枸杞多糖的提取与分离研究分析生物技术专业

1、摘要为了研究枸杞多糖在枸杞中的提取分离更好的方法和提取得率含量最高的方法，本文以单因素试验的基础上，设计正交试验，对枸杞中多糖提取法的工艺条件进行优化，并对获得的优化参数进行了放大验证，确定热浸提法最佳工艺提取条件是料液比为1:15，浸提温度为95，浸提时间为3小时，得到枸杞多糖的得率为2.56%。该提取工艺条件，是一种提取成本低、枸杞多糖得率较高的方法，结果令人满意。关键词：枸杞多糖，提取分离，含量测定AbstractInordertostudytheextractionandseparationofChinesewolfberrypolysaccharidesinlyciumbetterm

2、ethodandobtainedthehighestrateofcontent,inthispaper,onthebasisofsinglefactorexperiment,orthogonalexperimentdesign,intheChinesewolfberrypolysaccharideextractionprocessconditionswereoptimized,andtoobtaintheoptimizedparametersfortheamplification,ishotextractionoptimumextractionconditionsweredetermineda

3、ndsolid-liquidratiois1:15,leachingtemperatureis95,leachingtimeis3hours,theyieldofLBPis2.56%,thepolysaccharidecontentofLBPwas43.35%.Itisamethodwithlowextractioncostandhighyieldoflyciumbarbarumpolysaccharide.Keywords：lyciumbarbarumpolysaccharide,Extractionandseparation,Contentdetermination目录摘要Abstract

4、1绪论11.1研究背景11.2枸杞多糖的简介21.3多糖的提取分离方法21.3.1多糖的提取方法21.3.2多糖的分离方法32实验部分62.1实验材料与仪器62.1.1实验材料62.1.2实验试剂62.1.3实验仪器62.2热水浸提枸杞多糖62.2.1提取工艺62.2.2构杞多糖中多糖含量测定方法722.3热水浸提枸杞多糖的研究72.2.3.1单因素实验的结果72.2.3.2热水浸提枸杞多糖正交试验设计的结果92.3本章小结103研究结论11参考文献12致谢15IV1绪论据神农本草经记载，枸杞的功效十分强大，一直以来就有枸杞可以补气益血，清肝明目的效应，也因此广受人们关注。从古至今，以枸杞为养

5、生食材的记载屡见不鲜，而就在最近的研究当中，人们也发现，枸杞中的有效成分，如枸杞多糖、枸杞蛋白质等对人体都具有很强的补充和修复作用，它们可以提高人体免疫力，进一步抵抗疾病，延缓衰老。有部分研究人员认为，提取枸杞多糖的方法数不胜数，本文就采用了其中几种方法并分析其结构与化学性质，借以为后来人提供新的参考思路与经验。在1981-2010年期间，关于枸杞和枸杞多糖的新型治疗剂就有八百七十六种，在这其中，天然产物和天然类似物与人工产物的比例几乎已经达到了1:1的程度。而对于天然产物的提取与分离，就是探究治疗剂治疗效果与研究难度的重点。中药产品常常成分复杂，根据现代精密仪器分析，常常可以达到成千上百种。

6、其中也包含了各种天然产物。但有效的活性成分，往往只有其中的部分化合物。要想完全提取并明白天然产物的有效成分，就需要对天然产物进行分离与质量分析控制。单糖与单糖结合、单糖与蛋白质结合都可以构成生物大分子，并广泛存在于人体与自然界当中，起到其至关重要的作用，如信息识别、能量传递、贮存等。多糖的应用领域非常广泛，比如食品和保健品领域。枸杞多糖的药理和生物分子具有促进身体健康的作用，医疗功效也非常不错，是一种相当重要的生物活性物质。近年来医学界和营养学界的研究热门，就是对多糖的探索研究。枸杞多糖的提取分离研究是一项颇有意义的工作，也是一项非常艰巨的工作。1.1研究背景与研究目的天然产物成分复杂，含有多

