一节细胞因子检测概述ppt课件

1、 第一节 细胞因子检测概述一、细胞因子的类型与作用特点二、细胞因子检测的特点与方法 由非神经内分泌细胞产生的一大类与免疫应对活动亲密相关的低分子蛋白与多肽。细胞因子细胞因子的类型与作用特点细胞因子的类型与作用特点1、细胞因子的分类2、细胞因子的作用特点以生物学作用进展划分的分类以生物学作用进展划分的分类白细胞介素Interleukin IL-1、IL-2、 IL-18干扰素Interferon IFN-、IFN-、IFN-肿瘤坏死因子Tumor necrosis factor TNF- 、 TNF- 集落刺激因子Colony-stimulating factor M-CSF、G-CSF转化生长

2、因子Transforming growth factor TGF- 趋化因子Chemokine IL-8、GROs、MCP-1生长因子Growth factor EGF、FGF、IGF、PDGFTNFsILsIFNsTGFsChemokinesCSFs各类细胞因子间关系各类细胞因子间关系1、旁分泌paracrine、自分泌autocrine性2、多源与同源性3、高效性4、多效性pleiotropy5、丰余性redundancy6、协同性7、拮抗性8、网络性细胞因子细胞因子细胞因子受体细胞因子受体细胞因子的自分泌与旁分泌性细胞因子的自分泌与旁分泌性 I L-2 I FN- TNF-细胞因子的同源

3、性与多源性细胞因子的同源性与多源性I FN-T细胞T细胞NK细胞IL-4Th细胞肥大细胞Th细胞B细胞细胞因子的多效性细胞因子的多效性Th细胞B细胞细胞因子的丰余性细胞因子的丰余性IL-2IL-4IL-5Th细胞B细胞细胞因子的协同性细胞因子的协同性IL-4IL-5Th2细胞B细胞细胞因子的拮抗性细胞因子的拮抗性Th1细胞IL-4 I FN- 细胞因子的网络性细胞因子的网络性IL-3、IL-5、IL-4、IL-6、 GM-CSFTNF TGF IL-1 IFNIL-1 IFNTNFIL-1 TGFIFNIL2 IL-4IFN IL2 IL-4 IL-5 IL-6TNF IFN IL-1 TGF

4、TNF IL-1 IFN IL-5 GM-CSF G-CSF M-GSFTNFTNF IL-1 TGFIL-1 IL-6 GM-CSF G-CSF M-GSF IL-1 IL-6IL-1 IL-6 GM-CSF G-CSF M-GSF IFN内皮细胞成纤维细胞TB细胞因子检测的特点与方法细胞因子检测的特点与方法1、检测的特点2、检测的方法 细胞因子检测的特点细胞因子检测的特点免疫原性较弱样品含量低样品具有时效性生物效应特异性差细胞因子检测的方法细胞因子检测的方法免疫学检测方法抗原性检测细胞生物学检测方法生物活性检测分子生物学检测方法基因表达检测 第二节 细胞因子检测的方法与原理一、细胞因子的细

5、胞生物学检测二、细胞因子的免疫学检测三、细胞因子的分子生物学检测细胞因子的细胞生物学检测细胞因子的细胞生物学检测1、检测方法与原理2、检测中的操作留意要点 检测方法与原理检测方法与原理细胞增殖或增殖抑制实验细胞病变抑制实验细胞毒实验细胞趋化实验滤膜：计数受趋化细胞趋化因子细胞趋化实验原理表示趋化实验原理表示检测中的操作留意要点检测中的操作留意要点靶细胞的选择与培育检测标本的制备显示检测结果靶细胞的选择与培育靶细胞的选择与培育1、对所测的细胞因子有特异的敏感性2、易培育、保管、生物学特性稳定3、有良好的生长形状4、种属适配各类细胞因子检测的常用靶细胞各类细胞因子检测的常用靶细胞细胞因子 实验系统

6、 干扰要素IL-1 D10M增殖法 IL-2、IL-4 EL-4M增殖法 IL-4 A352H增殖抑制法IL-2 CTLLM增殖法 IL-4IL-3 KG-1H增殖法 TF-1H增殖法 GN-CSF、IL-5 IL-6、EPOIL-4 CTLLM增殖法 IL-2IL-5 BCL-1M增殖法 IL-4各类细胞因子检测的常用靶细胞各类细胞因子检测的常用靶细胞细胞因子 实验系统 干扰要素IL-6 B9M增殖法 IL-4、IL-11 BM60H增殖法 IL-7 Clone-IXN/2bM增殖法 IL-8 中性粒细胞M、H趋化法GM-CSF TF-1H增殖法 IL-3、IL-5 IL-6、IL-5TNF

7、/ L929 M、H细胞毒法IFN wishH病变维护法 IFN- 、 IFN- L929M病变维护法 IFN- 、 IFN- 检测标本的预备检测标本的预备1、分别特定的产生细胞2、对产生细胞进展诱导、激活3、选择适当的搜集时间显示检测结果显示检测结果1、细胞增殖形状的显示： 放射性核素掺入法、 胞内酶活性显示法 活细胞染色法 细胞荧光测定法2、细胞毒或细胞病变形状的显示 活细胞染色法 胞内酶活性显示法 DNA断片测定法细胞因子的免疫学检测细胞因子的免疫学检测分泌型细胞因子的检测细胞内细胞因子的检测ELISPOT细胞内细胞因子检测技术细胞内细胞因子检测技术激活膜抗原标志细胞内细胞因子标志细胞因

8、子的分子生物学检测细胞因子的分子生物学检测原位杂交技术Rt-PCR技术 第三节 常用细胞因子的检测方法一、IL-2的检测二、IFN-的检测三、TNF的检测待检样品细胞上清 指示细胞CTLL-2按不同稀释度参与37C，16-20小时参与3HTdR1-5Ci37C，4-6小时搜集细胞测定白细胞介素白细胞介素-2-2的测定表示图的测定表示图待检样品细胞上清 指示细胞L929按不同稀释度参与37C，4小时37C，24-48小时弃取上清，参与VSV察看细胞病变镜检或比色干扰素的测定表示图干扰素的测定表示图肿瘤坏死因子的测定表示图肿瘤坏死因子的测定表示图待检样品细胞上清 指示细胞L929按不同稀释度参与37C，24小时弃取上清，洗涤参与结晶紫染液，洗涤参与细胞裂解液，比色 第四节 细胞因子受体的检测一、细胞因子受体的类型二、细胞因子受体的检测 细胞因子受体的类型膜型细胞因子受体分泌型