脓汁和粪便标本中病原菌的检测-6

1、半固体培养物半固体培养物4 4支，药敏试验培养物支，药敏试验培养物4 4个，微量发酵管培养物个，微量发酵管培养物1 1套。套。器材准备器材准备脓汁和粪便标本中病原菌的检测脓汁和粪便标本中病原菌的检测实验流程实验流程(6(6次课次课1212学时）学时）培养基的制备细菌的分离培养细菌的纯培养细菌的形态学检查细菌的生化试验等细菌的血清学试验、结果分析实验论文撰写医学微生物学实验综合性实验一v脓汁和粪便标本中病原菌的检测（六）药敏实验结果分析糖发酵、动力实验结果分析玻片凝集试验高压蒸汽灭菌细菌综合性实验总结实验报告撰写 细菌感染的检查方法和防治原则（录像）洗刷药敏试验结果用尺子量抑菌圈直径（单位毫米）

2、用尺子量抑菌圈直径（单位毫米）常用药敏试验纸片判断标准常用药敏试验纸片判断标准P P2121抗菌药物 纸片含药量 抑菌圈直径(mm) 耐药 中度敏感 敏感青霉素G(葡萄球菌) 10单位 28 - 29先锋霉素 30微克 14 1517 18庆大霉素 10微克 12 1314 15链霉素 10微克 11 1214 15四环素 30微克 14 1518 19氯霉素 30微克 12 1317 18磺胺 300微克 12 1316 17药敏试验结果分析（录入）药敏试验结果分析（录入）青霉素先锋霉素庆大霉素金黄细菌白色细菌紫黑细菌粉红细菌 注：耐药，中度敏感，敏感。抗菌素药敏试验纸片法结果vG+球菌对青

3、霉素和先锋霉素敏感。 vG-杆菌对青霉素耐药，对先锋霉素 敏感。vG+球菌和G-杆菌对广谱抗菌素庆大霉素都敏感。糖发酵、动力试验结果判断反应现象结果描述符号培养基变黄色无气泡分解糖产酸不产气+培养基变黄色有气泡分解糖产酸又产气培养基不变色不分解糖-细菌扩散生长,培基混浊细菌有鞭毛+沿接种线生长,培基清澈透明细菌无鞭毛-糖发酵试验结果微量发酵管水平放置，观察结果。半固体穿刺培养结果半固体并列，对光上下移动上下移动至合适观察位置，观察结果。肠道杆菌科各菌属生化反应鉴别表肠道杆菌科各菌属生化反应鉴别表 葡萄糖 乳糖 麦芽糖 甘露醇 蔗糖 半固体埃希菌属 +志贺菌属 + +/- -/+ -沙门菌属 /

4、+ - - + 霍乱弧菌 + - + + + +变形杆菌属 - - +注： + 产酸或阳性， 产酸产气，- 阴性， +/- 多数阳性， -/+ 多数阴性 不确定。常见肠道感染细菌主要生化反应特征常见肠道感染细菌主要生化反应特征 葡萄糖 乳糖 半固体（动力）v大肠埃希菌 + v福氏志贺菌 + - -v伤寒沙门菌 + - +v霍乱弧菌 + - + v幽门螺杆菌 不分解糖类 +v变形杆菌 - +产酸能迅速杀死该菌。 细菌生化反应结果分析细菌生化反应结果分析( (结果录入）结果录入） 甲、乙紫黑 丙、丁粉红组号葡萄糖 乳糖半固体葡萄糖乳糖半固体12345678910结果细菌生化反应结果分析细菌生化反应

5、结果分析( (妇幼、病理）妇幼、病理） 甲、乙紫黑 丙、丁粉红组号葡萄糖 乳糖半固体葡萄糖乳糖半固体1+-2+-+3+-4+-5+-6+-7+-8+-9+-10-+结果细菌生化反应结果分析细菌生化反应结果分析( (预防预防-2-2） 甲、乙紫黑 丙、丁粉红组号葡萄糖 乳糖半固体葡萄糖乳糖半固体1+-2+-3+-6+-7+-8+-结果实验结果错误的分析v纯培养时，菌落挑错了、不是单菌落、CFU。v无菌操作不严格，污染杂菌。v接种时未协调好，接种错误。玻片凝集试验玻片凝集试验 Slide Agglutination TestSlide Agglutination Testv在适量电解质存在的情况下

