欧洲药典 透明质酸

1、透明质酸钠玻璃酸钠定义 透明质酸的钠盐，由D-葡糖醛酸和N-乙酰基-D-葡糖胺双糖单位组成的葡萄糖胺聚糖。它是从鸡冠中提取的或由链球菌发酵获得，兰斯场小组A和C.含量：95.0105.0（干燥品）。特性粘度：标签上所述的数值为90% 120%。生产 在适用情况下，透明质酸钠的动物来源必须满足该动物适于人类食用对健康的要求。 当通过革兰氏阳性菌发酵生产时，过程中必须证明可减少或消除热源或细胞壁上的炎症。特征外观：白色或类白色，吸湿性粉末或纤维状聚合物。溶解性：微溶或可溶于水，几乎不溶于丙酮和无水乙醇。鉴定A.红外吸收分光光度法（2.2.24）。对比：欧洲药典。透明质酸钠的参考光谱。B.使钠反应（

2、2.3.1）。试验溶液S. 称量0.10g待检查干燥物，添加30.0毫升9g/ L的氯化钠溶液轻轻振荡直至溶解（约12小时）。溶解性 溶液S是清晰透明的（2.2.1）和其在600nm的吸光度不大于0.01（2.2.25）。pH值（2.2.3）：5.0-8.5。 溶解物质在无二氧化碳水R中检验，以期获得每毫升含有5毫克的干燥物的溶液。特性粘度: 透明质酸钠是非常吸湿性的, 称重期间必须防潮。 缓冲液（0.15M氯化钠于0.01M pH7.0的磷酸缓冲液中）。溶解0.78克的磷酸二氢钠R和4.50克氯化钠R于R水中且用相同溶剂稀释至500.0毫升（溶液A）。溶解1.79克氯化钠R于R水中且用相同溶

3、剂稀释至500.0毫升（溶液B）。混合溶液A和B，直至pH为7.0为止。通过烧结玻璃滤波器（4）进行过滤（2.1.2）。试品溶液（a）：称取0.200克（m0p）（注：此值仅作参考，试品溶液（A）的粘度初步测量后，应进行调整）该物质进行检查，用50.0克缓冲液（m0S）在4稀释。将溶液在4震动24小时混合。称取5.00g溶液（m1P），在25左右用100.0克缓冲液（m1S）稀释。震动20分钟，混合该溶液。通过烧结玻璃滤波器（100），（2.1.2）过滤溶液，并弃去前10毫升。试品溶液（b） 称量30.0克试品溶液（a）（m2P），用10.0g（m 2S）缓冲溶在25稀释。振荡20分钟，混合该

4、溶液。通过烧结玻璃滤波器（100），（2.1.2）过滤溶液，并弃去前10毫升。试品溶液（c）。称重20.0g试品溶液（a）（m3P），并用20.0g的缓冲溶液（m3S）在25稀释。振荡20分钟，混合该溶液。通过烧结玻璃滤波器（100），（2.1.2）过滤溶液，并弃去前10毫升。试品溶液（d）。称重10.0g试品溶液（a）（m3P），并用30.0g的缓冲溶液（m3S）在25稀释。振荡20分钟，混合该溶液。通过烧结玻璃滤波器（100），（2.1.2）过滤溶液，并弃去前10毫升。在25.00±0.03确定缓冲溶液（T0）和为4种试验溶液（T1，T2，T3和T4）的溢流时间（2.2.9）。使

5、用适当的悬浮水平粘度计（规格：粘度计常数为约0.005mm2 / s2，运动粘度为1-5mm2/s，管的内直径为R0.53毫米，球泡体积为C 5-6毫升，管内径N2.8-3.2毫米。）与漏斗形下部毛细管末端。使用相同的粘度计对于所有测量;溢流时间均测定三次。测试结果与平均值相差不超过0.35%，并且如果溢流时间t1不小于t0的1.6倍且不大于1.8倍才是有效的，如果不是这种情况，调整m0p的值，并重复该过程。相对粘度的计算由于透明质酸钠溶液和溶剂的密度几乎相等，相对粘度Ri（即R1，R 2，R3和R4），可以通过各溶液的溢流时间（为T1，T2，T3和T4）与溶剂t0的溢流时间的比例计算，但考虑

6、到毛细管的动能校正系数（B =30800s3），使用下面的表达式：浓度的计算计算试品溶液（a）的透明质酸钠浓度C1（表示为千克/米3）在使用下式：X =测定的透明质酸钠百分比的含量;H =百分比干燥失重;25=1005千克/立方米（试验溶液在25下的密度）。计算试验溶液（b）的透明质酸钠的浓度C2（表示为千克/米3）使用下面的表达式：使用下面的表达式计算透明质酸钠的测试溶液（c）浓度C3（表示为千克/米3）：使用下面的表达式计算透明质酸钠的测试溶液（c）浓度C4（表示为千克/米3）：特性粘度的计算通过使用马丁方程线性最小二乘回归分析计算特性粘度：拦截的特性粘度的十进制对数是表示为m3 /千克。

