自动洗板机与ELISA洗涤问题的解决

1、自动洗板机与ELISA洗涤问题的解决l 上海精睿生物科技发展有限公司l 上海市鑫都路2699弄80号102室l 联系电话 传真 公司网址：l www.精睿.中国精睿.中国l 免费咨询电话：l 400-820-3840酶联免疫吸附实验（ELISA）l 酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay 简称ELISA)是在免疫酶技术(immunoenzymatic techniques) 上发展起来的一种新型免疫测定技术。l ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相

2、结合起来的一种敏感性很高的试验技术。 ELISA基本流程（上）l 1.包被：用包被液将抗体稀释至蛋白质含量为0.520gml，按100ul/孔加入酶标板，4包被过夜。l 2.洗板：次日弃去孔内液体，除去残留液体，加入洗涤液（约280-300ul/孔），漂洗2-3次，每次3-5min。l 3.封闭：按200-250ul/孔加入封闭液，室温2-3小时或371-2小时，也可4封闭过夜，然后弃去孔内封闭液。l 4.样品处理：用洗涤液或样品稀释液将待检样品(含未知抗原)稀释至所需浓度l 5.标准液：用洗涤液或样品稀释液将标准液稀释至所需浓度（定性分析可省略本步骤）；ELISA基本流程（下）l 6.加样：

3、按排列顺序依次加入50-100ul/孔稀释好的标准液、处理过的待检样品、阴性对照及阳性对照，室温或37 孵育30-60min；l 7.洗板：同步骤2；l 8.加酶标抗体：酶标抗体的稀释按产品说明书，按50-100ul/孔加入新鲜配制的酶标抗体，室温或37孵育1小时；l 9.洗板：同步骤2l 10.加底物液显色：按100-150ul/孔加入新配制的TMB底物溶液，室温避光反应1530分钟。l 11. 终止反应：于各反应孔中加入50ul的终止液。l 12. 结果判定：在酶标仪上于405nm(若以ABTS显色，则410nm)处测OD值。检测时以空白对照孔调零后测各孔OD值，若样品孔中的OD值大于阴性

4、对照孔的2.1倍，即为阳性。 酶联免疫吸附实验（ELISA）的洗涤l 在酶联免疫试验中，洗板是非常重要的过程。酶联免疫试验(ELISA)洗涤过程虽不是一个反应过程，但却也决定着实验的成败。l ELISA就是通过洗涤来达到分离游离和结合的酶标记物的目的通过洗涤来达到分离游离和结合的酶标记物的目的，通过洗涤以清除残留在微孔板中未能与固相抗原或抗体相结合的物质，以及在反应过程中的非特异性吸附于固相载体上的干扰物质。l 聚苯乙烯对蛋白质的吸附是普遍的，在ELISA测定的反应过程中应尽量避免非特异性吸附，洗涤时又应将这些非特异性吸附的干扰物质洗涤掉。l 洗涤如不彻底，特别是最后一次，如有酶结合物的非特异

5、性吸附，如有酶结合物的非特异性吸附，将使空白值升高将使空白值升高。另外，在间接法中如血清标本内的非特异性间接法中如血清标本内的非特异性IgG吸附在固体上而未被洗涤，也将与酶标抗体作用而产生干扰。吸附在固体上而未被洗涤，也将与酶标抗体作用而产生干扰。l 在ELISA操作中，洗涤是非常关键的，应引起操作者的高度重视 。l 每进行一次ELISA，至少有3至4步实验涉及洗板、每步3至4次，总共十几次，有一定的工作量和劳动强度。手工洗板与机器洗板l 通常微孔板条的洗涤主要有两种方式，一种是手工洗涤，一种是使用洗板机洗涤。前者对工作量不大的临床实验室，可能较为经济方便，但如操作不规范，有可能会造成板孔之间

6、的相互交叉“污染”。因此，使用洗板机洗涤，不但可减轻实验室技术人员的劳动强度，不但可减轻实验室技术人员的劳动强度，而且有利于保证而且有利于保证ELISA测定的特异性测定的特异性。l 洗板机经过数十年的发展，由最初简单的多头吸和加液系统，发展到了今天的融合多种洗涤功能于一身的全自动洗板机，如震荡、涡流、底部冲洗、两点吸液、连续式冲洗等多种功能方式，并且冲洗压力、冲洗距离、冲洗时间可根据需要来进行调节，此外有的还具有不同类型微孔形状的选择功能。 l 洗板环境：洗板环境实际上是一组有利于改进洗涤效果的参数及洗涤动作。对于具体应用来说，有的很实用，效果也不错，如底部冲洗、两点吸液、震动、交叉吸液(漂洗