7、种生物活性成分和营养成分，包括蛋白质、多糖、维生素、生物碱、挥发油、黄酮类化合物、糖苷和萜烯1。活性大分子与小分子的分离比较容易，这其中大分子要想完全分离出来，并能应用于生产实践，就需要攻克其分离纯化的技术难关。关于多糖的提取，最重要的步骤就是得率与纯度。提高多糖的得率，不仅要优化各种条件，还要需要保证多糖的生物活性不被破坏。水、酸溶液、碱溶液等，都是多糖提取的常用溶剂2345. 因为热水获取成本低，多糖在热水当中的溶解度也较高，因此热水就变成提取多糖时最重要的溶剂之一。但是由于部分多糖含有醛酸，因此，在提取这部分多糖时，就需要采用碱溶液。在目前的研究当中，新的提取分离技术屡见不鲜，如西洋参多

8、糖以超声波辅助提取 6，大蒜油以超临界CO2逆流萃取等7,但是这些提取方法对设备等条件有很高的要求,其过程的复杂性也难以满足工业生产需要。部分研究发现，枸杞多糖作为枸杞的有效成分之一，其效用十分广泛，可以提高人体免疫力，延缓衰老，并且有降低血脂的影响和抗衰老的作用89。并且有降低血脂的影响和抗衰老89。枸杞多糖产品现在粗多糖杂质较多,水溶性清算解决方案有限程度是不够的,所以不能满足美国食品和药物相关需求开发适当的卫生保健产品和临床应用的药物,所以未来的枸杞多糖提取天然植物药的流程优化,结构特征分析是必要的,只有很好地了解了相应结构的性质，才能为新药和保健品的开发提供可靠的理论基础和实践指导。1

9、.2枸杞多糖的结构和理化性质1.2.1枸杞多糖的结构枸杞多糖作为一种常见化合物，其分子量的测算、多糖的种类、腺苷键的数量、长度、位置、异形、连接方式等等都在研究的范围之内。有学者在其研究著作中表明，枸杞多糖实际上是由由13连接和16连接的3.33:53.55:39.35的阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖酸所组成。枸杞多糖结构稳定，骨架为13连接半乳糖，lblp5-a-oli为高度分枝多糖。在测量时采用阿兰二（nl=0-6，n2=0-8，n3=0-1）来进行分析。在测量前需要进行柱分析来纯化，进一步得到二级组分与结构，在结构分子当中含有大量的氨基和氨基，它由五个单糖残基组成。初级结构由-D-吡喃糖残基组

10、成。1.2.2枸杞多糖的药理功能生殖系统保护功能: 中药中常用枸杞治疗不孕症。在实验中，应用枸杞多糖的抗氧化作用，就可以在一定程度上抑制自由基的裂变，抑制其致使细胞色素衰老的强制性表达和H2O2酶的释放，在一定程度上降低鼠睾丸细胞破裂和DNA的氧化，延长小鼠精原上皮细胞热损伤细胞的体外死亡时间，实现对小鼠生殖系统的保护。枸杞多糖可以在一定程度上促进 睾 丸 生 殖 细胞的发育，并促进和调节下丘脑、下垂体的激素分泌。同时也能降低高温和对精母细胞的损伤，受损的精原细胞染色体也受到保护作用。抗氧化和抗衰老：在枸杞多糖的作用下，自由基的应激反应会被多糖

11、打断并抑制，因此枸杞多糖可以起到抗氧化的作用。实验室研究发现，枸杞多糖还可以抑制H2O2酶的产生，表现出消除自由基、降低酶活性的作用。而且，其还原能力、清除能力也是枸杞多糖的拿手好戏。对游离过氧化氢对小鼠红细胞溶血能力和铁离子螯合能力的抑制作用也有显著表现。实验中用辐射照射大鼠肝脏颗粒悬浮液或钙多糖颗粒悬浮液，结果显示，辐射引起的钙蛋白损失被钙多糖抑制，超氧化物歧化酶、过氧化氢酶也被抑制，这种抑制关系呈现线性，比维E的影响更大。在部分研究当中，多糖多数都由枸杞脱色、提水，然后再通过酒精萃取沉淀所获得的大分子、总多糖化合物。罗琼在其相关文献中显示：枸杞水提取物的体外抗氧化活性高于提水和酒精。近年

