第五章植物显微化学制片ppt课件

1、第五章第五章 植物显微化学鉴定法植物显微化学鉴定法植物显微化学鉴定植物显微化学鉴定 利用化学药剂处置植物器官、组织、利用化学药剂处置植物器官、组织、细胞，经过化学反响在显微镜下直接观细胞，经过化学反响在显微镜下直接观测、鉴别细胞壁的组分以及细胞中含有测、鉴别细胞壁的组分以及细胞中含有物的性质和分布的一种快速定性及定位物的性质和分布的一种快速定性及定位方法。方法。植物显微化学鉴定的本卷须知植物显微化学鉴定的本卷须知 1.1.选用新颖而健全的植物资料。选用新颖而健全的植物资料。 2.2.取材后要尽快地进展制片。以冰冻取材后要尽快地进展制片。以冰冻切片法或徒手切片法最为适宜。切片法或徒手切片法最为适

2、宜。 3.3.切片厚度约切片厚度约20402040微米。微米。 4.4.选用的试剂和化学反响方法必选用的试剂和化学反响方法必需是对某一待测物质具有专注的特殊性。需是对某一待测物质具有专注的特殊性。 5. 5. 在取样的数量，或察看、测定的次数在取样的数量，或察看、测定的次数上都要有反复。尽量排除能够出现的偶尔性。上都要有反复。尽量排除能够出现的偶尔性。 6.6.进展显微化学法鉴定时，该当留意对进展显微化学法鉴定时，该当留意对照实验。照实验。 7. 7. 反响处置的切片和对照的切片反响处置的切片和对照的切片应该尽量临近，最好是前一片作反响处置，应该尽量临近，最好是前一片作反响处置，后一片那么为对

3、照切片。后一片那么为对照切片。 8.8.随时将察看的结果用彩色胶卷拍照。随时将察看的结果用彩色胶卷拍照。 植物显微化学主要鉴定方法植物显微化学主要鉴定方法 淀粉淀粉 1.1.碘碘碘化钾法碘化钾法 碘液遇淀粉时，构成碘化碘液遇淀粉时，构成碘化淀粉，呈现特殊的深蓝色或棕红色反响。淀粉，呈现特殊的深蓝色或棕红色反响。碘碘碘化钾配方：碘化钾配方： 碘碘 1g1g 碘化钾碘化钾 2g2g 蒸馏水蒸馏水 100ml(100ml(浓液浓液) )或或300ml(300ml(稀稀液液) )先将碘化钾加热溶化于少量蒸馏水中，然后先将碘化钾加热溶化于少量蒸馏水中，然后参与碘，再加水稀释至参与碘，再加水稀释至100m

4、l100ml或或300ml300ml。n多糖多糖n显示多糖的高碘酸显示多糖的高碘酸希夫反响希夫反响 n 根本原理根本原理 高碘酸破坏多糖分子中的高碘酸破坏多糖分子中的C-C键，键，变为醛基，醛基与希夫试剂相结合，生成红色变为醛基，醛基与希夫试剂相结合，生成红色的反响产物。这一过程称为的反响产物。这一过程称为PAS反响。反响。n 试剂配制：试剂配制：n 10.50.8高碘酸水溶液。高碘酸水溶液。 n 2洗涤液洗涤液偏亚硫酸钾偏亚硫酸钾(或钠或钠)溶液溶液n10偏亚硫酸钾偏亚硫酸钾 5毫升毫升n1N HCl 5毫升毫升n蒸馏水蒸馏水 90毫升毫升n 临用时将三者混合，运用新颖混合液。临用时将三者混

5、合，运用新颖混合液。 (3)(3)希夫试剂的配制希夫试剂的配制 1.1.将将1 1克碱性品红溶于克碱性品红溶于200200毫升煮沸的蒸馏水毫升煮沸的蒸馏水中，摇动中，摇动510510分钟，冷却到分钟，冷却到5050时过滤。时过滤。 2.2.向滤液中参与向滤液中参与1N1N盐酸盐酸2020毫升，冷却至毫升，冷却至25 25 。 3.3.加加2 2克偏亚硫酸钾克偏亚硫酸钾( (或钠盐或钠盐) )，摇匀，静置暗，摇匀，静置暗处过夜。处过夜。 4.4.加活性炭加活性炭2 2克，摇动克，摇动2323分钟，用滤纸将溶分钟，用滤纸将溶液过滤于棕色细口瓶中。滤液应该是无色或淡黄液过滤于棕色细口瓶中。滤液应该是

6、无色或淡黄色，假设呈红色那么不能运用。色，假设呈红色那么不能运用。 5.5.将合格的染液置于黑暗低温将合格的染液置于黑暗低温(04)(04)下储存下储存备用。用前将染液升到室温。备用。用前将染液升到室温。 制片程序： (1)切片脱蜡到蒸馏水 (2)流水冲洗1530分钟。 (3)0.5-0.8高碘酸溶液处置10分钟。 (4)流水洗涤510分钟，蒸馏水过渡。 (5)移入希夫试剂中2030分钟。 (6)用偏亚硫酸钾溶液洗三次，每次23分钟。 (7)流水洗涤1015分钟，并经过蒸馏水5分钟。 (8)按常规经过各级乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片。 染色效果染色效果表皮表皮皮层皮层中柱中柱淀粉粒淀粉粒蛋白