7、)等；而有的可能实际洗涤效果并不佳。对洗板参数和洗涤动作的精心全面的设计，应可以取得很好的洗涤效果。 洗板机洗涤板孔的一般机制洗板机洗涤板孔的一般机制l 洗板机洗涤板孔的一般机制主要涉及到两个物理作用过程，一是通过加液和吸液对原板孔中液体的一个直接稀释过程，其优劣的评价指标是每次吸液后，板孔中液体的残留量；二是与加液和吸液之间所间隔的时间有关的对板孔内残留液体的间接稀释过程，这个过程与液体的扩散有关，间隔时间越长则扩散越充分。l 因此，在洗板机的研制中，要达到最佳的洗板效果，就需要围绕这两个方面来做文章。首先要尽可能的降低每次吸液后板孔内液体的残留量。这是评价洗板机洗板效果的最为关键的参数。通

8、常为降低洗板机每次吸液后的液体残留量，可采用两点吸液的方式吸液。其二是加快扩散的速率来缩短加液和吸液之间的间隔时间，同时保证有充分的扩散。通常的措施有震荡、涡流、底部冲洗和连续式冲洗等，适当增加震荡的振幅和频率可增加扩散的充分性。 洗板机的发展洗板机的发展l (一)简易型洗板机：简易型也可称为手动式洗板机，一般由负压泵与清洗头组成，可完成最基本的吸液动作和加液动作的装置。这类装置，成本低，使用方便，工作量不大时可以使用。l (二)自动式洗板机：其基本结构与简易型洗板机一样，一般也是由负压泵与清洗头组成，但有自动程序控制功能，仪器可根据用户的设置完成预定次数与条数的洗板，有的具有简单的储存功能。

9、主要目的是利用自动化技术，替代手工操作。其中有条式与板式之分。如LABSYSTEM的W4，BIORAD早期的1250，拓普公司的DEM2等。l (三)集成环境式洗板机：此类洗板机是随着ELISA的普遍应用，由仪器生产厂商根据ELISA应用专家的建议，结合各自对洗板技术的研究而发展起来的，其特点在于能提供良好的洗板环境，强调洗涤效果而非自动化，具有一定的智能特性，如LABSYSTEM的ACSENT WASH，拓普的DEM-3等。 洗板机的作用 l 替代实验人员工作，减轻实验人员的劳动强度替代实验人员工作，减轻实验人员的劳动强度。ELISA是一项比较成熟经典技术，它是一种非均相免疫分析，即在反应中

10、的每一步都有洗涤过程，从而去除未反应物质和干扰物质，ELISA的洗板工作是一项简单、重复的机械工作，完全可以由洗板机来完成，实验人员有更多的时间做更重要的工作。l 保证保证ELISA结果的可重复性结果的可重复性：洗板机大多是由微电脑控制的，能够准确地按照设定的参数运行，在正确使用和正确运行的前提下，结果的可重复性是容易得到保证的。l 有效防止生物实验危险因子对环境的污染有效防止生物实验危险因子对环境的污染：进行ELISA检测时，经常要使用血清、体液、组织等生物材料，任何生物材料都应视为传染性的。洗板机洗板时，将所有的废液吸进废液瓶中，容易进行无害化处容易进行无害化处理理。洗板机的选购时应考虑的

11、因素l 洗涤功能的充分性：能否提供可选择的洗板环境，如洗板次数、条数、浸泡时间等是洗板机的基本参数，一般均可满足。 l 板孔的兼容性与扩展性：兼容性主要是对于国内不同规格、尺寸略有差异的微孔板的兼容，仪器应具有对微孔板的位置调节功能，适应国内ELISA试剂盒中微孔板条的实际情况。 l 仪器自身及洗涤效果的可靠性：一是仪器自身的可靠性，保证仪器在使用寿命期内可以正常显示、精确运动等，这可通过考查仪器生产厂商的技术与生产实力来论证；二是洗涤效果的可靠性，即真正达到代替手工洗涤、甚至优于手工洗涤的目的。l 配件是否充分：厂方是否可以提供常用的、易损的配件，如清洗头，应该8道、12道各备用1个，并且定

