第15章 免疫细胞标志与功能检测技术

1、第十五章第十五章 免疫细胞标志和免疫细胞标志和功能检测技术功能检测技术医学技术学院免疫教研室医学技术学院免疫教研室齐齐哈尔医学院免疫掌握：掌握：免疫细胞的分离免疫细胞的分离; ; 淋巴细胞功能检测淋巴细胞功能检测熟悉：熟悉：免疫细胞表面标志和功能检测的临床免疫细胞表面标志和功能检测的临床 应用应用; ;淋巴细胞表面标志及亚群分类；淋巴细胞表面标志及亚群分类；了解：了解：其他免疫细胞功能检测技术；检测的其他免疫细胞功能检测技术；检测的 临床应用。临床应用。齐齐哈尔医学院免疫一、免疫细胞的分离一、免疫细胞的分离二、淋巴细胞标志及亚群分类二、淋巴细胞标志及亚群分类三、抗原提呈细胞的表面标志三、抗原提

2、呈细胞的表面标志四、淋巴细胞的功能检测四、淋巴细胞的功能检测五、其他免疫细胞功能检测技术五、其他免疫细胞功能检测技术六、免疫细胞表面标志和功能检测的临床六、免疫细胞表面标志和功能检测的临床应用应用齐齐哈尔医学院免疫齐齐哈尔医学院免疫一、外周血单个核细胞分离一、外周血单个核细胞分离 二、淋巴细胞的分离二、淋巴细胞的分离 三、三、T T、B B细胞和细胞和T T细胞亚群的分细胞亚群的分离离四、不同分离方法的评价四、不同分离方法的评价 第一节第一节 免疫细胞的分离免疫细胞的分离掌握掌握齐齐哈尔医学院免疫外周血单个核细胞外周血单个核细胞( (perpheral blood mononuclear ce

3、lls, PBMC) )：包括淋巴：包括淋巴细胞和单核细胞。细胞和单核细胞。一、外周血单个核细胞分离一、外周血单个核细胞分离掌握掌握齐齐哈尔医学院免疫1.1.不同细胞不同细胞密度密度不同不同2.2.不同细胞表面生物学不同细胞表面生物学特性特性不同不同3.3.不同细胞表面不同细胞表面分化抗原分化抗原不同不同细胞分离基本原理细胞分离基本原理了解了解齐齐哈尔医学院免疫红细胞和粒细胞密度为红细胞和粒细胞密度为1.092-1.092-1.093单个核细胞密度为单个核细胞密度为1.075-1.0901.075-1.090 选择比重为选择比重为1.075-1.090 1.075-1.090 介质介质分离分离

4、PBMCPBMC不同细胞密度不同不同细胞密度不同熟悉熟悉齐齐哈尔医学院免疫对分离介质的要求对分离介质的要求1.1.对细胞无毒对细胞无毒2.2.基本等渗基本等渗3.3.不溶于血浆等分离物质不溶于血浆等分离物质4.4.有要求的比重有要求的比重2 2份份6%6%聚蔗糖聚蔗糖蒸馏水溶液蒸馏水溶液+1+1份份34%34%泛影葡胺泛影葡胺比重为比重为1.0771.0770.0020.002熟悉熟悉齐齐哈尔医学院免疫聚蔗糖泛影葡胺聚蔗糖泛影葡胺-FicollFicoll分离液分离液原理：原理：单次单次差速密度梯度离心差速密度梯度离心的分离法的分离法组成：组成：2 2份份6%6%聚蔗糖蒸馏水溶液聚蔗糖蒸馏水溶

5、液+1+1份份34%34%泛影葡胺生理盐水溶液。泛影葡胺生理盐水溶液。比重：比重：1.0771.0770.0010.001( (最佳最佳) ) 掌握掌握齐齐哈尔医学院免疫 1.0771.0770.0010.001的分层液可将细胞分离的分层液可将细胞分离红细胞：红细胞：1.0931.093粒细胞：粒细胞：1.0921.092单个核细胞单个核细胞1.0761.0761.0901.090 齐齐哈尔医学院免疫齐齐哈尔医学院免疫 密度梯度离心密度梯度离心(Ficoll)(Ficoll)离心离心细胞纯度细胞纯度95%95%；细胞收率；细胞收率80%80%；淋巴细胞；淋巴细胞90%-95% 90%-95%