7、质蛋白质 1 1、氯化汞、氯化汞溴酚蓝法溴酚蓝法 试剂配制：试剂配制：1010克氯化汞克氯化汞(HgCl2)(HgCl2)，100100毫克溴毫克溴酚蓝溶于酚蓝溶于100100毫升蒸馏水中。毫升蒸馏水中。 操作步骤：操作步骤： 1.1.在切片上滴一滴氯化汞在切片上滴一滴氯化汞溴酚蓝溶液，溴酚蓝溶液，染色染色5 5分钟。分钟。 2.2.用用0.50.5醋酸溶液冲洗，除去切片上多余醋酸溶液冲洗，除去切片上多余的染料。的染料。 3.3.再用蒸馏水洗再用蒸馏水洗5 5分钟，最后用甘油封藏察分钟，最后用甘油封藏察看。看。 察看结果：细胞中的糊粉粒那么被染成鲜蓝察看结果：细胞中的糊粉粒那么被染成鲜蓝色。色

8、。脂类物质脂类物质 苏丹苏丹溶液，它有二个浓度不同的配方：溶液，它有二个浓度不同的配方： A 苏丹苏丹(或苏丹或苏丹) 0.1克克 95酒精酒精 10毫升毫升 甘油甘油 10毫升毫升 B. 苏丹苏丹(或苏丹或苏丹) 0.01克克 95酒精酒精 5毫升毫升 甘油甘油 5毫升毫升 切片放在上述任一种溶液中染色切片放在上述任一种溶液中染色24小时，然后小时，然后用用50酒精洗涤，放入甘油中察看，油脂可以染成酒精洗涤，放入甘油中察看，油脂可以染成淡黄或红色。同时为了加速染色，可以悄然加热。淡黄或红色。同时为了加速染色，可以悄然加热。 木质素木质素 间苯三酚的反响是检验木质化最常用和最间苯三酚的反响是检

9、验木质化最常用和最简单的方法。简单的方法。操作步骤：操作步骤： 1.将切片放在载玻片中央，滴一滴盐酸浸透将切片放在载玻片中央，滴一滴盐酸浸透(因间苯三酚在酸性环境下才干与木质起作用因间苯三酚在酸性环境下才干与木质起作用)。 2.滴上一滴间苯三酚的酒精溶液滴上一滴间苯三酚的酒精溶液(510间间苯三酚的苯三酚的95酒精溶液酒精溶液)。察看结果：木质化的细胞壁可现出樱桃红或紫察看结果：木质化的细胞壁可现出樱桃红或紫红色。颜色深度决议于细胞壁木质化的程度。红色。颜色深度决议于细胞壁木质化的程度。此染色法不适于作永久切片，因颜色会渐渐退此染色法不适于作永久切片，因颜色会渐渐退去而变成淡黄色。去而变成淡黄

10、色。 显示单宁的亚硫酸铁反响显示单宁的亚硫酸铁反响 将切片投入将切片投入0.51.00.51.0的亚的亚硫酸铁或氯化铁溶液硫酸铁或氯化铁溶液( (用用0.1N HCl0.1N HCl配配制制) )中染色后，可作暂时性封片进展中染色后，可作暂时性封片进展察看；也可经酒精脱水，二甲苯透明，察看；也可经酒精脱水，二甲苯透明，制成永久制片。染色结果：假设出现制成永久制片。染色结果：假设出现蓝色沉淀物那么阐明单宁的存在。蓝色沉淀物那么阐明单宁的存在。 显示显示DNADNA的孚尔根反响的孚尔根反响 原理原理 切片经切片经1N HCl 601N HCl 60水解处置后，水解处置后，DNADNA的脱氧戊糖间的

11、醛基成为自在形状。希夫试剂即的脱氧戊糖间的醛基成为自在形状。希夫试剂即同暴显露来的醛基发生反响，将核的染色质染成同暴显露来的醛基发生反响，将核的染色质染成深紫红色。深紫红色。 试剂配制：试剂配制： (1)1N HCl(1)1N HCl。 (2)(2)希夫试剂希夫试剂 配法见配法见“多糖的高碘酸多糖的高碘酸希希夫反响。夫反响。 (3)(3)偏亚硫酸钠水溶液偏亚硫酸钠水溶液( (洗涤液洗涤液) ) 配配方见方见“多糖的高碘酸一希夫反响。多糖的高碘酸一希夫反响。 制片程序： (1)组织经卡诺固定液固定48小时，固定时间不宜太长，太长会水解DNA，减弱染色强度。 (2)切片脱蜡并逐渐过渡到蒸馏水。 (3)在冷1M HCl中12分钟。 (4)60热1M HC