离抗原而降低可因脱离抗原而降低变应性哮喘变应性哮喘 可逆性反复发作的气流阻塞可逆性反复发作的气流阻塞 发作后可缓解发作后可缓解 具有明确的过敏原具有明确的过敏原抗原激发诱导可逆性气流阻塞和抗原激发诱导可逆性气流阻塞和气道高反应性的动物气道高

8、反应性的动物 兔兔 羊羊 豚鼠豚鼠 大鼠大鼠 小鼠小鼠 激发抗原的选择激发抗原的选择 1. Protein antigen e.g. OVA, Der p, Bet V2. House dust mite (HDM)3. Fungi e.g. Aspergillus fumigatus (extract or connidia)4. Parasites e.g. Schistosoma mansoni5. Worm e.g. Nippostrongylus brasiliensis6. Chemical compounds e.g. toluenediisocyanate激发抗原的选择激发抗原

9、的选择 The allergen source should reflect the human situation:1. HDM, pollen and fungi are natural allergens2. inhalation is the natural exposition route 3. extracts or pollen starch granula are better than purified protein, but, high degree of variance豚鼠曾经广泛应用于哮喘研究，直到1985年才首次在豚鼠哮喘模型上描述LAR时相，之后许多学者应用豚鼠

10、研究了LAR。 Brattard Brattard （19851985）OVA+Al(OH)OVA+Al(OH)2 2致敏豚鼠致敏豚鼠(IP)(IP)，使动物机体产生，使动物机体产生OVAOVA特异性特异性IgEIgE和和IgG.IgG.在麻醉状态下，气管内滴注在麻醉状态下，气管内滴注OVAOVA微粒抗原致敏微粒抗原致敏, , 6 6小时后可诱发出小时后可诱发出LARLAR，4848小时后消失。小时后消失。该模型中，该模型中，IARIAR时相产生的肺阻力大于时相产生的肺阻力大于2424小时后的小时后的LARLAR。对未致敏豚鼠或产生。对未致敏豚鼠或产生IgGIgG而非而非IgEIgE的致敏豚鼠

11、的致敏豚鼠进行攻击均不能诱发出进行攻击均不能诱发出LARsLARs，组织学表现：以嗜酸粒细胞浸润为特征的局限性组织学表现：以嗜酸粒细胞浸润为特征的局限性细支气管炎，平滑肌收缩、粘膜下水肿和气道粘细支气管炎，平滑肌收缩、粘膜下水肿和气道粘液形成在激发前液形成在激发前/ /后应用激素可抑制后应用激素可抑制LARLAR时相反应，时相反应，但并不能阻断炎症细胞的募集。但并不能阻断炎症细胞的募集。建立豚鼠哮喘模型有多种不同的方法（抗原建立豚鼠哮喘模型有多种不同的方法（抗原种类、致敏方式等）、不同的麻醉方法和肺种类、致敏方式等）、不同的麻醉方法和肺功能测定方法；结果表示也有不同的方法功能测定方法；结果表示

12、也有不同的方法（LARLAR出现的时间、出现的时间、LARLAR产生的次数、产生的次数、LARLAR强强度）。这说明即使在同一品系动物，应用不度）。这说明即使在同一品系动物，应用不同的方法可引起不同程度的气流阻塞。重要同的方法可引起不同程度的气流阻塞。重要的是在不同的背后存在相同之处。如在三组的是在不同的背后存在相同之处。如在三组实验中有两组证明了在引起实验中有两组证明了在引起LARsLARs方面抗原特方面抗原特异性异性IgEIgE比抗原特异性比抗原特异性IgGIgG更为重要。此外，更为重要。此外，所用实验均说明了所用实验均说明了EosEos的肺内募集与的肺内募集与LARLAR存在存在相关性。

13、相关性。应用应用OVAOVA主动免疫致敏或应用大鼠杂交瘤产生的主动免疫致敏或应用大鼠杂交瘤产生的 抗二硝基酚抗二硝基酚IgEIgE被动免疫致敏。被动免疫致敏。气管内给予特异性抗原。气管内给予特异性抗原。 24hr24hr后，后，OVAOVA致敏组致敏组BALBAL中多形核细胞明显高于中多形核细胞明显高于对照组，被动免疫致敏组（对照组，被动免疫致敏组（IgEIgE致敏组）应用抗致敏组）应用抗原雾化攻击原雾化攻击1 12hr2hr后后BALBAL中的多形核细胞明显上中的多形核细胞明显上升，升，24hr24hr恢复正常。恢复正常。对对IgEIgE致敏组进行组织病理学检查显示，攻击致敏组进行组织病理学