6、齐齐哈尔医学院免疫1.1.贴壁粘附法贴壁粘附法 2.2.吸附柱过滤法吸附柱过滤法: : 将将PBMCPBMC加入葡聚糖加入葡聚糖凝胶凝胶SephadexG-10SephadexG-10中，从柱上洗脱下中，从柱上洗脱下来的主要是来的主要是淋巴细胞。淋巴细胞。3.Percoll3.Percoll分离液法：分离液法：经聚乙烯吡咯烷经聚乙烯吡咯烷酮（酮（PVP)PVP)处理的硅胶颗粒。处理的硅胶颗粒。目的目的-去除单核细胞去除单核细胞二二 、淋巴细胞分离、淋巴细胞分离掌握掌握齐齐哈尔医学院免疫 死细胞、血小板死细胞、血小板 单核细胞单核细胞 淋巴细胞淋巴细胞 粒细胞粒细胞 红细胞红细胞 Percoll

7、Percoll：经聚乙烯吡咯烷酮（经聚乙烯吡咯烷酮（PVP)PVP)处理的硅胶颗粒处理的硅胶颗粒。齐齐哈尔医学院免疫( (一一) )磁性微球分离法磁性微球分离法 ( (二二) )荧光激活细胞分离仪分离法荧光激活细胞分离仪分离法 三、三、T T、B B细胞和细胞和T T细胞亚群细胞亚群的分离的分离熟悉熟悉磁珠磁珠高分子高分子材料材料齐齐哈尔医学院免疫磁珠大小可以选择磁珠大小可以选择齐齐哈尔医学院免疫磁性微球分离法细胞分选过程磁性微球分离法细胞分选过程齐齐哈尔医学院免疫齐齐哈尔医学院免疫齐齐哈尔医学院免疫大小免疫磁珠分离细胞的特点比较大小免疫磁珠分离细胞的特点比较 比较项目比较项目大磁珠大磁珠小磁

8、珠小磁珠对细胞的影响对细胞造成机械压力，影响其生物学活性，不利于分离后培养。对细胞温和，不影响分离细胞的后续培养。对流式细胞仪的影响对流式细胞仪的影响阻塞流式细胞仪的喷嘴，影响散射光。可直接上流式细胞仪检测，不影响散射光。分离条件要求技术简单，分离可在试管中完成。需要很强的磁场来分离细胞。 收率得率高。得率高。得率不高。得率不高。纯度纯度低。纯度低。纯度高。纯度高。分离时间分离时间分离速度快。分离速度快。分离速度慢。分离速度慢。分离成本分离成本成本低成本低。需要很强的磁场来分离，需要很强的磁场来分离，需要一次性分离柱，不需要一次性分离柱，不能在普通试管能在普通试管齐齐哈尔医学院免疫免疫磁珠细胞

9、分选装置免疫磁珠细胞分选装置齐齐哈尔医学院免疫全自动细胞分选系统全自动细胞分选系统 齐齐哈尔医学院免疫 荧光激活细胞分离仪分离法荧光激活细胞分离仪分离法 齐齐哈尔医学院免疫流式细胞分析仪流式细胞分析仪齐齐哈尔医学院免疫四、不同细胞分离方法的综合评价四、不同细胞分离方法的综合评价早期：早期：根据不同免疫细胞的物理属性和根据不同免疫细胞的物理属性和生物学属性进行分离生物学属性进行分离近期：近期：利用细胞表面标志进行分离利用细胞表面标志进行分离了解了解齐齐哈尔医学院免疫1.1.分离外周血单个核细胞，单次差速密度梯度离分离外周血单个核细胞，单次差速密度梯度离 心法常心法常用分层液是（用分层液是（ ）A

10、 A 明胶明胶 B B 右旋糖酐右旋糖酐 C FicollC Ficoll分层液分层液 D PercollD Percoll分层液分层液 E E 葡聚糖葡聚糖2.Ficoll2.Ficoll液单次密度梯度离心后外周血细胞分布由上至下液单次密度梯度离心后外周血细胞分布由上至下依次为（依次为（ ）A A 单个核细胞、血小板和血浆、粒细胞、红细胞单个核细胞、血小板和血浆、粒细胞、红细胞B B 血小板和血浆、粒细胞、单个核细胞、红细胞血小板和血浆、粒细胞、单个核细胞、红细胞C C 血小板和血浆、单个核细胞、粒细胞、红细胞血小板和血浆、单个核细胞、粒细胞、红细胞D D 血小板和血浆、单个核细胞、红细胞、

