含量测定方法及验证

1、含量测定方法及验证l第一节第一节 定量分析方法的分类与特点定量分析方法的分类与特点 定量分析方法的计算定量分析方法的计算药典对药物的含量限度的表示方法药典对药物的含量限度的表示方法l原料药：多以原料药：多以%表示，有二种情况表示，有二种情况按原料药本身形式计算其含量按原料药本身形式计算其含量例例 ：阿司匹林（：阿司匹林（P.P.1111）按干燥品计）按干燥品计不得少于不得少于9 99 9.5%.5%对氨基水杨酸钠按干燥品计不得少于对氨基水杨酸钠按干燥品计不得少于99.0%99.0%凡未规定上限的，药典凡例中规定，凡未规定上限的，药典凡例中规定，其含量上限不得超过其含量上限不得超过101.0%1

2、01.0%。由于药物组成不定，需以另一种稳由于药物组成不定，需以另一种稳定形式计算含量定形式计算含量例例 ：氢氧化铝：氢氧化铝 Al(OH) Al(OH)3 3 以含三氧化以含三氧化二铝（二铝（AlAl2 2OO3 3）计，不得少于）计，不得少于48 .0%48 .0%l制剂：制剂的含量限度表示方法有三种情制剂：制剂的含量限度表示方法有三种情况况按标示量计算按标示量计算标示量即规格量，生产厂家的处方量。标示量即规格量，生产厂家的处方量。它是以标示量为它是以标示量为100%100%，将测得含量与，将测得含量与之相比较，求出相对于标示量的百分之相比较，求出相对于标示量的百分含量。含量。例：维生素例

3、：维生素B B1 1注射液含维生素注射液含维生素B B1 1应为应为标示量的标示量的95.0%95.0%105.0%105.0%干酵母片含蛋白质不得少于标示量的干酵母片含蛋白质不得少于标示量的40.0%40.0%直接用直接用%含量规定范围（主药含量含量规定范围（主药含量微）微）例：复方碘溶液例：复方碘溶液 含含 I 应为应为4 .5% 5 .5% 含含 KI 应为应为9 .5% 10 .5% 复方氯化钠注射液复方氯化钠注射液 含总含总Cl-量量 0.52%0.58% 含含KCl量量 0.028%0.032% 含含CaCl22H2O 0.031%0.035%以重量规定含量范围（多为复方制以重量规

4、定含量范围（多为复方制剂）剂）例：复方炔诺酮片例：复方炔诺酮片 炔诺酮炔诺酮 0.540.66mg /片片 g /片片 复方磺胺甲噁唑片复方磺胺甲噁唑片 SMZ 0.3600.440 g /片片 TMP 72.088.0mg /片片6一、容量分析法一、容量分析法滴定法滴定法aA+bB cC+dDaA+bB cC+dD（ A A被测药物；被测药物； B B滴定液）滴定液）（一）、滴定度的概念（一）、滴定度的概念T-T-与与1ml1ml规定浓度的标准溶液所相规定浓度的标准溶液所相当的被测物的当的被测物的mgmg数。数。（二）、滴定度的计算（二）、滴定度的计算T=MT=MA A mmB B a/b

5、a/b （mg/ml mg/ml ）（三）含量计算（三）含量计算 1 1、直接滴定法、直接滴定法 原料药以原料药以%表示的制剂表示的制剂样品样品% = V% = VF FT/WT/W100% 100% F = NF = N实实 / N/ N理理2 2、间接滴定法、间接滴定法（1）、剩余滴定法中须做空白）、剩余滴定法中须做空白样品样品% =（V空白空白 V测测 )样样 FT/W100% （2）、生成物滴定法）、生成物滴定法aA+bB=cC（生成物）（生成物）+dD ，cC+eE=fF+gG 找到找到A与与E的关系，计算滴定度（的关系，计算滴定度（p.146）（自学）（自学） l相当于标示量相当于