14、检查显示，攻击2h2h后可见肺泡和间质水肿，伴有局限性细支气管周后可见肺泡和间质水肿，伴有局限性细支气管周围多形核细胞浸润，炎症在围多形核细胞浸润，炎症在24hr24hr后消失。另外可后消失。另外可见间质内单核见间质内单核/ /巨噬细胞浸润。巨噬细胞浸润。无论是主动免疫致敏还是被动免疫致敏大鼠，均无论是主动免疫致敏还是被动免疫致敏大鼠，均能建立起抗原特异性能建立起抗原特异性IgEIgE依赖的气道炎症。依赖的气道炎症。小鼠小鼠 小鼠模型已成为研究抗原诱导的气道反应性小鼠模型已成为研究抗原诱导的气道反应性的一个重要的模型，因为对小鼠免疫系统认的一个重要的模型，因为对小鼠免疫系统认识广泛全面，可以用

15、来研究识广泛全面，可以用来研究T T细胞在细胞在AHRAHR发生发生发展中的作用。发展中的作用。 小鼠不仅可用常规方法激发，也可采用其他小鼠不仅可用常规方法激发，也可采用其他更简易的方法。如观察静脉给予更简易的方法。如观察静脉给予MCHMCH致气道致气道收缩所需浓度。收缩所需浓度。 小鼠小鼠3 3 正常或抗原致敏的小鼠气道可用来研究电正常或抗原致敏的小鼠气道可用来研究电刺激后神经元介质的释放。如对某一品系刺激后神经元介质的释放。如对某一品系的小鼠反复抗原暴露可使气道对神经刺激的小鼠反复抗原暴露可使气道对神经刺激的反应增强，表现为达到的反应增强，表现为达到5050最大收缩（最大收缩（ESES50

16、50）所需的电刺激频率明显降低，其原）所需的电刺激频率明显降低，其原因是反复抗原刺激后神经元释放因是反复抗原刺激后神经元释放AchAch能力增能力增强。强。 小鼠小鼠最初的小动物模型之一采用了最初的小动物模型之一采用了BALB/cBALB/c小鼠小鼠, , 动物经皮给予动物经皮给予 picryl chloride picryl chloride 致敏，后致敏，后滴鼻给予同一致敏原激发，于激发后滴鼻给予同一致敏原激发，于激发后2424至至4848小时可见支气管周围及血管周围巨噬细胞及小时可见支气管周围及血管周围巨噬细胞及淋巴细胞积聚，同时伴肺阻力增加，但无动淋巴细胞积聚，同时伴肺阻力增加，但无动

17、态顺应性改变。态顺应性改变。 小鼠小鼠A/JA/J小鼠以绵羊血红细胞致敏激发可致小鼠以绵羊血红细胞致敏激发可致AHRAHR及及明显的肺明显的肺EosEos炎症，而使用抗炎症，而使用抗CD4CD4单克隆抗体单克隆抗体阻断阻断CD4+TCD4+T细胞后细胞后AHRAHR及肺及肺EosEos炎症均被抑制，炎症均被抑制，可见该模型中气道功能的改变依赖可见该模型中气道功能的改变依赖 CD4CD4T T细胞，而细胞，而EosEos是该反应的效应细胞。是该反应的效应细胞。有两种方法证实此模型存在气道功能的改变。有两种方法证实此模型存在气道功能的改变。1 1、采用整体体积描记法：经静脉给予浓度依次增、采用整体

18、体积描记法：经静脉给予浓度依次增高的高的MCHMCH后发现气流传导（后发现气流传导（airway conductanceairway conductance）改变，致敏组较非致敏组对改变，致敏组较非致敏组对MCHMCH的反应性明显增高。的反应性明显增高。2 2、采用体外测定法：离体气道平滑肌给予一定量、采用体外测定法：离体气道平滑肌给予一定量的电流刺激，随着刺激频率的增加气道收缩增强，的电流刺激，随着刺激频率的增加气道收缩增强，结果致敏组小鼠的结果致敏组小鼠的ESES5050较非致敏小鼠明显降低，其较非致敏小鼠明显降低，其机理可能是电流刺激后致敏小鼠气道副交感神经末机理可能是电流刺激后致敏小鼠