12、，有学者已将提取多糖的蛋白质水解，并以死亡玛瑙的柱分离，得到中性多糖及三种酸性多糖等四种成分。比较了4种成分与非含酒精水提取物、透析治疗多糖、脱蛋白溶多糖、粗多糖的抗氧化活性。在研究当中，人们发现，这些蛋白（除去顺式和DDP）都具有去除自由基的功效，主要去除的自由基包括：2,2-亚氮-二-二(3-乙基-6-磺酸)自由基、超氧化物阴离子和羟基自由基的功能。免疫调节作用：枸杞多糖可以起到免疫调节的作用，在实验当中，一般采用离子交换色谱法来探究其相对作用，通过柱实验的分离与探究，可以得到的是蛋白质+多糖的结合，这种复合多糖具有一定程度的免疫刺激作用。实验表明，枸杞多糖在增加人外周血单核细胞I和TNF

13、的表达方面都具有显著作用，在该实验中，RNA与蛋白质水平都与枸杞多糖呈现出显著相关的剂量依赖性，从这个角度来说，枸杞多糖是可以增强免疫力的。钙多糖的存在可以抑制肿瘤的生长，同时增加一部分巨噬细胞的吞噬能力、分泌能力，从而影响RNA的转录与表达，进一步引起脂质过氧化的减少，对生物体起到免疫调节的保护作用。有部分实验表明，枸杞多糖在调节小鼠骨髓树突状细胞的表型和功能成熟度方面都都有显著效应。树突状细胞是体内重要的抗原呈现细胞，在引发初期免疫反应中起着独到的作用。抗肿瘤：一些研究人员发现，枸杞多糖可以起到抗肿瘤的效果，但是其作用机制尚不明确。有些学者认为枸杞多糖之所以能够抗肿瘤，是由于其激活的免疫体

14、制，有些学者则认为是通过增强人体自免疫，降低脂质过氧化作用来达到抗肿瘤的效果。但是目前，这两种说法都没有可靠的证据来证明其观点。也有人认为，枸杞多糖之所以能够抗肿瘤，是因为其可以调节Ca+强度，相关的实验有对肝癌细胞株的研究。还有人认为，枸杞多糖在某种程度上可以抑制细胞增殖，从而降低癌变速率，并在有丝分裂的S期诱导细胞凋亡，进而达到抗肿瘤的功效。人体内存在的钙多糖还可以抑制癌细胞的生长，这一点也在人前列腺癌当中得到了证明。在细胞当中，RNA量与Ca+的分布也有可能会抑制细胞系的生长，与此同时剂量-时间反应关系，这一关系的存在会导致癌细胞DNA破裂和细胞的凋亡。根据实验室实验表明，钙多糖还可以在

15、一定程度上抑制裸鼠的生理结构与生长习性。根据研究发现，枸杞多糖还可以诱发肝癌细胞癌变。调节血脂和低血糖：吴等人在其相关研究中发现枸杞多糖的存在在非胰岛素依赖型糖尿病大鼠的实验中可以显著降低血糖水平，并进一步提高血清当中的含量，从而减少外周淋巴细胞。在糖尿病家兔实验中，枸杞多糖可以显著降低由四氧嘧啶诱导的血脂与血糖水平。据研究，枸杞多糖的作用剂量在20-50毫克，就可以对糖尿病患者起到一定程度的保护肝脏、肾脏等内脏组织的作用，因此，我们可以说，枸杞是一种良好的有发展前景的调节血脂与低血糖物质。 抗辐射：枸杞多糖在一定程度上能起到抗辐射的作用，可以促进x射线和卡布铂化疗，然后进一步诱导小鼠外周血液

16、图像的恢复，在这一基础上，刺激人外周血液单核细胞，重组粒细胞菌落刺激因子；辐射射线主要伤害的是小鼠肝细胞中的膜结构，多糖可减少这种损伤。它显著地改善了线粒体糖蛋白的丢失，改善了由射线引起的肝细胞、过氧化氢酶和的失活。它的抗辐射功能比生育酚更明显。保护神经：香港大学的余等人发现，枸杞提取物通过抵抗神经细胞内质网的应激水平，在某种程度上都可以保护神经，枸杞多糖可以对淀粉样肽当中存在的麻痹神经系统的神经毒性起到抑制作。所谓淀粉样肽，是指阿尔茨海默氏病的病因之一，是引起它发病的关键因素。而枸杞多糖的存在，在抑制相对蛋白酶活性的基础上，可以同时降低乳酸脱氢酶的活性，从而抑制c-垃圾氨基端激酶的磷酸化，起