6、标示量%的计算公式的计算公式片剂：片剂：VFT/W平均片重平均片重/标示量标示量100%针剂：针剂： VFT/W/标示量（标示量（g/ml） 100%l以重量以重量/片计的计算公式片计的计算公式VFT/W平均片重平均片重=重量重量/片片 司可巴比妥钠胶囊含量测定：精密称取内容物司可巴比妥钠胶囊含量测定：精密称取内容物0.1385g0.1385g，置碘量瓶中，加水，置碘量瓶中，加水10mL10mL，振摇使溶解，振摇使溶解，精密加溴滴定液（精密加溴滴定液（0.05mol/L0.05mol/L）25 mL25 mL，再加盐，再加盐酸酸5 mL5 mL，立即密塞并振摇，立即密塞并振摇1 1分钟，暗处静

7、置分钟，暗处静置1515分分钟后，加碘化钾试液钟后，加碘化钾试液10 mL10 mL，立即密塞，摇匀，立即密塞，摇匀，用硫代硫酸钠滴定液（用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L0.1mol/L，F=0.992F=0.992）滴）滴定，至近终点时加淀粉指示液，继续滴定至蓝色定，至近终点时加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。已知：样消失，并将滴定结果用空白试验校正。已知：样品消耗硫代硫酸钠滴定液（品消耗硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L0.1mol/L）17.05 17.05 mLmL，空白试验消耗，空白试验消耗25.22mL25.22mL，每，每1mL1mL溴滴定液溴滴定

8、液（0.05mol/L0.05mol/L）相当于）相当于13.01mg13.01mg的司可巴比妥钠。的司可巴比妥钠。计算本品相当于标示量的百分含量（规格计算本品相当于标示量的百分含量（规格0.1g0.1g，2020粒胶囊内容物重粒胶囊内容物重2.7506 g2.7506 g）？）？ (p.90 (p.90生成物生成物滴定法滴定法) )10 1摩尔摩尔司可巴比妥钠与司可巴比妥钠与1 1摩尔溴相当摩尔溴相当T=MAmBNNHNaOCH3OOCH2CH3Br2NNHNaOCH3OOCH3CH2Br BrBr2KIKBrI2I2Na2S2O3NaINa2s4o6+(过量 定量 )+2(剩 余 )2+2

9、2+ 17.05) 13.010.992 2.7506 0.1385 0.1 1000 20100% 精密量取维生素精密量取维生素C C注射液注射液4mL4mL（相当于维生素（相当于维生素C C 0.2g0.2g），加水），加水15mL15mL与丙酮与丙酮2mL2mL，摇匀，放置，摇匀，放置5 5分分钟，加稀醋酸钟，加稀醋酸4mL4mL与淀粉指示液与淀粉指示液1mL1mL，用碘滴定，用碘滴定液液(0.05mol/L)(0.05mol/L)滴定至溶液显蓝色，并持续滴定至溶液显蓝色，并持续3030秒秒钟不退。已知：注射液规格钟不退。已知：注射液规格2mL:0.1g2mL:0.1g，消耗，消耗0.0

10、5mol/L0.05mol/L碘滴定液（碘滴定液（F=1.005F=1.005）22.45mL22.45mL，维，维生素生素C C的分子量为的分子量为176.12176.12，问：，问：（1 1）丙酮和稀醋酸分别起什么作用？）丙酮和稀醋酸分别起什么作用？（2 2）每）每1mL1mL碘滴定液碘滴定液(0.05mol/L)(0.05mol/L)相当于多少相当于多少mgmg的维生素的维生素C C？（3 3）求本品相当于标示量的百分含量？）求本品相当于标示量的百分含量？131摩尔维生素摩尔维生素C与与1摩尔碘相当摩尔碘相当T0.05176.121/1 T V F维生素维生素C标示量标示量 4 0.05

11、 100 4 1000 100OOOHO HO HHC H2O HOOOOO HHC H2O HI2H+CC+2 H I二、光谱分析二、光谱分析（一）、（一）、UV法法1、标准对照法（一点法）、标准对照法（一点法）A样样/A标标 = C样样/C标标，样品样品%= A样样/A标标 C标标F/W100%F=稀释倍数稀释倍数 W=取样量取样量2、百分吸收系数法（、百分吸收系数法（A= E1%cmCL） C% = A / E1%cm 样品样品% = A / E1%cm F/WF = 稀释倍数和浓度换算因子稀释倍数和浓度换算因子W = 取样量取样量 3、标准曲线法（、标准曲线法（y=bxa）由标准曲线或