19、气道副交感神经末梢释放梢释放ACHACH较非致敏小鼠多，同时伴较非致敏小鼠多，同时伴M M2 2毒蕈碱受体毒蕈碱受体功能丧失。功能丧失。 急性哮喘模型 Protocol Sensitization (i.p. OVA) Challenge (1%OVA ) 1st 2nd 1st 2nd 3rd Days 0 14 24 25 26 28 Analysis (Airways Inflammation) (Lung histology) (Th1/Th2 responses) Advantages of an acute allergic mouse model Similar to human

20、s- Airway hyperresponsivenss- Eosinophylia- Increased IgE- Goblet cell hyperplasia/metaplasia - Mucus hypersecretion- Mucosal Edema Advantages of an acute allergic mouse model Useful for basic research:- Role of eosinophils and CD4+ T-lymphocytes - Adhesion and chemotactic molecules and cell recruit

21、ment - Test conventional pharmacological agents- Transgenic and gene-targeted mouseBALB/cBALB/c和和 C57BL/6JC57BL/6J（B6B6）小鼠）小鼠. .近年来随着分子生物学的发展，通过转基因近年来随着分子生物学的发展，通过转基因或基因敲除技术，已培育出数十种新的小鼠品或基因敲除技术，已培育出数十种新的小鼠品系系: : IL-5IL-5转基因转基因:IL-5+/+:IL-5+/+， 如如NJ 1638 NJ 1638 和和 NJ 1720NJ 1720）. . IL-5 IL-5基因敲除（基因

22、敲除（IL-5-/-IL-5-/-）品系）品系. . IL-4-/- IL-4-/- 品系，品系， IFN-a -/- IFN-a -/- 品系，品系， CD4 -/-CD4 -/-、 CD8 -/-CD8 -/-、 T T细胞细胞 -/-/-， Eotaxin +/+Eotaxin +/+、 Eotaxin -/-Eotaxin -/-， IL-13 -/-IL-13 -/-，等。等。 特殊类型细胞和细胞因子基因敲小鼠抗原致敏和激发后特殊类型细胞和细胞因子基因敲小鼠抗原致敏和激发后气道炎症反应比较气道炎症反应比较 细胞细胞/细胞因子细胞因子 气道上皮气道上皮 气道粘液气道粘液 BAL AHR

23、 缺陷缺陷 病理病理 分泌亢进分泌亢进 嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞 （Mch） B cells + + + +T cells (ab, gdb, gd) alphabeta+ T cells gammadelta+T cells + + +/- ?CD4+ cells CD8+ cells + + + +NK-T cells ND ND + NDEosinophils +/- +/- 野生小鼠野生小鼠 + + + + 特殊类型细胞和细胞因子基因敲小鼠抗原致敏和激发后特殊类型细胞和细胞因子基因敲小鼠抗原致敏和激发后气道炎症反应比较气道炎症反应比较 细胞细胞/细胞因子细胞因子 气道上皮气道上皮 气道

24、粘液气道粘液 BAL AHR 缺陷缺陷 病理病理 分泌亢进分泌亢进 嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞 （Mch） (IL-5-/-) +/- +/- - -IL-4-/- +/- + +IL-13-/- +/- + +/-IFN-r-/- + + + +野生小鼠野生小鼠 + + + + 0 3 6 12 25 50 Methacholine Dose (g/kg)Effects of Huangqi and DXM on airway responsiveness in OVA-sensitized mice. Airway responsiveness was measured at 48h fol

25、lowing last OVA challenge. A The Mean dose response curves to nebulized methacholine (Mch). Airway reactivity (Penh, y-axis) in response to increasing doses of nebulized Mch (x-axis) was assessed by whole-body plethysmography . Data are expredded as the means SEM (n=8-10). * p 0.05 compared with sal

26、ine/saline mice. p 0.05 compared with saline-treated OVA challenged mice. 00.511.522.533.544.5Airway Obstruction (Penh)SalineOVAHuangqi- I.P 28DHuangqi-I.P 14DHuangqi- I.T 14DDXM Disadvantages of an acute allergic mouse model - No asthma spontaneously - No genetic and environmental factors - Airways