7、硫酸糖胺聚糖：最大1，如果产物从鸡冠中提取的。在高温下处理高氯酸时，必须考虑适当的安全预防措施。测试溶液。 加入一定物质的量待检查相当于50.0毫克的干燥物至长150毫米内径16毫米的试管，溶解于1.0毫升的分析纯高氯酸里。基准溶液。溶解0.149克分析纯无水硫酸钠于纯水，且用相同的溶剂稀释至100.0毫升。用纯水稀释10.0毫升该溶液至100.0毫升。在90-95加热器中，蒸发1.0毫升于长150毫米内径16毫米的试管中。溶解在1.0毫升高氯酸分析纯中的残余物。每个试管放一块玻璃棉。将试管置于一个加热器中或保持在180的硅油浴中，并加热至澄清得到无色溶液（约12小时）。取出试管并冷

8、却到室温。添加到每个试管3.0毫升33.3 g / L的氯化钡R溶液，盖上盖子后剧烈震荡。试管静置30分钟。再次摇动每个试管，并在660nm测定吸光度（2.2.25），以纯水为空白对照。试验溶液的吸光度不大于参考溶液的吸光度。核酸：溶液S在260nm处的吸光度（2.2.25）最大是0.5。蛋白质：最大0.3;最大0.1，如果打算用于肠胃外制剂中的用途。试验溶液（a）。用纯水溶解待检测物，以获得每毫升干燥物质相对含量为10mg的溶液。试验溶液（b）。等体积混合的试验溶液（a）和纯水.基准白蛋R 用纯水制备0.5毫克/毫升的牛血清白蛋白储液。制备5倍稀释物的原液，含有5微克/毫升至50微克/毫升的

9、牛血清白蛋白。添加2.5毫升新鲜制备的酒石酸铜溶液R3至含有2.5毫升纯水或2.5毫升的试验溶液（a）或（b）或2.5毫升的对照溶液的（空白）试管中。每次加入后拌匀。约10分钟后，添加0.50毫升phosphomolybdotungstic试剂R与纯水的等体积混合物到每个试管。每次加入后拌匀。30分钟后，测量每个溶液在750纳米处对空白的吸光度（2.2.25）。从5个参考溶液获得的校正曲线确定蛋白在测试溶液中的含量。氯化物（2.4.4）：最大0.5。溶解67毫克在100毫升纯水中。铁：最高为80ppm。原子吸收光谱法（2.2.23，方法）。测试溶液。通过水浴上加热溶解待检查干燥物质0.25g于

10、1毫升硝酸R中，冷却并用纯水稀释至10.0毫升。标准溶液。以相同的方式制备2种基准溶液作为试验溶液，分别加入1.0毫升和2.0毫升的铁标准溶液分析纯（10ppm的Fe）至要被检查的溶解物质中。来源：使用0.2纳米的传送带的铁空心阴极灯。波长：248.3nm。雾化设备：空气 - 乙炔火焰。重金属（2.4.8）：最大20 ppm的;如果计划用于肠胃外制剂，最大为10ppm。 用1.0g 符合测试的F. 制备2.0毫升标准溶液（10 ppm的铅）R.的对照品溶液干燥失重（2.3.32）：最大20.0%，通过0.500克在100-110下干燥超过6小时的五氧化二磷分析纯来确定。微生物污染TAMC：验收

11、标准102 CFU/克（2.6.12）。使用1克样品进行检测。细菌内毒素（2.6.14）：小于0.5IU/mg，如果打算用于肠胃外制剂，如果没有更适合的除去细菌内毒素的工艺; 小于0.05IU/毫克，如果用于在眼内制剂或关节内制剂的制造，如果没有更适合的除去细菌内毒素的工艺。含量测定通过与咔唑反应确定的葡糖醛酸的含量如下所述。试剂A 溶解0.95克四硼酸二钠于100.0毫升硫酸中试剂B 溶解0.125克咔唑R在100.0毫升无水乙醇R.中测试溶液。准备三份这个溶液。溶解0.170克被检查物质于纯水中，用相同的溶剂稀释至100.0g。取10.0克这种溶液用纯水稀释至200.0克。参考原液。溶解0

12、.100g的D-葡糖醛酸分析纯，经五氧化二磷在真空中预先干燥至恒重（2.3.32），在水中和稀释至100.0g用相同的溶剂。参考溶液。制备5种包含D-葡糖醛酸分析纯在6.5 g/g 和65 g/g 之间的参考原液的稀释液放置25只试管在冰水中，编号为1到25。一式三份分别添加1.0mL5种参考溶液至115号试管中（参照管），一式三份添加1.0毫升3个测试溶液于试管16至24中（样品管）和1.0毫升纯水到试管25中（空白）。添加到每个试管5.0毫升之前在冰水冷却的新制备的试剂A。盖紧试管用塑料瓶盖，摇匀，并将其置于水浴中15分钟。冰水中降温，并添加0.20毫升试剂B到每个试管.重新温管，摇匀，然后再次把它们放在水浴中15分钟。冷却至室温，并测量溶液在530nm处的吸光度（2.2.25），对照空白样品。从校正曲线得到的各基准溶液的平均吸光度，来确定D-葡糖醛酸在测试溶液中的平均浓度。利用下面的表达式计算透明质酸钠的百分含量：Cg=D-葡糖醛酸在试验溶液中浓度的平均值单位为毫克每克;Cs =试验溶液被测物质的浓度平均值，单位为毫克每克;Z =确定的C6H10O7在D-葡糖醛酸分析纯中的百