12、回归方程求出由标准曲线或回归方程求出C样样，再根，再根据据F，W求出样品求出样品%。4、计算分光光度法、计算分光光度法双波长法，差示法均可应用比尔定律双波长法，差示法均可应用比尔定律的公式，以的公式，以A代替吸收度代替吸收度A。差示分光光度法差示分光光度法原理：利用被测物在两种不同溶液中吸收光谱发生原理：利用被测物在两种不同溶液中吸收光谱发生了特征性变化，而共存干扰物在该两种溶液中未引了特征性变化，而共存干扰物在该两种溶液中未引起光谱变化，测定两种溶液的吸收度差值（起光谱变化，测定两种溶液的吸收度差值（A值），值），根据根据A与被测物浓度与被测物浓度C的线性关系进行定量测定。的线性关系进行定量

13、测定。方法：方法： 一定量一定量+酸酸 一定体积一定体积 （测定）（测定） A测测 同样量同样量+碱碱 同样体积同样体积 （参比）（参比） A参参 A测测A参参=A样样干扰物在两种溶液中吸收光谱无变化，即干扰物在两种溶液中吸收光谱无变化，即A杂杂=0， A样样只与样品浓度只与样品浓度C呈线性关系。呈线性关系。供试品220 240 260 280nm ApH10pH10溶液，溶液， 240nm 240nm pH13pH13溶液，溶液， 255nm255nm酸性溶液，无酸性溶液，无 maxmaxA样样=A pH13pH13- - A pH10pH10A标标=A pH13pH13- - A pH10

14、pH10C样样=A样样/A标标C C标标特点：具备一般分光光度法简易、快速、特点：具备一般分光光度法简易、快速、直接读数的优点直接读数的优点;无需事先分离，又能消除无需事先分离，又能消除干扰干扰;提供一个近似理想的参比溶液。提供一个近似理想的参比溶液。A18（二）、（二）、FLU法法以荧光强度以荧光强度R代替吸收度代替吸收度A1、对照品溶液与空白溶液的、对照品溶液与空白溶液的荧光强度之差（荧光强度之差（R R对对）2、供试品溶液与空白溶液的、供试品溶液与空白溶液的荧光强度之差（荧光强度之差（R R样样） R R样样C样样 C对对 R R对对称取己酸孕酮称取己酸孕酮0.0105g,0.0105g

15、,加无水乙醇溶解后加无水乙醇溶解后, ,置置10ml10ml容量瓶中容量瓶中, ,稀释至刻度稀释至刻度, ,摇匀。吸取摇匀。吸取1.00ml,1.00ml,置置100ml100ml容量瓶中容量瓶中, ,加无水乙醇稀释至加无水乙醇稀释至刻度刻度, ,置置1cm1cm吸收池内进行测定吸收池内进行测定, , 根据下列数据根据下列数据, ,求出按干燥品计算的己酸孕酮百分含量。求出按干燥品计算的己酸孕酮百分含量。A=0.390, EA=0.390, E1%1%1cm1cm=393=3930.390 0.390 1010 100% = 含量含量% 复方磺胺甲噁唑片中磺胺甲噁唑（复方磺胺甲噁唑片中磺胺甲噁唑

16、（SMZSMZ）的含）的含量测定：量测定： 精密称取本品（每片含精密称取本品（每片含SMZSMZ为为0.4g0.4g）1010片，片，总重量为总重量为5.5028g5.5028g。精密称取。精密称取SMZSMZ对照品对照品0.0501g0.0501g、片粉、片粉0.0756g0.0756g，按双波长分光光度法，按双波长分光光度法测定测定SMZSMZ含量。在含量。在257nm257nm波长处测得：对照品波长处测得：对照品溶液的吸收度溶液的吸收度A A对对为为0.3300.330，供试溶液的吸收度，供试溶液的吸收度A A样样为为0.3720.372。在。在304nm304nm波长处测得：对照品溶液