27、 insensitive for histamine - Hardly airway remodeling - No eosinophils in airways under basal conditions - Hardly airway remodeling and not a chronic disease 慢性哮喘模型/气道重构模型 Protocol Sensitization (i.p. OVA) Challenge (1%OVA ) Analysis (Airways Inflammation) (Lung histology) (Th1/Th2 responses) Advant

28、ages of a chronic allergic mouse model - Sustained AHR - Sustained inflammation - Smooth muscle & goblet cell hyperplasia - Airway remodeling Disadvantages of a chronic allergic mouse model - Time consuming - Expensive - Need more test-compound - AHR not always related to remodeling Conclusions

29、- The allergic models that should be used in different experiments are determined by the distinct research aims. - In general, a chronic model is in favor of an acutemodel since it mimics better the situation in humans哮喘动物模型的局限性哮喘动物模型的局限性任何疾病的动物模型均有局限性。任何疾病的动物模型均有局限性。1 1、不同种系之间存在的差别限制了动物模型结果在人身上的、不同

30、种系之间存在的差别限制了动物模型结果在人身上的应用。比如人与动物的气道神经支配就存在显著差别，气道平应用。比如人与动物的气道神经支配就存在显著差别，气道平滑肌中肾上腺素能神经支配很少。滑肌中肾上腺素能神经支配很少。2 2、所有品系均有其局限性。如，研究肺心病易在大动物上进、所有品系均有其局限性。如，研究肺心病易在大动物上进行，另一方面，详细描述气道病理又宜在小动物身上进行，研行，另一方面，详细描述气道病理又宜在小动物身上进行，研究影响气道反应性的免疫因子采用小鼠较为合适。总之，没有究影响气道反应性的免疫因子采用小鼠较为合适。总之，没有一种模型可解决碰到的所有问题一种模型可解决碰到的所有问题 。

31、因此动物实验工作者在模。因此动物实验工作者在模拟人类疾病过程的时候应考虑到他们实验的局限性。拟人类疾病过程的时候应考虑到他们实验的局限性。哮喘动物模型的局限性哮喘动物模型的局限性3 3、虽然哮喘的病理过程大致可在动物模型上得以体现，但、虽然哮喘的病理过程大致可在动物模型上得以体现，但没有一个可完全体现它的特点。如家兔模型中描写到速发和没有一个可完全体现它的特点。如家兔模型中描写到速发和迟发反应，但没提到基底膜增厚和平滑肌增生。还有，没有迟发反应，但没提到基底膜增厚和平滑肌增生。还有，没有一个一个LARsLARs模型能表现在未受激发底情况下出现自发性气道阻模型能表现在未受激发底情况下出现自发性气

32、道阻塞和哮喘样综合症。马可以引起马喘息病，在去除诱发的环塞和哮喘样综合症。马可以引起马喘息病，在去除诱发的环境因素后可恢复到发作前水平。但人的哮喘气道高反应性的境因素后可恢复到发作前水平。但人的哮喘气道高反应性的存在往往要更长一些。存在往往要更长一些。4 4、在绝大多数的、在绝大多数的LARsLARs模型中气道高反应性的存在往往时间模型中气道高反应性的存在往往时间较短，增高幅度也不大。犬模型有持续存在的较短，增高幅度也不大。犬模型有持续存在的AHRAHR，但也没，但也没提到自然发生的气道阻塞。因此，没有一个模型能完全模仿提到自然发生的气道阻塞。因此，没有一个模型能完全模仿人的哮喘。人的哮喘。小

33、结小结 - - 哮喘实验动物模型研究的应用哮喘实验动物模型研究的应用一、动物模型局限性的存在不表示它不应被采用，一、动物模型局限性的存在不表示它不应被采用，只是提醒我们在运用动物模型时要考虑到它的局限只是提醒我们在运用动物模型时要考虑到它的局限性。应用动物模型研究人类疾病有它不可否认的作性。应用动物模型研究人类疾病有它不可否认的作用。用。二、新的哮喘模型有使用基因突变模型来研究调节二、新的哮喘模型有使用基因突变模型来研究调节气道反应性的遗传和生化机制。利用动物模型研究气道反应性的遗传和生化机制。利用动物模型研究气道反应性发生的正常或者异常的过程可以进一步气道反应性发生的正常或者异常的过程可以进