17、到阻止细胞凋亡，减缓细胞衰老与磷酸化的作用，进一步保护神经系统。据推断，这种保护作用可能会对阿尔茨海默氏病的治疗与防护产生影响，为其提供新的思考方向。抗癌作用：枸杞多糖可以对人胃腺癌细胞和人宫颈癌细胞都起到较为明显的抑制作用，这是因为枸杞多糖与癌细胞之间的联合反应。在临床试验上，枸杞多糖治疗原发性肝癌12例，初步判定，其可改善相对病因病状，从而降低自免疫，延长患者的寿命。实验室还发现，枸杞多糖还可以升高抗肿瘤活性（小鼠实验）。1.3多糖的提取分离方法1.3.1多糖的提取方法枸杞当中的多糖，以不同形式存在或存在于不同提取部位都需要不同的预处理手法，目前常用的预处理手法主要包括脱色、粉碎、清洗、脱

18、脂等。清洗最主要的目的是为了除去存在原料表面的灰尘、泥土等，而脱色则是为了减少多糖当中原有的颜色对实验结果的干扰与影响，而粉碎则是为了进一步增加萃取时溶质与溶剂的相对接触面积，达到更强的萃取效果，脱脂则是为了去除存在植物细胞当中的部分脂质，减少对后续研究和分析的影响，使多糖更有可能被释放。多糖的提取方法有溶剂萃取法、酶解萃取法、超声辅助萃取法、微波辅助萃取法、超临界流体萃取法等。（1） 溶剂浸提法10：多糖易溶于水，所以在提取多糖时刻采用水性溶剂，比如纯水、酸、碱，或者有机溶剂如乙醇、甲醇等。多糖易溶于水，尤其是热水，而且热水来源广泛，造价低廉，因此，用热水作为提取溶剂的方法最为普遍。酸碱溶液

19、由于其腐蚀性高，可以破坏植物细胞壁，进而增加多糖的溶解度，但是与此同时，高腐蚀性的酸碱溶液也容易溶解糖苷键，破坏多糖的三维立体结构，进一步改变其活性。因此，在实际操作中几乎很少有人会用到酸碱溶液。（2）内部沸腾法：内部沸腾法主要是利用热效应，在加入外热溶剂的基础上产生热量，从而加速萃取，加大萃取效率。（3)酶解提取法：生物酶是细胞中一种特殊的蛋白质，可以参与活细胞中的各种反应。酶萃取法的优点是酶具有特异性和催化作用，在温和的条件下可以破坏植物的组织结构，释放多糖。缺点是酶容易失活，成本高。常用的酶包括纤维素酶、果胶酶和中性蛋白酶。（4）超声波辅助提取法：利用超声作用产生的高频振动效应，加速细胞

20、破裂及内部物质的释放溶解，可提高提取效率1112。（5）微波辅助提取法：利用高温破裂细胞，细胞内容物流出，加速萃取，加大效率。（6)超临界流体萃取法：就是利用超临界流体（CO2、水、乙烯），从固相或液相当中萃取特定成分，使提取物与萃取剂分离。但是要注意的是，多糖作为高极性有机化合物，不能采用超临界CO2来提取。添加适当的粘合剂可提高其选择性和溶解性。1.3.2多糖的分离方法常见的多糖分离方法可以将多糖当中的其他杂质，如蛋白、色素、无机盐、有机分子等分离除去，一般来说可以使用离子交换柱色谱法、透析法、凝胶超滤法等。（）洗脱蛋白质：蛋白质与细胞多糖结合就会形成结构较为复杂、功能较为完善的其他多糖。

