微生物与药物变质

1、微生物与药物变质药物中微生物的来源n1.空气 细菌、霉菌、酵母菌n无菌操作区每1000升空气中10个细菌。n2.水 n3.其它 原料、容器、设备、操作人员、包装材料。微生物引起的药物变质n1.药物变质的判断n（1）有病原微生物存在n（2）存在微生物的毒性代谢产物n（3）产品发生可被觉察的物理或化学变化n（4）口服及外用药物的微生物总数超标n（5）无菌制剂中发现有微生物存在2.药物变质的结果n（1）变质的药品引起感染n（2）药物理化性质的改变引起药物失效n（3）药物中的微生物产生有毒的代谢产物3.影响药物变质的因素n污染量 营养因素 含水量 PH值 储藏温度 防止微生物污染药物的措施n1.加强药

2、品生产管理（Good Manufacturing Practice)n交叉污染 容器贴错标签n2.进行微生物学检验n3.使用合格的防腐剂药物的体外抗菌试验n用于抗菌药物的筛选、提取过程中的追踪、抗菌谱的测定、药物含量的测定、药物血浓度测定、药物敏感试验等。n包括抑菌试验和杀菌试验 两者并非绝对体外抑菌试验n一、连续稀释法n可用于测定药物的最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration)和最低杀菌浓度（minimal bactericidal concentration).一、连续稀释法2n1.液体培养基连续稀释法n2.固体培养基连续稀释法 平板法可同时测定大批量

3、试验菌株的MIC，且不受药物颜色及混浊度的影响。MIC检测方法n1.药液稀释：对倍稀释法n共14管，12管为空白对照（不加菌液），13管为阳性对照（不加药物） 。14管为稀释剂或助溶剂对照（浓度与1管相同）。n2.加入菌液0.1毫升（1000100000个细菌），摇匀。n3.培养：37度，1624小时。n4.MIC的确定：试验管呈现澄明的最低药物浓度即为MIC。二、琼脂扩散法n1.滤纸片法 新药的初筛及临床的药敏试验n2.打孔法 药物血浓度的检测n3.挖沟法 一种药物对几种试验菌的抗菌作用体外杀菌试验n最低杀菌浓度（MBC）也可称之为最低致死浓度（MLC)。n取MIC终点以上未长菌的各管培养液

4、，分别移种于另一无菌平板上，培养后平板上无菌生长（或少于5个菌落）的药物最低浓度为该药的MBC（或MLC）。联合抗菌试验n两种抗菌药物、药物与不同PH、药物与不同离子溶液的相互影响。n1.协同 加强作用n2.拮抗 减弱作用n3.无关 相互无影响n4.累加 作用为二者之和一、纸条试验n在已接种试验菌的平板表面垂直放置两条各浸有一种药液的滤纸条，培养后根据抑菌区的加强、减弱或无影响来判断它们在联合应用时的效应。二、棋盘格法nA药各稀释度按纵行定量加入各管。nB药各稀释度按横排定量加入各管。n加入定量菌液，经培养后观察结果。两药同时检测单独MIC。nFIC（A） A药与B药联合试验时A药的MICn

5、A药单独试验时的MICnFIC为部分抑菌浓度nFIC（B）B药与A药联合试验时B药的MICn B药单独试验时的MIC n FIC指数FIC(A)+FIC(B)n 2 拮抗 体外抗菌试验的影响因素n1.试验菌 标准菌株 临床新分离菌株n2.培养基 n3.抗菌药物 浓度 稀释 n4.对照试验n（1）试验菌对照n（2）已知药物对照n（3）溶剂及稀释液对照药物制剂的微生物学检查n一、无菌制剂的无菌检查n各种注射剂（针剂、输液）手术及眼科制剂都必须无活的微生物。n1.无菌检查的基本原则n 采用严格的无菌操作方法，将被检药品置不同培养基内培养，观察有无微生物生长，以判断被检药品是否合格。2.无菌检查抽样n

6、（1）百分数抽样法：每批的25n（2）固定抽样法：220n3.培养基及培养基灵敏度试验n培养基无菌试验n用已知不同菌株做生长试验来监控。n菌种有：藤黄八叠球菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉。4.阳性对照菌及抑细菌抑真菌试验n（1）阳性对照菌液是为供试品做阳性对照试验使用的。其目的是检查阳性菌在加入供试品的培养基中能否生长，以验证供试品有无抑菌活性物质和试验条件是否符合要求。n（2）抑细菌抑真菌试验：加供试品的培养管与未加供试品的培养管比较，以判断供试品有无抑菌作用。（如有抑菌作用可加入灭活剂或用薄膜过滤法检测）5.检查法n（1）直接接种法： 适用于非抗菌

7、作用的供试品。n（2）薄膜过滤法：适用于有抗菌作用的或大容量的供试品。特殊药品的无菌检查法n供试品中加入13聚山梨酸80（吐温80），其作用是使油类药物均匀分散，便于检出微生物。油类药物的无菌检查细菌总数的测定口服药及外用药的微生物学检查n需要限制性控制微生物的数量和种类。n1.细菌总数、霉菌总数低于规定限量（细菌总数1克或1毫升不超过10104CFU,真菌数1克或1毫升不超过10103CFU)。n2.口服药物不得检出大肠埃希菌、沙门菌。n3.外用药不得检出铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、破伤风梭菌。n4.不得检出活螨（含糖的剂型应重点检查）。平板菌落计数法限制条件n1.菌落形成单位（colon

8、y forming units,CFU）为计数单位。一个菌落就是一个菌落形成单位，它可以由一个也可以由多个菌细胞形成。n2.受特定培养基和培养条件限制 普通培养基，需氧或兼性厌氧，3035度，48小时。n3.有繁殖能力的菌细胞才能被认定“活菌”。平板菌落计数法方法n1.试验前的准备n2.供试品取样、供试液的制备（10毫升或10克加入稀释剂成1：10供试液）n3.供试液的稀释（10倍递增稀释法）n1:10，1:102,1:103三级n4.注平皿（每级1毫升15毫升培养基）n5.培养：3035度，48小时n6.菌落数（30300）乘以稀释倍数为结果。n7.不合格应复试。霉菌数及酵母菌数测定n平板菌

9、落计数法（霉菌和酵母菌培养特性）n1.用真菌培养基（玫瑰红钠琼脂，沙氏葡萄糖琼脂等）n2.PH56范围n3.生长温度2228度n4.一般培养72小时至一周。n5.方法基本同细菌总数测定。大肠埃希菌检查法n检验程序n供试品 稀释供试液 胆盐乳糖增菌n370C Mac平板或EMB平板 370C1824hn1824h 乳糖发酵n纯培养 370C 染色、镜检染色、镜检 报告报告n 1824h IMViC试验沙门菌检查法n检验程序n供试品 供试液 增菌 360C1824hn选择鉴别平板 360C 革兰染色、镜检n 1824h 生化反应 报告 n 玻片凝集试验n 金黄色葡萄球菌检查法n药品在适宜的培养基中增菌、分离、纯培养、革兰染色镜检、血浆凝固酶试验，以确定是否污染金黄色葡萄球菌。n1.革兰阳性球菌，葡萄状排列n2.金黄色菌落n3.血浆凝固酶试验阳性铜绿假单胞菌检查法n药品在适宜的培养基中增菌、分离、纯培养、革兰染色镜检、生化试验进行检验。n1.形态：革兰阴性