34、一步探讨出生后环境因素对探讨出生后环境因素对AHRAHR的影响。的影响。小结小结 - - 哮喘实验动物模型研究的应用哮喘实验动物模型研究的应用三、为更好地研究哮喘的免疫病理，一系列的动物三、为更好地研究哮喘的免疫病理，一系列的动物模型已被采用。许多动物（如：家兔、绵羊、豚鼠、模型已被采用。许多动物（如：家兔、绵羊、豚鼠、大鼠、猴子、狗、小鼠等）被某一抗原致敏激发后大鼠、猴子、狗、小鼠等）被某一抗原致敏激发后出现肺功能改变（出现肺功能改变（IARsIARs、LARsLARs、气道反应性增加）。、气道反应性增加）。四、虽然动物模型模仿了人类哮喘的很多特点，但四、虽然动物模型模仿了人类哮喘的很多特点

35、，但没有一个模型能完全具有人类哮喘的特征。但在很没有一个模型能完全具有人类哮喘的特征。但在很多方面还是可用动物模型进行研究，包括抗原暴露多方面还是可用动物模型进行研究，包括抗原暴露后的病理变化，各种免疫球蛋白、炎性细胞及介质后的病理变化，各种免疫球蛋白、炎性细胞及介质对气道功能的影响。今后将开展包括对气道功能的影响。今后将开展包括AHRAHR的遗传学研的遗传学研究、正常或异常气道功能发生过程等在内的诸多方究、正常或异常气道功能发生过程等在内的诸多方面的研究。面的研究。 哮喘的临床研究哮喘的临床研究一、人类哮喘自然病程下的临床研究一、人类哮喘自然病程下的临床研究 二、过敏原激发实验以模拟人类哮喘

36、发病二、过敏原激发实验以模拟人类哮喘发病的病理生理过程的病理生理过程 一、人类哮喘自然病程下的临床研究一、人类哮喘自然病程下的临床研究 哮喘自然史研究（流行病学调查）哮喘自然史研究（流行病学调查）Risk factors probably associated with infant wheezing Male gender Low birth weight. Environmental tobacco smoke. Virus infections.Incident Physician Diagnosed Asthma in Norrbotten over 3 Years, 1996-99

37、(n=2,100)At RiskRelative Risk MultivariateMale Sex 51%1.1 0.73-1.8 n.s.Family History 24% 2.8 1.8-4.46 3.3 2.7-3.9Birth weight (2.5kg) 4.2% 1.4 0.52-3.8 n.s.Cat at home ever 38% 0.49 0.28-0.83 0.55 -0.2-1.3*Type I allergy 20.6% 4.9 2.9-8.4 5.5 4.9-6.1 Cat 13.4%7.4 4.3-12 - Dog 8.7% 4.1 2.1-7.69 - *

38、Cat was a significant negative factor if Type I allergy was removed from the analysis. Perzanowski, M., et al. AJRCCM 2002.Reduced prevalence of hay fever, atopy and asthma among farmers children. In Switzerland: Braun-Fahrlnder et al Clin Exp Allergy 1999 In Germany: von Ehrenstein et al, Clin Exp

39、Allergy 2000 In Austria: Riedler et al, Clin Exp Allergy 2000 In Finnland: Kilpelainen et al Clin Exp Allergy 2000 In Canada: Ernst et al, Am J Resp Crit Care Med 2000 In Australia: Downs et al, Clin Exp Allergy 2001 European-wide: Leynaert et al,Am J Respir Crit Care Med 2001Results of a home based

40、 environmental intervention among urban children with asthma. Controlled trial of allergen specific avoidance for one year. Plus one year extension. 937 children age 5-11 in seven US cities Intervention Results Fewer symptom days first and second years (p0.001). Significant decline in dust mite and

41、cockroach allergen (p0.001). Reductions in dust mite and cockroach allergens on bedroom floor significantly associated with reduced complications of asthma. Morgan et al 04 New Eng J Med 351:1068 （一）最大呼气流量（一）最大呼气流量（PEFPEF）监测）监测（二）支气管扩张剂试验（二）支气管扩张剂试验（三）气道激发试验（三）气道激发试验（四）（四）无创性气道炎症指标监测无创性气道炎症指标监测 （五）变