21、但是蛋白质的提取与洗脱就成为技术上需要攻克的难点，蛋白质可溶于水相溶剂，但是不溶于醇。因此，不能采用水萃取酒精沉淀法。在提取时，常用的方法有很多：a. sevag法，利用蛋白质变性的特质，在有机溶剂中洗脱蛋白质，实验试剂采用的是25：5:1的多糖：氯仿：正丁醇。sevag法的优点在于实验过程较为温和，不会损伤相应的多糖结构，但是与此同时，也需要多次洗脱，才能真正去除蛋白质。b.三氯乙酸法。就是将1：1的三氯乙酸与多糖混合后充分搅拌并离心，然后丢弃已经变性的絮状蛋白。该方法的优点是去除洗脱效率较高，但是有一定的可能会破坏多糖，尤其是含有呋喃糖基的结构。c.三氟三氯乙烷法。该方法就是将一定量的多糖

22、加入三氟三氯乙烷，然后搅拌并离心，然后筛选出相对应的已变性的絮状蛋白。该方法的特点在于去除率较高，但是与此同时，也会造成溶剂的挥发与浪费，因此该方法用途并不是很广泛。d.酶法。该方法是在多糖和蛋白质大分子当中加入一定量的蛋白酶，用以水解蛋白质。该方法的特点是温和且高效 1314。（2）脱色：所谓的脱色，就是从植物当中去除部分含有色素的酚类物质。色素颜色较深时会对后续的实验产生干扰，因此，需要进行脱色实验。一般来说，常用的脱色方法有：a.物理吸附法，即采用活性炭等吸附剂，吸附干扰色素。该方法温和，价格低廉，但是脱色效率较低，因此一般不用于多糖脱色。b.化学反应法。常用的化学脱色剂包括H2O2等，

23、可以通过与色素反应而达到脱色的目的，但是化学反应法的反应终点仍在溶液当中，因此会影响其活性。c.离子交换柱法。常用的离子交换柱包括脱纤维素交换柱等，这种离子柱不仅可以脱色多糖，同时还可以给多糖进行分类15。(3)分级：所谓分级，就是经过上述脱蛋白和脱色处理后，将含有多种成将含有多种成分的多糖分级并处理，因为他们所含有的单糖与单糖组成、聚合方法都有较强的差异。其常用的分级方法有a.级分沉淀法16，就是采用多级沉淀的方法，根据多糖的不同分子量来进行顺序分离。b.离子交换色谱法17：其原理就是根据多糖所带有的电荷量不同来进行分级，即将离子交换器电与电荷结合，或者通过分子筛来进行分离与预处理。常见的色

24、谱柱有凝胶柱色谱18等，这些色谱柱用途广泛，常用于常用于琼脂凝胶、葡聚糖凝胶，但是由于离子柱多半价格高昂，只适用于处理实验室分级，不太适用于实践应用。c.其他，比如超滤分离法19，这种方法可以分离多糖，就是通过不同的分子量与电荷量来进行分离，除此之外，还包括金属法、盐分析法等分析手段。2实验部分2.1实验材料与仪器2.1.1实验材料宁夏枸杞干果300g2.1.2实验试剂葡萄糖500ml，氯仿500ml，甲醇2000ml，苯酚2000ml，浓硫酸200ml，纯净水2000ml。2.1.3实验仪器2.2热水浸提枸杞多糖2.2.1提取工艺将其碎为粉末，准确称为10g枸杞多糖粉末，加入氯仿和甲醇溶液加

25、热回流做实验准备。将产生的滤渣加入85%的乙醇溶液中加热回流，丢弃滤渣，用一定量的纯水过滤淹没。改变热水提取条件（在不同的浸出率、不同的浸出温度和不同的浸出时间比较下），进行单因素试验，离心后收集上部过滤20。该过滤器使用塞瓦格方法去除蛋白质2122，减压浓缩到约45毫升，并增加4.5倍的乙醇体积。生成的沉淀用乙醇和丙酮依次清洗，在冷冻干燥后24小时就可以得到多糖质量。重量，计算来速率。这样就能测定了枸杞多糖的多糖含量，确定了影响因素的范围和各因素的最佳条件。根据以上结果设计和测试正交试验。确定提取的最佳条件。2.2.2构杞多糖中波长的选择及多糖含量测定方法2.2.2.1测定波长的选择表2-3