6、，颗粒性抗原(细菌)与特异性抗体结合，如果比例合适，则出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。取洁净的载玻片一张，将磨面近端近端设为对照区，滴加生理盐水15ul。远端远端设为试验区，滴加福氏志贺菌福氏志贺菌诊断血清15ul，用接种环分别取粉红色菌苔，约12个小菌落的菌量，研磨于盐水或血清内，混合均匀。载玻片来回倾侧，让菌液充分混 匀，凝集速度更快、结果更清楚。菌液凝集者记为阳性，菌液均匀混浊记为阴性。研磨成直径810mm的一层薄菌膜。玻片凝集结果判定玻片来回倾侧玻片来回倾侧数次，肉眼观数次，肉眼观察；察；23分钟分钟内仍不出现凝内仍不出现凝集者集者,可认为可认为阴性阴性()。;菌液混菌液混浊，少量

7、絮浊，少量絮状状,25%凝集凝集,阳性阳性()。;菌液轻菌液轻度混浊度混浊,絮状絮状凝集块较小凝集块较小,阳性阳性()。;菌液澄菌液澄清清,有明显絮有明显絮片片,75%凝集凝集,阳性阳性()。生物安全警告v本次实验操作，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。v气溶胶粒径100um沉降很快,50um在0.4s内扩散开,5um通过呼吸道直接到达肺泡。vPike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。v实验时应坐着，在火焰周围1020厘米内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。灭菌 药敏试验平板、动力试验半固体琼脂、微量糖发酵管高压蒸

8、汽灭菌 ! 器材收摊入柜前，接种环，接种针必须再次烧灼灭菌！综合性实验一综合性实验一 实验总结实验总结 v采用平板划线分离法，从浓汁标本中分离出金黄色和白色两种菌落。显微镜下，这两株细菌均为G+球菌，排列不规则，呈葡萄串状，是典型的葡萄球菌；结合菌落或菌苔颜色，这两株葡萄球菌分别是金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌。通过血浆凝固酶试验鉴别，金黄色葡萄球菌是致病菌。v用伊红美蓝平板，从粪便标本中分离出紫黑色具有金属光泽和粉红色半透明菌落。紫黑色菌落是能分解乳糖的大肠埃希菌。粉红色菌落是不能分解乳糖的致病菌。显微镜下，它们都是G-杆菌，散在排列，从形态上不能鉴别是什么细菌。经糖发酵试验，半固体动力试验，

9、血清学试验结果鉴定，它们分别是大肠埃希菌和福氏志贺菌。脓汁和粪便标本细菌检测结果脓汁和粪便标本细菌检测结果标本标本菌落菌落形态形态血浆血浆凝固酶凝固酶葡葡 乳乳 半半福痢福痢血清血清青青 链链庆庆结论结论金黄G+球 +金黄色葡萄球菌脓汁白色G+球-+白色葡萄球菌紫黑 G杆 +-+大肠埃希菌粪便粉红 G杆+-+-+福氏志贺菌细菌鉴定的原则及基本方法v必须用纯的细菌培养物作鉴定。因为不同的细菌生化反应结果相差较大，而反应结果是以阳性或阴性表示的，一旦用混合菌做生化反应，结果不可分析。v鉴定试验的选择：测定细菌的实验方法很多，根据鉴定目的选择适当的试验项目，既能完成鉴定，项目又尽可能少。一般考虑以下

10、几个问题。选择有价值的试验：鉴别两种细菌选择的试验应该其一为阳性，另一为阴性，且阳性和阴性的概率大于90%。否则，试验无鉴别价值。选择快速简便的试验。因为是常规实验室，选择的方法应快速方便，如鞭毛染色、氧化酶、凝固酶等应为首选方法。鉴定一种细菌如果有几种特异方法,只选一两种,多选无价值。测定细菌的一种生物特性可能有几种不同方法。应该了解所用方法的敏感性，否则会导致错误的鉴定。思考题v如果细菌生化反应结果不佳，原因何在?v报告纸片法药敏试验结果，是否符合你所鉴定的细菌的药敏特性?v玻片凝集试验观察完毕，应将载玻片立即放入消毒缸内，为什么?v怎么设计一个实验，对伤寒沙门菌进行分离和鉴定? 染色镜检