11、粒细胞血小板和血浆、单个核细胞、红细胞、粒细胞E E 血小板和血浆、红细胞、单个核细胞、粒细胞血小板和血浆、红细胞、单个核细胞、粒细胞用玻璃纤用玻璃纤3.维或葡聚糖凝胶维或葡聚糖凝胶Sephadex-G10柱分离细胞时，从柱上柱分离细胞时，从柱上洗脱下的细胞主要是洗脱下的细胞主要是( )A粒细胞粒细胞 B淋巴细胞淋巴细胞 C单核细胞单核细胞 DT细细胞胞 EB细胞细胞 CCB齐齐哈尔医学院免疫4.4.采用采用FicollFicoll密度梯度分离法分离得到的细胞主密度梯度分离法分离得到的细胞主要为（要为（ ）A A 单核细胞和粒细胞单核细胞和粒细胞 B B 单核细胞单核细胞C C 淋巴细胞淋巴细

12、胞 D D 淋巴细胞和单核细胞淋巴细胞和单核细胞E E 淋巴细胞和粒细胞淋巴细胞和粒细胞 5.Percoll分离液的主要成分是分离液的主要成分是( )A聚蔗糖聚蔗糖 B泛影葡胺泛影葡胺 C聚乙二醇聚乙二醇D聚乙烯吡咯烷酮聚乙烯吡咯烷酮 E经聚乙烯吡咯烷酮处经聚乙烯吡咯烷酮处理的硅胶颗粒理的硅胶颗粒6.分离人外周血淋巴细胞分层液的最佳密度为分离人外周血淋巴细胞分层液的最佳密度为( )A.1.030 B.1.035 C.1.092 D.1.020 E.1.077 7.Ficoll淋巴细胞分离液的主要成分是淋巴细胞分离液的主要成分是( ) A聚蔗糖聚蔗糖 B泛影葡胺泛影葡胺 C聚乙二醇聚乙二醇D聚蔗

13、糖聚蔗糖+泛影葡胺泛影葡胺 E聚蔗糖聚蔗糖+聚乙二醇聚乙二醇DEED齐齐哈尔医学院免疫第二节第二节 淋巴细胞标志及淋巴细胞标志及亚群分类亚群分类齐齐哈尔医学院免疫细胞表面分化抗原细胞表面分化抗原(Cluster of differentiation CD)CD1a-CD350CD1a-CD350齐齐哈尔医学院免疫( (一一)CD3)CD3+ +CD4CD4+ +CD8CD8- -辅助性辅助性T T细胞细胞 (Th)(Th) CD3 CD3+ +CD4CD4+ +CD30CD30- - Th1 Th1 CD3 CD3+ +CD4CD4+ +CD30CD30+ + Th2Th2( (二二)CD3+

14、CD4-CD8+)CD3+CD4-CD8+细胞毒性细胞毒性T T细胞细胞(CTL)(CTL)( (三三) )调节性调节性T T细胞细胞 CD4CD4+ +CD25CD25+ +Foxp3Foxp3+ + Tr1IL-10 Tr1IL-10 Th3TFG- Th3TFG-一、一、T T细胞表面标志及亚群细胞表面标志及亚群熟悉熟悉CD4CD4+ + Th Th细胞亚群分化的调节作用细胞亚群分化的调节作用齐齐哈尔医学院免疫CDCD抗原抗原 CD2CD2CD3CD3CD4 CD4 CD8 CD8 CD25CD25CD28CD28CD40LCD40L特异性特异性 全部全部T T细胞和部分细胞和部分NKN