17、波长处测得：对照品溶液的吸收度的吸收度A A对对为为0.0090.009，供试溶液的吸收度，供试溶液的吸收度A A样样为为0.0210.021。计算。计算SMZSMZ的含量相当于标示量的百分含的含量相当于标示量的百分含量。量。257nm257nm304nm304nm对照品对照品供试品供试品 0.0756 100.0756 10 100%100%=99.69%对乙酰氨基酚片剂溶出度测定：对乙酰氨基酚片剂溶出度测定：取标示量为取标示量为0.3g0.3g的本品的本品6 6片，依法在片，依法在1000mL1000mL溶剂中测定溶出度。经溶剂中测定溶出度。经3030分钟时，取溶液分钟时，取溶液5mL5m

18、L滤过，精密吸取续滤液滤过，精密吸取续滤液1mL1mL，加，加0.04%0.04%氢氧化氢氧化钠溶液稀释至钠溶液稀释至50mL50mL，摇匀，在，摇匀，在257nm257nm波长处波长处测得每片的吸收度分别为测得每片的吸收度分别为0.3450.345，0.3480.348，0.3510.351，0.3590.359，0.3560.356和和0.3330.333，按其百分吸，按其百分吸收系数为收系数为715715计算出各片的溶出量。限度为标计算出各片的溶出量。限度为标示量的示量的80%80%。并判断其溶出度是否符合规定。并判断其溶出度是否符合规定。 50 1000715= 80.4%片片1：片片

19、2复方苯巴比妥散中苯巴比妥的测定复方苯巴比妥散中苯巴比妥的测定主要成分：苯巴比妥，阿司匹林主要成分：苯巴比妥，阿司匹林原理：在原理：在pH 5.91和和pH 8.04条件下，阿司匹林及水条件下，阿司匹林及水解产物水杨酸等的紫外吸收光谱重合解产物水杨酸等的紫外吸收光谱重合 ， A=0，而，而苯巴比妥在此两苯巴比妥在此两pH条件下的差示光谱在条件下的差示光谱在240nm 处处A值最大，因此可测定此波长处的值最大，因此可测定此波长处的A值，采用标值，采用标准曲线法定量。准曲线法定量。方法：取样品方法：取样品0.12g，加无水乙醇，加无水乙醇20ml，振摇，加，振摇，加水至水至200ml，取，取5ml

20、两份，分别用两份，分别用pH 5.91和和pH 8.04的缓冲液稀释至的缓冲液稀释至50ml，以试剂为空白，在，以试剂为空白，在240nm处处测定吸收度，代入回归方程计算含量。测定吸收度，代入回归方程计算含量。三、色谱分析（三、色谱分析（HPLC和和GC）l内标法：内标法：F = A 内内/ A 标标C标标/C内内样品样品% = A样样/A内内FC内内稀释倍数稀释倍数/W100%或或C样样= R样样/内内/ R标标/内内 C标标（R代表峰面积比值）代表峰面积比值）l外标法（同光谱法）外标法（同光谱法）:标准曲线法标准曲线法标准对照法标准对照法(一点法一点法)系统适用性试验系统适用性试验柱效（理

21、论板数）柱效（理论板数） n=5.54(t n=5.54(tR R/W/Wh/2h/2) )2 2分离度分离度 R= R= 拖尾因子拖尾因子 T= T= 重复性重复性 取对照品或样品溶液，连续进样取对照品或样品溶液，连续进样5 5次，测得峰面积相对标准差次，测得峰面积相对标准差RSDRSD应小于应小于2.0%2.0%2(t2(tR2R2-t -tR1R1) )WW1 1+W+W2 2WW2d2d1 1(R 1.5)(R 1.5)(T=0.95(T=0.951.05)1.05) T=W/2dW/2d1 1d1hWWl HPLCHPLC测定复方测定复方SMZSMZ片中片中SMZSMZ含量，以含量，