11、生化反应血清学鉴定双糖铁培养基增菌培养血、骨髓挑取可疑菌落SS琼脂、EMB平板分离培养粪便常见肠道致病菌的检查程序常见肠道致病菌的检查程序P48P48v伤寒沙门菌的分离培养标本的采集与病程的关系：第1周取外周血，第1-3周取骨髓液，第2周以后取粪便和尿液。血液和骨髓液：先增菌培养，然后再用血琼脂平板、巧克力琼脂平板、SS琼脂、EMB平板分离单菌落。粪便：可直接接种于选择鉴别培养基，如SS琼脂、EMB平板分离单菌落。取血量：一般以肉汤培养基的1/10为宜。常规方法为用培养基50ml,取血510ml,注入培养瓶中。骨髓为12ml。 v细菌的纯培养必须用纯的细菌培养物作鉴定v形态与染色：革兰阴性杆菌

12、，有周鞭毛。v动力学试验：细菌自接种部位向四周移动、扩散生长，培养基呈云雾状混浊状态。 v生化反应：分解葡萄糖只产酸不产气 ，不发酵乳糖。v血清学反应：主要有O和H两种抗原。伤寒沙门菌还有Vi抗原。对沙门菌属的型和亚型鉴定有重要意义。玻片凝集试验：定性鉴定细菌纯培养物。肥达反应：用已知伤寒沙门菌菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原和甲、乙型副伤寒菌H抗原与患者血清作试管凝集试验（定量），检测有无相应抗体及其效价，以辅助诊断伤寒或副伤寒。 正常值：一般是伤寒沙门菌O抗体的凝集效价1：80，H抗体凝集效价1：160，副伤寒沙门菌H抗体凝集效价1：80才有诊断价值。 动态观察：动态观察：若效价逐次递增或恢

13、复期效价比初期4倍者更有意义。实验报告v电子版v题目v年级专业，学号，姓名v实验目的v实验器材v方法与步骤v结果与讨论以多数人多数人的实验结果为基础。从2种标本获得4种菌的实验结果（综合性实验一） 。讨论是对实验结果的分析，应客观、严谨，围绕主题，突出重点。结论应该明确。v备注：请课代表将实验报告按实验室（授课老师）打包，直接发送发给授课老师或 。如何撰写科研论文v不论人们是否完全赞成“要么发表、要么销毁”的格言，但毫无疑问，科学研究的目的就是要把研究成果发表出来。一般来说，评价科学工作者的工作，主要不是看他们在实验室内灵巧的操作，也不是看他们在广阔或狭窄的科学领域内掌握知识的多少，也不是看他

14、们的智能或魅力，而主要是根据他们所发表的文章来估量。他们可能由此而成名，或仍然默默无闻。因此，写出能充分展示自己工作、引起同行注意的论文是一个科研工作者必备的素质。 v一项科学实验，不论它的结果多么惊人，只有到它发表出来时才算完成。因此对科学工作者来说，他不仅必须“研究”科学，而且必须把科研成果“写”出来。要写好一篇科学论文，作者必须准确地知道他要写的是什么以及为什么要这么写。v科学论文是叙述原始研究结果而写成并发表的报告。具体地说，一篇公认的原始科学论文，必须是首次公布的，它应提供足够的资料，以使同行们能够：(1)评价观察到的结果；(2)重复实验；(3)评价推理过程，而且原始科学论文还必须能为人们所接受，基本上可供科学界永久地、不受限制地利用，要有严密的思维特性、逻辑性、清晰性和准确性。 v科研论文内容P57标题 摘要引言材料与方法结果讨论参考文献Thank you !Thank you !试管用毛刷，试管用毛刷，上下、旋转刷洗上下、旋转刷洗内壁和管底。内壁和管底。字迹用湿纱布，字迹用湿纱布，粘去污粉擦拭。粘去污粉擦拭。管口朝向相同，管口朝向相同，流水冲洗流水冲洗1010次。次。洗干净的试管，洗干净的试管，倒扣在筐内，晾干。倒扣在筐内，晾干。平皿用纱布，旋转擦平皿用纱布，旋转擦拭内外侧，字迹用纱拭内外侧，字迹用纱布粘去污粉擦拭。布粘去污粉擦拭。流水