42、应性指标监测：包括血清总（五）变应性指标监测：包括血清总IgEIgE和特异性和特异性IgEIgE测定，过敏原皮肤试验，过敏原吸入激发试验测定，过敏原皮肤试验，过敏原吸入激发试验（六）支气管粘膜活检（六）支气管粘膜活检 2. 2. 哮喘病情评估哮喘病情评估 1 1、血液：嗜酸性粒细胞（、血液：嗜酸性粒细胞（EosEos）计数、嗜酸性粒细胞阳离子）计数、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（蛋白（ECPECP）、嗜酸性粒细胞过氧化酶（）、嗜酸性粒细胞过氧化酶（EPOEPO）、可溶性白细胞）、可溶性白细胞介素介素-2-2受体测定；受体测定；2 2、尿：嗜酸性粒细胞过氧化酶、尿：嗜酸性粒细胞过氧化酶、9 9 ,11

43、,11b b- -前列腺素前列腺素F F2 2、白细胞、白细胞三烯三烯E E4 4；3 3、呼出气体分析：一氧化氮、一氧化碳、碳氢化合物；、呼出气体分析：一氧化氮、一氧化碳、碳氢化合物；4 4、呼吸冷凝物：过氧化氢、白三烯代谢物、硝基酪氨酸、呼吸冷凝物：过氧化氢、白三烯代谢物、硝基酪氨酸5 5、诱导痰：细胞分类尤其、诱导痰：细胞分类尤其EosEos绝对计数、可溶性介质（绝对计数、可溶性介质（ECPECP， 半胱氨酰白三烯等）半胱氨酰白三烯等）。无创性气道炎症指标监测 过敏原激发实验以模拟人类哮喘发病的病理生理过程过敏原激发实验以模拟人类哮喘发病的病理生理过程速发相哮喘反应：特异性支气管激发试验

44、中吸入变应原后数分钟至数十分钟出现的支气管收缩反应。可作为研究哮喘急性发作的模型。迟发相哮喘反应：特异性支气管激发试验中吸入变应原后数小时至24小时出现的与IgE有关的哮喘反应。可作为研究哮喘病气道慢性炎症的模型。 Allergen-induced increases in IL-5 receptora-subunit expression on bone marrowderived CD34+ cells from asthmatic subjectsThe dual responders,but not the isolated early responders, developed a

45、significant increase in methacholine airway responsiveness 24 h after allergen challenge. Allergen-induced increases in IL-5 receptora-subunit expression on bone marrowderived CD34+ cells from asthmatic subjectsIn DR, but not IER asthmatics, a significant increase in the percent of CD34+ cells expre

46、ssing IL-5Ra was detected when pre-allergen bone marrow samples were compared with 24 h post-allergen aspirates.These data suggest that increased expression of IL-5Ra on CD34+ cells favors eosinophilopoiesis and may thus contribute to the subsequent development of blood and tissue eosinophilia, a ha

47、llmark of allergic inflammation. Sehmi et al. JCI, 1997. Allergen-induced fluctuation in CCR 3 expression on bone marrow CD34+ cells from asthmatic subjectsThe number of bone marrow CD34+CCR3+ cells is significantly increased in DR asthmatics who characteristically develop a late-bronchoconstrictor

48、response, sputum and blood eosinophilia and increased methacholine airway responsiveness 24hr after postallergen inhalation. However, a significantly attenuation in the numbers of CD34+CCR3+ cells was observed in ER asthmatics who do not develop a blood eosinophilia and airway responsiveness after p

49、ostallergen inhalation. Sehmi et al. Immunology, 2003. “IL-5 Story” 根据基础研究的结果可以提出假说和指导临床实践。但是动物模型和人体实验的结果并不总是一致的！“IL-5 Story”“Treatment of OVA-challenged animals with anti-IL-5 antibody during the sensitization protocol completely abolished the infiltration of eosinophils into the lung tissue and prevented the development of AHR” Hamelmann E. et al.: Am J Respir Crit Care Med. 1997 and 1999“Monoclonal antibodies directed against IL-5 have been used in at least four studies involving patients with asthma. Those preliminary studies have shown clear