半夏中总生物碱及鸟苷含量动态变化研究-

1、半夏中总生物碱及鸟苷含量动态变化研究陈华国1,2,汤洪波1,周欣1,23,胡晓娜1(1.贵州师范大学天然药物质量控制研究中心,贵州贵阳550001;2.贵州省山地环境信息系统与生态环境保护重点实验室,贵州贵阳550001摘要目的对半夏中总生物碱及鸟苷的含量变化进行动态研究,为半夏的合理采收及G AP 种植提供科学依据。方法分别采用分光光度法和高效液相色谱法对贵州不同产地、不同采收季节、不同海拔高度半夏中总生物碱、鸟苷进行含量测定。结果半夏中总生物碱范围在0.0090%0.0320%,鸟苷范围在0.0004%0.0240%,贵州威宁县10月采收的半夏总生物碱及鸟苷含量最高。结论该研究方法简单快速

2、,结果可靠,可作为G AP 种植半夏药材的质量控制方法。关键词半夏药材;总生物碱;鸟苷;UV;HP LC 中图分类号R 284.1文献标识码A 文章编号0517-6611(201003-01242-03D ynam i c D eterm i n a ti on of A lka lo i d Content and Guanosi n e i n Rhizoma P inellia rerna taCHEN Hua 2guo et a l (The Research Center for Quality Control of Natural Medicine;Guizhou Nor mal

3、University;Guiyang,Guizhou 550001Abstract Objective The study ai med to p rovide scientific basis for reasonable harvest and G AP p lant of Pinellia rernata by dynam ic deter 2m ination of its alkaloid content and guanosine .Method U sing methods of UV and HPLC t o deter m ine alkaloid content and g

4、uanosine in Rhi 2zoma Pinellia rernata at different p laces,seasons and heights .Result The range of alkal oid content in Pinellia ternat was 0.0090%-0.0320%.The range guanosine was 0.0004%-0.0240%.The contents of the t wo chem ical compositi ons were the highest on Oct ober .Conclusion This method

5、has good rep roducibility .It can be used for quality contr ol of G AP p lant for Rhizoma Pinellia ternate .Key words Pinellia ternate ;A lkaloid content;Guanosine;UV;HPLC基金项目贵州省高层次人才科研条件特助经费项目TZJF 22006226;贵州省中小企业局平台建设项目(黔中小发200876号。作者简介陈华国(1981-,男,贵州遵义人,硕士,讲师,从事中药、民族药质量控制以及中药新药研发工作。3通讯作者,博士,教授,E 2

6、mail:alice9800sina .com 。收稿日期2009209221半夏为天南星科植物半夏Pinellia ternata (Thunb .B re 2it .的干燥块茎,具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结之功效,其临床应用十分广泛。研究人员曾对不同居群半夏中2谷甾醇、精氨酸和缬氨酸进行平行比较1,对半夏不同发育期的总生物碱以及炮制方法对半夏质量的影响进行研究2-5。笔者采用平行比较方法对贵州不同产地、不同采收季节、不同海拔高度半夏中总生物碱及鸟苷的含量进行动态比较,为半夏的合理采收及G AP 种植提供部分科学依据。1材料与方法1.1材料普,HP1100高效液相色谱仪,自动进样器,二极

7、管阵列(DAD 检测器。色谱柱为Hy persil ODS 2(大连依利特;K Q 2250B 型超声波清洗器;LDZ420.8型台式离心机;1/100000电子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司。定为天南星科植物半夏Pinellia ternata (Thunb .B reit .的干燥块茎。香草酚蓝标准溶液6,甲醇为色谱纯(美国TE D I A 公司,水为重蒸水,其余试剂为分析纯。1.2方法样器,DAD 检测器,色谱柱为Hy persil ODS 2(大连依利特,流动相为Me OH -0.01%HAC (397,检测波长254n m 。上清液。合并3次超声提取的上清液,水浴浓缩,定容至10.