15、K细胞细胞( (E E受体受体) ) 成熟成熟T T细胞细胞 ( (特征性标志特征性标志) )辅助性辅助性T T细胞细胞 ( (HIVHIV受体受体) )细胞毒性细胞毒性T T细胞细胞活化活化T T细胞细胞( (IL-2RIL-2R) )T T细胞细胞活化活化T T细胞细胞 T T细胞表面主要细胞表面主要CDCD抗原及其特性抗原及其特性齐齐哈尔医学院免疫mIg(鉴定鉴定B细胞的指标细胞的指标)FcFc受体受体补体受体补体受体EBEB病毒受体病毒受体CDCD分子分子: :CD19CD19小鼠红细胞受体小鼠红细胞受体二、二、B B细胞表面标志细胞表面标志熟悉熟悉分类分类: :B1(CD19+CD5

16、+)B2(CD19+CD5-) 性性 质质B - 1B - 2产产 生生 时时 间间更更 新新 方方 式式自自 发发 性性Ig产产 生生特特 异异 性性分分 泌泌 的的Ig类类 别别体体 细细 胞胞 突突 变变 频频 率率对对T I抗抗 原原 的的 应应 答答对对T D抗抗 原原 的的 应应 答答胎胎 儿儿 期期自自 我我 更更 新新高高低低Ig M为为 主主低低/无无是是可可 能能出出 生生 后后骨骨 髓髓 产产 生生低低高高Ig G为为 主主高高可可 能能是是 性性 质质B - 1B - 2产产 生生 时时 间间更更 新新 方方 式式自自 发发 性性Ig产产 生生特特 异异 性性分分 泌泌

17、 的的Ig类类 别别体体 细细 胞胞 突突 变变 频频 率率对对T I抗抗 原原 的的 应应 答答对对T D抗抗 原原 的的 应应 答答胎胎 儿儿 期期自自 我我 更更 新新高高低低I g M为为 主主低低/无无是是可可 能能出出 生生 后后骨骨 髓髓 产产 生生低低高高I g G为为 主主高高可可 能能是是 性性 质质B -1B -2产产 生生 时时 间间更更 新新 方方 式式自自 发发 性性Ig产产 生生特特 异异 性性分分 泌泌 的的Ig类类 别别体体 细细 胞胞 突突 变变 频频 率率对对T I抗抗 原原 的的 应应 答答对对T D抗抗 原原 的的 应应 答答胎胎 儿儿 期期自自 我我

18、 更更 新新高高低低Ig M为为 主主低低/无无是是可可 能能出出 生生 后后骨骨 髓髓 产产 生生低低高高Ig G为为 主主高高可可 能能是是B-1细胞和B-2细胞的异同齐齐哈尔医学院免疫CDCD抗原抗原 CD21CD21CD35CD35CD40CD40CD80/86CD80/86CD19/CD5CD19/CD5 特异性特异性 EBEB病毒受体病毒受体 活化活化B B细胞细胞 与与CD40LCD40L结合活化结合活化B B细胞细胞 与与T T细胞细胞CD28CD28结合，活化结合，活化T T细胞细胞 B1B1双阳；双阳；B2B2仅为仅为CD19+CD19+ B B细胞表面主要细胞表面主要CD

19、CD抗原及其特性抗原及其特性齐齐哈尔医学院免疫CD3CD3- -CD56CD56+ +CD16CD16+ +三、三、NKNK细胞表面标志细胞表面标志（nature killer cell,NK)熟悉熟悉复复 习习1.对细胞液分离的要求？2.从PBMC中得到淋巴细胞的方法？3.成熟T细胞表面主要标志？4.B细胞根据什么主要标志分为何种亚群？齐齐哈尔医学院免疫抗原提呈类细胞表面标志抗原提呈类细胞表面标志第三节第三节 抗原提呈细胞的表面标志抗原提呈细胞的表面标志CD1a,CD11c,CD83CD1a,CD11c,CD83齐齐哈尔医学院免疫一、单核一、单核- -吞噬细胞系统吞噬细胞系统组织部位组织部位

20、 细胞名称细胞名称 骨髓骨髓 干细胞干细胞单核母细胞单核母细胞前单核细胞前单核细胞 骨髓和血液骨髓和血液 单核细胞单核细胞 各种组织各种组织 组织细胞（结缔组织）组织细胞（结缔组织）, ,枯否细胞（肝）枯否细胞（肝） （巨噬细胞）（巨噬细胞） 破骨细胞（骨）、小胶质细胞（神经破骨细胞（骨）、小胶质细胞（神经 组织）、组织）、表面标志表面标志: :CD14CD14熟悉熟悉齐齐哈尔医学院免疫二、树突状细胞二、树突状细胞（dendritic cell)抗原提呈能力最强DC的共同特征包括：形态上呈树突状，胞质内存在特异性形态上呈树突状，胞质内存在特异性BirbeckBirbeck颗粒颗粒状结构状结构表

