三聚氰胺检测方法

1、MARS-HPLC测定不同基质中的三聚氰胺摘要：MARS(Multi-adsorption Reverse SPE) 样品前处理方法是一种快速、简便、安全、成本低廉的样品前处理分析方法，将该方法用于奶制品、鸡蛋和鱼肉等不同样本中的三聚氰胺的提取，主要步骤是使用0.1M的盐酸、6%的磺基水杨酸和混合型阴离子交换树脂（Cleanert PAX）在离心管中同时进行蛋白沉淀和基质分散固相萃取，取离心上清液过滤后用于HPLC测定。本文对MARS方法用于不同样品前处理的稳定性和可靠性进行了分析和评价，结果表明MARS-HPLC方法用于不同样品中三聚氰胺的检测具有简便、快捷、准确的优点，适合大批量样品的测定

2、。关键词：三聚氰胺；MARS；混合型阴离子交换树脂；强阳离子交换色谱柱1 实验部分1.1 仪器与试剂      仪器：L6-1 系列高效液相色谱仪（北京普析通用公司），三聚氰胺检测样品前处理方法包：（包括盐酸0.1 mol/L，6% 磺基水杨酸，混合型阴离子交换填料Cleanert PAX，（北京艾杰尔科技有限公司）；Venusil SCX-M，5m,4.6×250mm 强阳离子交换色谱柱（科技部“十一五”国家支撑计划成果，北京艾杰尔科技有限公司）及保护柱；针式过滤器（Agela Clarify，0.22/0.45µ

3、;m，尼龙）；三聚氰胺标准品（>99%），均质器（T25 Basic，IKA）。试剂：所用乙腈为色谱纯；磷酸二氢钾为分析纯；水为超纯水。1.2 色谱条件色谱柱：Venusil SCX-M色谱柱，4.6×250mm,5m,300 Å；（科技部“十一五”国家支撑计划成果，北京艾杰尔科技有限公司）；流动相：磷酸二氢钾（0.050mol/L）：乙腈=70：30；流速：1.5mL/min；柱温：室温；波长：240 nm；实验中若非特别注明，进样量均为20L。1.3 三聚氰胺标准曲线工作液的配制1.3.1 三聚氰胺标准贮备溶液：1.00×103 mg/L。称取100 m

4、g 三聚氰胺标准物质（准确至0.1 mg），用水完全溶解后，用水定容至100 mL，混匀。1.3.2 标准工作溶液1.3.2.1 标准溶液A：2.00 ×102 mg/L。准确移取20.0 mL 三聚氰胺标准贮备溶液（1.3.1），置于100 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，待用。1.3.2.2 标准溶液B：0.50 mg/L。准确移取0.25 mL 标准溶液A（1.3.2.1），置于100 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，待用。1.3.2.3 标准工作液的配制按表1 分别移取不同体积的标准溶液A（1.3.2.1）于容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，0.45m滤膜过滤，待测

5、。按表2分别移取不同体积的标准溶液B（1.3.2.2）于容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，0.45m滤膜过滤，待测。表1 标准工作液配制（高浓度）标准溶液A体积(mL)0.10.251.001.255.0012.5定容体积(mL)100100100505050标准工作液浓度(mg/L)0.200.502.005.0020.050.0表2 标准工作液配制（低浓度）标准溶液B体积(mL)1.002.004.0020.040.0定容体积(mL)100100100100100标准工作液浓度(mg/L)0.0050.010.020.100.201.4 试样的制备1.4.1 牛奶样品 &

6、#160;    取15.0g牛奶置于25mL容量瓶中，加入0.1mol/L 盐酸10mL，加入6% 磺基水杨酸3.0 mL， 混合型阴离子交换树脂1.0g（Cleanert PAX），用0.1mol/L 盐酸定容至25mL，涡旋振荡2min，8000 r/min离心5min，取上清液过0.45m的滤膜后进液相分析。1.4.3 鸡蛋样品      取10.0g混合均匀的鸡蛋置于25mL容量瓶中，加入0.1mol/L 盐酸10mL，均质后全部转入25mL容量瓶，加入6% 磺基水杨酸3.0mL，混合型阴离子交换树脂1.

7、0g（Cleanert PAX），用0.1mol/L 盐酸定容至25mL，涡旋振荡2min，8000 r/min离心5min，取上清液过0.45m的滤膜后进液相分析。1.4.4 鱼肉样品      取5.0g剁碎的鱼脊背肉，加入0.1mol/L 盐酸10mL，均质后全部转入25mL容量瓶，加入6% 磺基水杨酸3.0 mL，混合型阴离子交换树脂1.0g（Cleanert PAX），用0.1mol/L 盐酸定容至25mL，涡旋振荡2min，8000 r/min离心5min，取上清液过0.45m的滤膜后进液相分析。2、结果与讨论2.1 线性范围