8、0m l 容量瓶中,过0.45m 滤膜,备用。制成浓度为0.1042mg/m l 的鸟苷标准溶液。分别精密吸取上述标准溶液0.50、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00、3.50、4.50、6.00、7.50m l,置于10.00m l 容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,摇匀,得到不同浓度的标准品溶液。分别用以上各标准品溶液进样,每个浓度进样3次,取峰面积的平均值,以标准品浓度对平均峰面积值进行回归。溶液,进样量10l,重复测定6次。法制备样品溶液,隔0、1.5、2.5、3.5、4.5、5.5、6.5、7.5h 进样1次,进样量10l 。定,平行6份,按供试品制备方法制备样品溶液,每份

9、进样1次,进样10l,计算含量。平行9份,按80%、100%、120%量加入标准品溶液,按供试品制备方法制备成待测的样品溶液,每份样品进样3次,进样量10l 。责任编辑李菲菲责任校对卢瑶安徽农业科学,Journal of Anhui Agri .Sci .2010,38(3:1242-1244的对照品溶液0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9m l于分液漏斗内,补加蒸馏水至1.0m l,加入10.0m l pH值6.0的缓冲溶液,再加入10.0m l氯仿和1.0m l溴麝草酚蓝标准溶液,充分振摇后静置0.5h,分取氯仿层。水层再用氯仿萃取2次,每次10.0m l。合并氯仿层,水

10、浴80以下回收至干,再用氯仿溶解定容至10.0m l。同法制备空白样品,于420n m波长处测定吸收度A。以盐酸麻黄碱的浓度C为横坐标、吸收度A为纵坐标做标准曲线。2结果与分析2.1半夏中鸟苷含量测定结果线性关系考察,得到回归方程为y=33.6710x+9.0321,=0.9998,鸟苷在2.09 31.28mg/m l范围内线性关系良好。精密度试验得,RSD为0.7%,表明仪器精密度良好。稳定性试验结果表明,样品中的鸟苷峰面积在7.5h内稳定,RSD为1.8%。重复性试验得出RSD为1.8%,结果表明重复性良好。回收率试验得出,根据峰面积值及加入的标准品量计算回收率为(100.03±

11、;1.40%,RSD为1.4%,样品含量测定结果见表1、2、3,鸟苷含量动态变化见图1。2.2半夏中总生物碱含量测定结果制得供试品及对照品溶液后,求得标准曲线为y=42.578x+0.0318(= 0.9999,结果表明在pH值6.0时,盐酸麻黄碱浓度在6.0 18.0g/L呈良好的线性关系。其样品中总生物碱含量测定结果见表1、2、3,半夏中总生物碱含量动态变化见图2。3讨论(1半夏的成分比较复杂,生物碱及鸟苷均是半夏药理作用的主要有效成分8,故该研究选用总生物碱和鸟苷含量为考查指标对不同产地、不同采收季节及不同海拔高度的半夏进行试验研究。(2试验结果表明,不同产地半夏中总生物碱及鸟苷含量均不

12、同,其中总生物碱范围在0.0090%0.0320%,高低相差3.5倍多,以贵州威宁10月采收的半夏总生物碱含量最高;鸟苷范围在0.0004%0.0240%,高低相差60多倍,以贵州威宁10月采收的半夏鸟苷含量最高。表1不同产地半夏总生物碱及鸟苷的含量(n=3Table1Tot a l a lka lo i d and the guanosi n e content of d i fferen t Produ2c i n g area s i n P inellia terna te编号Code产地来源Pr oducingarea res ource采收时间Harvestti m e总生物碱%T

13、 otalalkal oid鸟苷%Guano2sine表2贵州省赫章县不同海拔高度半夏总生物碱及鸟苷的含量(n=3 Table2Tot al a lka lo i d and the guanosi n e con ten t of di fferen t altitudesi n P inellia terna te w ith Gui zhou provi n ce Hezhang county编号Code产地来源Pr oducingarea res ource海拔高度mA ltitudeheight总生物碱%T otalalkal oid鸟苷%Guano2sine表3贵州省威宁县不同采收

14、时间半夏总生物碱及鸟苷的含量(n=3 Table3Tot al a lka lo i d and the guanosi n e content of d i fferent s ampli n g ti m e i n P inellia terna te w ith Gui zhou provi n ce W ei n i n gcoun ty 编号Code产地来源Pr oducingarea res ource采收时间Harvestti m e平均总生物碱含量%Average t otalalkal oid content平均鸟苷含量%Average guano2sine content