22、以SGSG为为内标，测得内标，测得l标 准 液 中 ：标 准 液 中 ： S M ZS M Z 峰 高峰 高 1 4 . 9 0 c m1 4 . 9 0 c m ， 浓 度， 浓 度8.0mg/mL8.0mg/mL，SGSG峰高峰高13.80cm13.80cm，浓度，浓度4.0mg/mL4.0mg/mL。l样品液中：样品液中：SMZSMZ峰高峰高11.92cm11.92cm，SGSG峰高峰高16.20cm16.20cm，浓度，浓度4.0mg/mL4.0mg/mL。l求样品液中求样品液中SMZSMZ的浓度为多少？（进样量均为的浓度为多少？（进样量均为5 5 l l）F=样品（样品（mg/mLm

23、g/mL） =l用用HPLC法测得某药保留时间为法测得某药保留时间为12.54min，半高峰宽半高峰宽3.0mm（纸速（纸速5mm/min），计），计算柱效？算柱效？lN=5.54（12.54/3.0）2 ？lN=5.5412.54/（3.0/5）2 ？N=2420l丙酸睾酮含量测定采用高效液相法：取本品对丙酸睾酮含量测定采用高效液相法：取本品对照品适量，精密称定，加甲醇定量稀释成每照品适量，精密称定，加甲醇定量稀释成每1mL中约含中约含1mg的溶液。精密量取该溶液和内的溶液。精密量取该溶液和内标溶液（标溶液（1.6mg/mL苯丙酸诺龙甲醇溶液）各苯丙酸诺龙甲醇溶液）各5mL，置，置25mL量

24、瓶中，加甲醇稀释至刻度，量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取摇匀，取10 L注入液相色谱仪，记录色谱图。注入液相色谱仪，记录色谱图。另取本品适量，同法测定，内标法计算含量。另取本品适量，同法测定，内标法计算含量。已知对照品溶液为已知对照品溶液为1.052mg/mL，样品溶液为，样品溶液为1.032mg/mL，测得对照液中丙酸睾酮和内标，测得对照液中丙酸睾酮和内标准的峰面积分别为准的峰面积分别为54678和和61258，样品液中丙，样品液中丙酸睾酮和内标准的峰面积分别为酸睾酮和内标准的峰面积分别为52213和和61228，计算丙酸睾酮的含量？计算丙酸睾酮的含量？l52213 / 61228l546

25、78 / 612581.052/1.032=？97.4% 第二节 样品分析的前处理方法v一、概述含金属药物有：富马酸亚铁、葡萄糖酸锑钠、枸橼酸铋钾、葡萄糖酸锌、酒石酸锑钾等。含卤素药物有：泛影酸、三氯叔丁醇、碘番酸、磺溴酞钠等。根据所含金属或卤素在分子中结合的牢固程度，分析前采用不同方法进行预处理。v不经有机破坏处理的分析方法直接测定法l金属原子不与碳直接相连的或C-M键结合不牢固的有机金属药物，在水溶液中电离，可选用适当方法直接测定。例：l富马酸亚铁在热的稀矿酸中溶解，释放出亚铁离子，用硫酸铈滴定液直接滴定。 CHCOOCHCOOFeHClFe2+葡萄糖酸锑钠为组成不定的五价锑化合物，采用间

26、接碘量法测定锑的含量，在酸性条件下，葡萄糖酸锑钠与碘化钾试液作用，Sb5+可氧化KI，析出I2，用Na2S2O3滴定液滴定。枸橼酸铋钾、葡萄糖酸锌EDTA滴定法测定含量。经水解后测定法l本法适合于卤素与脂肪碳链相连者，经加热回流使其水解，有机结合的卤素转变成无机的卤素离子，然后用适当方法进行测定。例：l三氯叔丁醇的含量测定CCl3C(CH3)2OH + 4NaOH3NaCl然后用银量法测定氯化钠含量。回流l注意沉淀转化（加有机溶剂）Fe3+的水解（酸性中滴定）NaCl + AgNO3AgCl剩余AgNO3+ SCN-AgSCNSCN- + Fe3+Fe（SCN）2+终点时AgClAg+ + C