12、期淘汰，像洗液瓶、硅胶管等应可方便买到。 l 售后服务是否及时、价格是否合理：洗板机是使用率相对较高的仪器，单从运动角度对比，其频率是酶标仪的几十倍，有的医院使用2年就报废，原因在于没有售后服务或售后服务价格太高，有的仅因为缺少一个配件而使整机报废，十分可惜。故及时的售后服务与相对合理的服务价格，是购买洗板机应考虑的因素。 l 人机界面是否友好，最好是中文显示。JR2008A型96/384多功能自动洗板机l JR2008-A型自动96/384孔微孔板清洗机是由上海精睿生物科技发展有限公司于2008年隆重推出的新一代多功能的微孔反应板清洗机器，由微电脑控制，能够自动完成多种规格的96孔和384孔

13、酶标微孔反应的清洗工作，是进行酶联免疫吸附实验（ELISA）必不可少的设备，可广泛用于从事生命科学研究工作的科研院所，高等院校以及医院、血站、疾病控制中心等单位。 操作步骤l 开机：打开电源开关，仪器进行初始化，自动提示，然后处于待机状态l 清洗头清洗：按下清洗键，清洗头将在清洗槽处进行清洗。l 编程：按下编程键，根据机器的提示对洗板参数进行设置，最后保存程序时将这些参数保存到设定的程序中。l 运行：按下增加键，减少键和确定键选择合适的程序，然后按下运行键开始洗板。编程既洗涤参数设置l 按下编程键，出现选择板型，96孔或384孔，通过增加或减少键进行选择，按确认键进入下一项选择l 清洗方式：板

14、洗、条洗、单、双、逐排l 清洗通道数：8、12、16、24l 清洗条数：112（96孔）；124（384）l 清洗容量：50400l ；l 清洗次数：120次l 暂停时间：060秒l 浸泡时间：0250秒l 振荡设定：1或0l 吸液时间：10010000毫秒l 吸液方式：直接吸液或旋转吸液l 浸泡完后是否吸干：是或否l 最后保存程序。使用JR2008A型自动洗板机时应注意l 洗液瓶和废液瓶一定要旋紧，以免漏气；l 废液瓶中的废液不能超过瓶颈处，一定要及时清空；l 酶标板一定要放卡在托盘内；严守生产质量，保证售后服务l 精睿公司每一台仪器从设计加工到出厂，在每一个零件上、每一个环节中，都体现着精

15、睿人一丝不苟的工作态度。l 我们每一台出厂的仪器都由高级工程师亲自把关调试。l 售出的每一台仪器都由工程师安装调试，对操作人员进行培训，保证仪器能够得到正确使用和正常运行。l 我们对洗板机提供 三年的质保，难能可贵。（市场中同类产品的质保多为一年。）l 精睿公司免费服务咨询电话：400-820-3840精睿公司提供ELISA一条龙服务l 试剂（反应的主体） 主要试剂：抗原、抗体、酶 辅助试剂：包被液、洗涤液、封闭液、稀释液、底物液、终止液l 酶标板：96孔和384孔，反应的载体l 洗板机：可靠实验的保证l 酶标仪：量化的结果判定可拆分使用的384孔酶标板l 专利产品l 高通量（384孔）l 微

16、型化（80微升）l 易拆分（使用方便）l 品种齐全l 价格便宜l 品质保证96孔酶标板l 透明板用于ELISA 低吸附能力（100200ng/cm2） 中吸附能力（200300ng/cm2） 高吸附能力（300400ng/cm2）l 黑色板用于免疫荧光实验l 白色板用于自发光实验l 8*12可任意拆分JR-09系列系列96/384酶标仪酶标仪l JR-09系列系列96/384酶标仪酶标仪采用当今先进的内嵌式计算机系统，处理能力大幅提高，使之具备了精准可靠、快捷稳定的卓越性能，能够阅读处理96孔和384孔酶标反应板。其强大的功能支持和新颖的人机互动操作平台，给了用户极其灵活、独具个性的使用感受， 可广泛应用于医院临床诊断、免疫病理检测、微生物抗原及抗体检测、寄生虫病诊断、血液病诊断、内分泌障碍测定、植物病虫害研究学等领域，是具有国际先进水平，在国内处于领先地位的新一代高级自动酶标仪。多通道加液器l 精睿更为您提供了完善的高通高通量实验的加样量实验的加样方案：自动加样系统、16/24道排枪。l 每个通道独立控制，特别设计用于384孔微孔板的加样，也很方便的向96孔板加样l 量程有： 101