15、注:每个采收时间在贵州省威宁县半夏规范管理种植基地取10采样点,每个采样点样品测定3次。Note:Each harvest ti m e takes10sa mp ling points at Pinellia ternate stand2 ard manage ment planting base inWeining County,Guizhou Pr ovince,Each sa mpling point measured three ti m es.342138卷3期陈华国等半夏中总生物碱及鸟苷含量动态变化研究 图1半夏鸟苷含量动态变化F i g .1The dynam i c of a

16、 lkalo i d content i n P inellia terna te图2半夏总生物碱动态变化F i g .2The dynam i c changes of guanosi n e con ten t i n P inelliaterna te(3不同海拔高度半夏中总生物碱及鸟苷的含量也存在差异,以贵州赫章产半夏为例,海拔1700m 生长的半夏中总生物碱含量是海拔1500m 生长的半夏的1.3倍;海拔1200m 生长的半夏中鸟苷含量是海拔1500m 生长的半夏的2.4倍。(4半夏总生物碱的含量的动态变化在812月这段时间是先下降然后上升再下降的过程,这可能与半夏的栽培有关系,因为

17、半夏的种植经过“3次倒苗”9,在第3次倒苗时采集的半夏样品的总生物碱的含量较高。(5上述试验结果表明,半夏的鸟苷含量在10与11月之交达到最高值,所以应该在10与11月之间选择天气晴朗的时间采收半夏。参考文献1郭巧生,段金廒,贺善安,等.半夏不同居群3种化学成分的动态比较研究J .中国中药杂志,2001,26(5:296-299.2修彦凤,杨守娟,张永太.姜半夏质量标准的研究J .中华中医药杂志,2007,22(2:87-89.3姜舜尧,田颂九,刘琼,等.用2种高效液相色谱分离模式分析测定半夏露糖浆中麻黄碱、伪麻黄碱成分J .药物分析杂志,2005,25(5:487-489.4吴皓,文红梅,郭

18、戎,等.半夏姜制对鸟苷含量的影响J .中国中药杂志,1998,23(11:661-663.5李西文,马小军,宋经元,等.半夏不同生长发育时期总生物碱含量动态变化的研究J .中国中药杂志,2006,31(8:687-688.6国家药典委员会.中国药典,一部M .北京:化学工业出版社,2005:100.7于超,张明,王宇,等.栽培、野生及不同产地半夏总生物碱测定J .中国中药杂志,2004,29(6:583-584.8李玉先,刘晓东,朱照静.半夏药理作用的研究述要J .辽宁中医学院学报,2004,11(6:459-460.9陆善旦,胡廷松,陈振杰.名贵中药材高产栽培技术M .南宁:广西科学出版社,

19、1990:130-136.(上接第1228页表1回流提取与超声波提取结果Table 1The results of reflux extracti on and ultra son i c extracti on方法Extracti onmethod 溶剂S olvent温度Te mpe 2rature 液固比L iquid 2s olid rati o 时间h Ti m e 提取率%Extracti onrate 超声波提取76%乙醇50410.58.52U ltras onic extracti on热回流提取Hot reflux extracti on作。结果表明,芦丁加标回收率达96.

20、65%105.85%,平均回收率为100.07%,相对标准误差为2.64%。由此可知,采用该方法对绿茶中总黄酮进行定量分析是可行的,结果可靠。2.6样品测定选取5个四川产绿茶样品,按“1.2”测定总黄酮含量。由表2可知,与贵州产绿茶3中总黄酮类含量相比较,川产绿茶含量较高。因此,值得进一步开发四川产绿茶。参考文献1周正邦.黔西南州茶叶开发的优势与可持续发展战略J .贵州农业科学,1998,26(4:51-53.2李任强,吴志炜.茶、红茶、银杏叶的黄酮类物质的比较分析初报J .福建茶叶,1997(3:30-31.表2样品测定结果Table 2The results of d i fferen t s am ples产地Place of origin名称Sa mp les na me总黄酮含量mg/gt otal flavonoid