27、l-+SCN-AgSCNl硬脂酸镁与定量硫酸标准溶液共沸，水解生成硬脂酸和硫酸镁，剩余的硫酸标准溶液用氢氧化钠标准溶液回滴。经氧化还原后测定法l碱性还原后测定当卤素结合于芳环上时，因结合较牢固，需在碱性条件下加还原剂回流，使X-C键断裂，形成无机卤化物后测定。例泛影酸的含量测定COONaIIINHCOCH3CH3COHN+3Zn +11NaOHCOONaNH2NH2+ 3NaI回流NaI AgNO3 AgI 曙红钠指示剂 酸性还原后测定例碘番酸，JP采用冰醋酸酸性条件下用锌粉还原，硝酸银滴定液滴定，以四溴酚酞乙酯为指示剂，终点时沉淀由黄色变为绿色。USP，BP，ChP均采用氢氧化钠碱性条件下用

28、锌粉还原，然后用硝酸银滴定液滴定，但指示终点方法不同， ChP采用吸附指示剂曙红钠， USP采用吸附指示剂四溴酚酞乙酯，BP采用电位法指示终点。 v经有机破坏的分析方法湿法破坏lHNO3-HClO4破坏力强，反应激烈，注意勿将内容物蒸干，以免爆炸。适用于生物样品的破坏，所得无机金属离子为高价态。对含氮杂环药物不适宜。lHNO3- H2SO4 适用于大多数有机药物的破坏，所得无机金属离子为高价态。对碱土金属药物不适用，可改用HNO3-HClO4 法。lH2SO4-SO42-本法所得金属离子为低价态，常用于含砷或锑有机药物的破坏。若用本法破坏低碳药物时，宜添加适量淀粉等多碳化合物，以保证破坏过程中

29、将金属离子转变为低价态。其他湿法破坏lHNO3- H2SO4 -HClO4lH2SO4 H2O2lH2SO4 KMnO4l湿法破坏的仪器一般为凯氏烧瓶。 干法破坏l将有机物置坩埚中，加Ca(OH)2或无水 Na2CO3或轻质氧化镁，灼烧灰化，先小火加热，然后高温灰化。l注意：温度应控制在420 以下。本法所得灰分往往不易溶解，但不能丢弃。l本法适用于湿法不易破坏完全的有机物（如含氮杂环），以及不能用硫酸破坏的有机药物，不适用含挥发性金属的有机药物。氧瓶燃烧法（Oxygen flask combustion method）l仪器装置铂金丝硬质玻璃燃烧瓶样品l称样l燃烧分解操作（通O2 1-2 m

30、in，燃烧）l吸收液水-NaOH（含碘、氯药物）例盐酸胺碘酮、碘苯酯、甲状腺粉水- NaOH -H2O2（含溴、含硫药物）例磺溴酞钠水（含氟药物）硝酸溶液（含硒药物）注意注意：l防爆，燃烧瓶应洗涤干净；l氧气要充足，燃烧应完全；l测定含氟药物应用石英燃烧瓶。燃烧分解后的测定方法l滴定法银量法含氯、溴药物（例磺溴酞钠）BrBrBrBrCCHOOHOOSO3NaSO3Na4燃烧分解NaBr Br-+ Ag+AgBr剩余的 Ag+ SCN-AgSCN碘量法含碘药物（例盐酸胺碘酮）OOIH3CNCH3CH3OIHCl燃烧分解 I2 NaI + NaIO I2 + NaOH NaIO NaIO3+ Na

31、I NaI + Br2NaIO3（Br2 + HCOOHHBr + CO2）NaIO3 + 5KI3I2H+I2 + Na2S2O3NaI + Na2S4O6分光光度法含氟药物l例氟尿嘧啶含氟量测定：取15mg样品，经氧瓶燃烧破坏后加水稀释至100ml。要求含氟量应为13.1% -14.6%。NHNOOFH燃烧破坏F-OOOHOHFCH NCH CH COOHCOOHCe3+pH4.3OOOHOCH NCH CH COOCOOCeFOH（蓝紫色）（茜素氟蓝）理论含氟量为：18.9984/ 130.08*100%=14.61%测定含量时以标准氟化钠（20ugF/ml）为对照，置2cm比色皿中，以试剂为空白，于610nm波长处测定对照和样品的吸收度。计算含氟量。AuAsX Cs X100WX 100%=F%49准确度准确度