26、波长与吸光度波长/nm440460480500520540560580600620640吸光度0.110.390.861.351.561.761.490.730.430.210.132.2.2.2枸杞多糖含量测定方法(1) 使用苯酚硫酸232425测定，即以多糖的水解为原理，以硫酸为催化剂，脱水生成乙醇醛衍生物，然后再与苯酚反应，形成淡黄色化合物，通过比色法进行测定。其在一定的浓度范围之内，吸收值与枸杞多糖的含量会呈一种线性相关关系的关系图，因此多糖的浓度可以也就是说从吸收值的大小可以计算出来多糖的重量，那么就可以计算出来枸杞多糖在枸杞中的含量。标准溶液的制备：准确地称为无水葡萄糖标准100m

27、g至100ml容量瓶，定尺水容量，准确地摄取无水葡萄糖标准10mg至100ml容量瓶，设定水容量，并准备100ug/ml的标准葡萄糖溶液来提供使用。（2） 苯酚溶液的制备：分析纯酚在65水浴中的热溶解，称175克，再加上铝片0.1克和碳酸氢钠0.05克，普通压力蒸馏，收集180的馏分，这一馏分取45克，加入10克纯水，放入50毫升的棕色瓶中，并把配置好的溶液储存在4的冰箱中，冷冻保存，使其生物的活性不变性。（3）绘制溶液标准的曲线。对葡萄糖的标准溶液分别进行0.2、0.4、0.6、0.8、1.0毫升的精密测量，将其放置在插入式试管中，分别加水至1毫升。每一精确度加入1.0mLl5%的酚溶液（准

28、备暂时使用）摇匀，用5mL浓硫酸缓慢慢滴入到苯酚溶液，均匀摇匀，然后在75°C的恒温下沐浴35分钟，除去，快速冷却至室温，并以水来为空白。在540nm的波缘测量处的吸光度，以取吸光度为纵坐标，横坐标是配置溶液浓度。绘制标准曲线。（4）测定多糖的样品含量：称量100毫克多糖样品，水容量固定为100ml，精密测量为10mL至 100mL容量瓶，用水稀释至刻度线处，摇匀均匀，精密测量为1mL，精确度1mL5%的苯酚溶液，均匀晃动，慢慢滴入5ml浓硫酸，75分钟热水浴后均匀晃动，去除，迅速冷却至室温，水为空白，测量540nm波缘的光吸收，用同一方法平行测量3次。通过将测量到的吸收率代入标准曲

29、线计算样品浓度，计算多糖样品含量。22.3热水浸提枸杞多糖的研究2.2.3.1单因素实验的结果单因素实验，探究枸杞多糖的浸出液的比例、温度与时间三个因子。结果如图1-3所示。 单因素试验条件：如图1，温度95°C，时间3小时。溶液剂量增加会影响多糖产量，并使其进一步增加，最后达到平衡。原理即是随着溶液剂量的增加，会稀释多糖，使浓度降低，进一步有利于多糖的传导运输过程。但是，溶解剂量过大，随后的浓度步处理时间增加，能耗就会相应增加。因此，在1:15、1:20和1:25的比例上进行了正交试验。图1浸提料液比与构杞多糖提取得率的关系浸没温度的单因素试验条件为1：20，浸没时间为3小时。结果

30、见图2。从图2中可以看出，随着浸出温度的慢慢升高，多糖的产率也会不断得上升，最终慢慢的变得稳定下来。从这实验表明，温度的升高可以增加多糖的浸出量。这是因为高温提高了多糖的传导运输得速率。从另一面来考虑，它增加了多糖在溶剂中的溶解度得大小。传统的水浴设备，通常最高温度一般只能达到95，不能达到更好的温度条件。因此选择70、80°、95这三种温度水平来进行正交试验，测量其浸出率。图2浸提温度与构杞多糖提取得率的关系浸出时间的单因素试验条件为：浸出液比为1:20，浸出温度为95°c。结果见图3。图3显示，枸杞提取率会随着浸出时间的增加，多糖得质量首先要增加。当时间超过3小时以后，