8、60;     低浓度曲线取0.005mg/L, 0.01mg/L, 0.02mg/L, 0.1mg/L, 0.2mg/L 5个浓度的标准样品测试，所得标准曲线如下图：图1 低浓度标样线性      高浓度曲线取0.2mg/L, 0.5mg/L, 2mg/L, 5mg/L, 20mg/L, 50mg/L 6个浓度的标准样品测试，所得标准曲线如下图：图2 高浓度标样线性      结果表明：本方法在0.005mg/L 50.0mg/L和范围内，三聚氰胺峰面积

9、和浓度有良好的线性关系2.2 重复性      取浓度为5mg/L的标准品溶液，分别进样20L，进样6次，计算保留时间及峰面积的RSD（相对标准偏差）。结果列于表3中表3 保留时间和峰面积的重现性（精密度）1#2#3#4#5#6#平均值RSD%保留时间min6.8176.8336.8176.8176.8586.8086.8250.26峰面积Au·s5713605744925698135721875745255755935729950.39图3 重复性谱图从表3和图3看出，该方法结果重复性良好。2.3 检出限  &#

10、160;   以曲线最低点0.005mg/L的谱图（见图4）为准，以噪声对应峰高估算检出限为0.0032mg/L (S/N=3)。 图4 检出限谱图2.4 实际样品测试2.4.1 牛奶样品2.4.1.1空白牛奶样品测试谱图如图5：图5 空白牛奶样品谱图2.4.1.2 牛奶加标回收率      分别在空白牛奶样品中加入相当于1.0mg/Kg，5.0mg/ Kg和10.0mg/ Kg的三聚氰胺标准品，测试谱图如图6所示。图6牛奶中添加不同浓度的三聚氰胺谱图      根据此谱图测

11、得三聚氰胺的加标回收率如表4所示表4  牛奶中三聚氰胺加标回收率试验结果样品名称加标量（mg/Kg）测得量（mg/ Kg）回收率（%）牛奶空白0.00 -1#1.001.05105.0%2#5.005.18103.6%3#10.009.0490.4%      结果表明，MARS前处理方法对牛奶中三聚氰胺提取具有良好的回收率，杂质去除效果好；HPLC分析中三聚氰胺和杂质分离良好。2.4.2  鱼肉样品2.4.2.1 空白鱼肉样品测试谱图如图7：图7 空白鱼肉样品谱图2.4.2.2  鱼肉样品加标回收率 &

12、#160;    分别在空白鱼肉样品中加入相当于1.0mg/kg、5.0mg/kg和10.0mg/kg的三聚氰胺标准品，测试谱图如图8和图9所示。图8 鱼肉中添加三聚氰胺1.0 mg/kg谱图图9  鱼肉中添加三聚氰胺10.0 mg/kg谱图根据此谱图测得鱼肉中三聚氰胺加标回收率如表4所示表5  鱼肉中三聚氰胺样品加标回收率试验结果样品名称加标量（mg/kg）测得量（mg/kg）回收率（%）鱼肉空白0.00 -1#10.9898.0%3#55.81116.2%5#109.6796.7%     

13、 结果表明，MARS前处理方法对鱼肉中三聚氰胺提取具有良好的回收率，杂质去除效果好；HPLC分析中三聚氰胺和杂质分离良好。2.4.3 鸡蛋2.4.3.1空白鸡蛋样品测试谱图如图10所示：图10 空白鸡蛋样品谱图2.4.1.2 鸡蛋加标回收率      分别在样品中加入相当于1.0mg/Kg，5.0mg/ Kg和10.0mg/ Kg的三聚氰胺标准品，测试谱图如图11所示。图11 鸡蛋中添加三聚氰胺5.0 mg/kg      鸡蛋中三聚氰胺的加标回收率如表6所示表6  鸡蛋中三聚氰胺加标

14、回收率试验结果样品名称加标量（mg/kg）测得量（mg/kg）回收率（%）鸡蛋空白0.00 -1#10.8989.0%3#55.55111.0%5#1010.48104.8%      结果表明，MARS前处理方法对鸡蛋中三聚氰胺提取具有良好的回收率，杂质去除效果好；HPLC分析中三聚氰胺和杂质分离良好。3 结论      上述实验结果表明，采用MARS样品前处理方法，以混合型阴离子交换填料Cleanert PAX作为萃取介质，可以快速准确的处理牛奶、鱼肉和鸡蛋样本，同时使用阳离子交换色谱柱进行

15、HPLC分析，整个分析方法应用于不同样品中三聚氰胺的检测，具有检测限低，精密度高，线性范围宽和回收率高等优点，完全可以满足三聚氰胺的快速检测要求。三聚氰胺标准贮备溶液：1.00×10 mg/L。 称取100mg 三聚氰胺标准物质（准确至0.1mg），用水完全溶解后，100 mL 容量瓶中定容至刻度 ， 混匀，4条件下避光保存，有效期为1个月。 标准工作溶液：使用时配制。 标准溶液A：2.00×10 mg/L。 准确移取20.0 mL 三聚氰胺标准贮备溶液（4.5），置于100mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀 。 标准溶液B：0.50mg/L。 准确移取0.25mL 标准溶液A（4.6.1），置于100mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。 按表1 分别移取不同体积的标准溶液A（4.6.1）于容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。按表2 分别移取不同体积的标准溶液B（4.6.2）于容量瓶中，