细胞活体染色技术

1、细胞活体染色技术实验七实验七生物工程周新宇2实验目的Y学习细胞活体染色的方法。Y观察动、植物活细胞内线粒体，液泡系的形态、数量与分布。3实验原理 活体染色是利用某些无毒或毒活体染色是利用某些无毒或毒性较小的染色剂，在不影响细胞生性较小的染色剂，在不影响细胞生命活动的情况下显示细胞的天然构命活动的情况下显示细胞的天然构造，更具真实性。活性染色又分为造，更具真实性。活性染色又分为体内活体染色和体外活体染色。体内活体染色和体外活体染色。 4Y活体染色分为体内活染和活体染色分为体内活染和体外活染两种。前者是将体外活染两种。前者是将染料注射于生物体内，染染料注射于生物体内，染色后再取材观察。后者是色后再

2、取材观察。后者是取材后，对离体的活细胞取材后，对离体的活细胞进行染色。为保持离体细进行染色。为保持离体细胞的正常存活，染色时需胞的正常存活，染色时需供给细胞以正常的温度，供给细胞以正常的温度，渗透压，渗透压，PHPH等。等。 活体染色5较为常见的活体染色剂Y詹纳斯绿B(Janus green B)Y中性红Y台盼蓝(trypan blue)6詹纳斯绿B(Janus green B)Y 能够染活线粒体为蓝色，主要是由能够染活线粒体为蓝色，主要是由于线粒体内膜上的细胞色素酶系使染于线粒体内膜上的细胞色素酶系使染料始终保持在氧化状态料始终保持在氧化状态( (即有色状态即有色状态) )，在周围的细胞质内

3、，这些染料被还原在周围的细胞质内，这些染料被还原为无色的色基为无色的色基( (即无色状态即无色状态) )。 一定要注意，只有具有一定要注意，只有具有活性的活性的细细胞色素胞色素C C氧化酶才能够把詹纳斯绿氧化酶才能够把詹纳斯绿B B氧氧化，从而使它显出颜色化，从而使它显出颜色7中性红Y 中性红是中性红是液泡系液泡系的特殊的特殊活体活体染染色剂，它可将不同发育时期的液色剂，它可将不同发育时期的液泡染成不同深度的泡染成不同深度的红色红色，在细胞，在细胞处于生活状态下细胞质和核不被处于生活状态下细胞质和核不被染色，该染料对液泡系具有一定染色，该染料对液泡系具有一定专一性专一性。8台盼蓝(trypan

4、 blue)Y 台盼蓝台盼蓝(trypan blue)是一种是一种偶氮类酸性染料，它可以通过偶氮类酸性染料，它可以通过死亡细胞的质膜而使细胞着色，死亡细胞的质膜而使细胞着色，但不能通过活细胞的质膜，故但不能通过活细胞的质膜，故可用台盼蓝鉴别活细胞与死细可用台盼蓝鉴别活细胞与死细胞。胞。 9实验用品l材料：黄豆根尖、洋葱、小鼠。材料：黄豆根尖、洋葱、小鼠。l器械：显微镜、镊子、刀片、器械：显微镜、镊子、刀片、剪刀、解剪刀、解剖针、剖针、 表面皿、载玻片、盖玻片、吸管、表面皿、载玻片、盖玻片、吸管、收水纸等。收水纸等。l试剂：试剂：RingerRinger氏液氏液 1 130003000中性红溶液

5、中性红溶液 1 150005000詹纳斯绿詹纳斯绿B B 台盼蓝染色液台盼蓝染色液 香柏油、二甲苯、蒸馏水等香柏油、二甲苯、蒸馏水等10实验方法1. 1. 液泡系的中性红活体染色液泡系的中性红活体染色 1用双面刀片将黄豆芽根尖用双面刀片将黄豆芽根尖 (约约l-2cm2) 处小心纵切断面，一定要薄处小心纵切断面，一定要薄且均匀。且均匀。 2在载玻片中央滴加中性红染料。使材料在其中染色5-10分钟。 3吸去染料，滴加Ringer氏液一滴，盖片、镜检、注意液泡系染成什么颜色，其形态、大小如何、分布位置。11液泡系的中性红染色点经观察12撕取洋葱鳞茎内表皮一小块撕取洋葱鳞茎内表皮一小块于载玻片上的于载

6、玻片上的1/5000 Janus 1/5000 Janus green Bgreen B染色染色30min30min吸去染液，滴一滴吸去染液，滴一滴RingerRinger液液盖上盖玻片进行镜检盖上盖玻片进行镜检 .线粒体的活体染色 用植物细胞观察线粒体的活体染色13 取鼠肝边缘较薄的肝组织一小块，取鼠肝边缘较薄的肝组织一小块， 放入盛有放入盛有RingerRinger氏液的表面皿中洗氏液的表面皿中洗去血液。将肝组织洗净后吸去血液，去血液。将肝组织洗净后吸去血液，加入加入1 150005000詹纳斯绿詹纳斯绿B B染液染色染液染色3030分钟，注意不可将组织块完全淹没。分钟，注意不可将组织块完

7、全淹没。染色后撕开组织块，这样溶液中就染色后撕开组织块，这样溶液中就会有一些细胞或细胞群。用吸管吸会有一些细胞或细胞群。用吸管吸取溶液，放在载玻片的取溶液，放在载玻片的RingerRinger氏液氏液中。中。垫两根短头发垫两根短头发，加盖玻片，即，加盖玻片，即可镜检。用可镜检。用油镜观察油镜观察活染色的线粒活染色的线粒体标本，要不断地来回转动细调焦体标本，要不断地来回转动细调焦螺旋，使盖玻片上下慢慢移动。使螺旋，使盖玻片上下慢慢移动。使材料总是得到氧气，线粒体的染色材料总是得到氧气，线粒体的染色才显得非常清楚。才显得非常清楚。 用动物细胞观察线粒体的活体染色用动物细胞观察线粒体的活体染色14

8、3.人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察清洁载玻片放在清洁载玻片放在3737恒温水浴锅的恒温水浴锅的金属板上金属板上滴滴2 2滴滴1/5000 Janus green B1/5000 Janus green B染液染液用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞皮细胞刮下的粘液状物放大载玻片的染液刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中滴中染色染色10l5min(10l5min(注意不可使染液干注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液燥，必要时可再加滴染液) )盖上盖玻片盖上盖玻片, ,显微镜下观察显微镜下观察口腔黏膜上皮细胞及线粒体 15人口腔上皮细胞的线粒体分布在实验过程中在实验过程中务必保持所取的务必保持所取的材料的活性。通材料的活性。通常，需要把生物常，需要把生物材料置于材料置于的冰水