31、多糖产率慢慢的就会平稳下来。因此，选择2小时、3小时和4小时的提取时间来做进行正交试验，可以更好地观察其多糖得率。图3浸提时间与构杞多糖提取得率的关系2.2.3.2热水浸提枸杞多糖正交试验设计的结果研究多因素实验共同作用的设计方法称为正交试验设计，它层层递进，可以较好把握实验进程与多因素，最后使实验达到平衡，因此，可以选取一定的元素，尽可能得较少进行试验，但是也寻找较好的试验条件。这样既可能大大的节省实验时间，也能节省实验耗材达到减少实验成本的母的。本实验以枸杞多糖的产量为指标，选择L9（34）正交设计表进行实验，具体试验条件见表1，经过方差分析，从而确定最佳工艺条件，判断枸杞多糖的对应提取目

32、的，判断方法。表1正交试验设计因素水平表本文如表1所示的因素和水平，设计了9套测试条件。对每组10克干果粉进行了精确的测定，并按2.2.3.1提取工艺提取。以多糖产量为主要检测指标。计算结果就见表2。表2正交试验设计结果编号料液比（m/v）浸提温度/浸提时间/h多糖得率%11111.5621222.1431332.7042121.8452212.2962312.4873132.0883212.1993322.58根据表1和表2，不同因素对枸杞多糖产量的影响主要表现在提取液的温度、时间和配比。即浸出温度是影响多糖产量的主要因素。随着温度的升高，多糖的产率提高，以95作为浸出温度。其中，提取时间（

33、T）作为次要因素影响多糖提取率。但是随着T的推移，多糖也逐渐增加，最后达到稳定。由实验过程可以判断出大约需要3小时，因此，3h就是最佳提取时间。据结果，温度、提取时间都是影响因素，其中温度的影响更为重要。故得到最佳条件：液体比1:15，浸出温度为95，浸出时间为3h。方差分析表变异来源偏差平方和自由度均方F值料液比0.03620.0182.105温度0.84520.42349.175时间0.11720.0596.828误差0.01720.0092.3讨论实验结果表明，T（温度）与t（时间）都是该实验的影响因子，除去提取温度外，提取时间、物质与液体的比例关系都会对多糖产率产生影响，其中，最佳提取

34、条件为1:15。浸出温度为95，浸出时间为3小时。此时，枸杞多糖产量为2.56%。3研究结论与展望3.1研究结论将枸杞作为实验材料，进一步比较了枸杞中多糖含量分析的不同方法，并优化了影响枸杞中多糖的多种提取因素。单因素实验作为实验基础，然后进一步设计了多种正交试验，优化多糖提取因素的基础上，也优化了相应的试验方法，并对得到的试验参数进行了扩展与校正。测定热浸泡配方的最佳方法是得到比例就为1:15，浸泡温度为95，浸泡时间为3小时，从枸杞中提取的多糖产率为2.56%。3.2展望虽然实验取得了一些成绩，但仍有许多不足之处有待进一步补充或研究。主要包括以下几点：（1）对枸杞多糖的提取方法进行了实验优

35、化，但枸杞中还有许多其他活性物质，造成较大的浪费。如何优化枸杞的整体提取方法，提取尽可能多的有效成分。仍然需要进一步研究，则需要在接下来的实验研究中，多多尝试新的方法。（2）对枸杞多糖的质量鉴定进行了实验，但对天然产品质量控制的其他方面也需要严格的标准和规范。例如，可以将原材料、生产技术、最终产品以及分析和测试方法纳入未来的研究范围。（3）但是本文的研究存在的问题依然有很多，比如没有采用超临界流体萃取法、超声波辅助提取法，在枸杞多糖的分离提取中仍然有很多的问题，希望今后大家在枸杞多糖提取分离的实验以及研究中，可以将枸杞多糖的活性成分以及营养价值研究并开发利用，造福于人类。参考文献1阮冲，肖小华，李攻科天然产物有效成分提取分离制备方法研究进展化学试剂，2014,36(03):193-200.2王桂云，费瑞沙棘果碱提水溶多糖的结构研究高等学校化学学报，2001，22（10）：1688-16903董洪新，吕作舟阿魏侧耳酸提水溶性多糖的研究微生物学报，2004，44(1）：101-103.4张丽萍，李森金顶侧耳酸提水溶性多糖的研究的分离、纯化与结构确定真菌学报，1993，12(2）：158-162.5BimalenduR.PolysaccharidesfromEnteromorphacompressa:Isolation,Purifi