21、达表达CD1aCD1a、高水平、高水平MHC-MHC-类抗原和多种辅助分子类抗原和多种辅助分子吞噬功能较低吞噬功能较低可有效诱导巢居的静息性幼稚可有效诱导巢居的静息性幼稚T T细胞发生增殖细胞发生增殖熟悉熟悉齐齐哈尔医学院免疫1.1.用抗人用抗人CD3CD3单克隆抗体检测单克隆抗体检测T T淋巴细胞，其结果淋巴细胞，其结果代表（代表（ ）A TA T淋巴细胞总数淋巴细胞总数 B ThB Th细胞数细胞数 C TsC Ts细胞数细胞数D CD4TD CD4T细胞数细胞数 E CD8TE CD8T细胞数细胞数2.2.下列指标可以评价下列指标可以评价AIDSAIDS病人的细胞免疫功能的病人的细胞免疫

22、功能的是（是（ ）A CD2/CD3A CD2/CD3细胞比值细胞比值 B CD3/CD4B CD3/CD4细胞比值细胞比值C CD3/CD8C CD3/CD8细胞比值细胞比值 D CD4/CD8D CD4/CD8细胞比值细胞比值E CD2/CD4E CD2/CD4细胞比值细胞比值3.能与能与SRBC结合形成结合形成E花环的细胞主要是花环的细胞主要是( )AT细胞细胞 BB细胞细胞 C单核细胞单核细胞 D粒细胞粒细胞 E血小板血小板 ADA齐齐哈尔医学院免疫4. B4. B细胞重要表面标志不包括（细胞重要表面标志不包括（ ）A A 膜免疫球蛋白（膜免疫球蛋白（SmIgSmIg） B EBB E

23、B病毒受体病毒受体 C EC E受体受体 D D 补体受体补体受体D D 小鼠红细胞受体小鼠红细胞受体5.5. NK细胞特有的表面抗原是细胞特有的表面抗原是( )A.CD2 B.CD16 C.无特异的表面抗原无特异的表面抗原 D.CD23 E.CD56 6.单核巨噬细胞系统细胞的表面标志单核巨噬细胞系统细胞的表面标志( ) ACD2 BCD16 CCD14 DCD16 ECD197.外周成熟的休止外周成熟的休止B细胞分如下亚群细胞分如下亚群( )A.CD4+细胞细胞 B.CD4-细胞细胞 C.CD8+细胞细胞 D. CD8-细胞细胞 E.B1细胞和细胞和B2细胞细胞CCCE齐齐哈尔医学院免疫第

24、四节第四节 淋巴细胞功能检测淋巴细胞功能检测T T细胞（负责细胞免疫功能）细胞（负责细胞免疫功能）B B细胞（执行体液免疫功能）细胞（执行体液免疫功能）NKNK细胞（非特异性免疫作用）细胞（非特异性免疫作用） 齐齐哈尔医学院免疫一、一、T T细胞功能检测细胞功能检测( (一一)T)T细胞增殖试验细胞增殖试验( (二二) )抗原特异性抗原特异性T T细胞增值试验细胞增值试验( (三三)MHC-)MHC-肽四聚体技术肽四聚体技术( (四四)T)T细胞分泌功能测定细胞分泌功能测定( (五五)T)T细胞介导的细胞毒试验细胞介导的细胞毒试验( (六六) )体内试验体内试验齐齐哈尔医学院免疫1. 1. 原

25、理原理淋巴细淋巴细胞胞DNADNA合成合成分化分化母细胞母细胞刺激物刺激物细胞变大细胞变大细胞浆扩大细胞浆扩大空泡空泡核仁明显核仁明显核染色质疏松核染色质疏松（一）（一）T T淋巴细胞增殖试验淋巴细胞增殖试验 -T-T细胞转化实验细胞转化实验掌握掌握齐齐哈尔医学院免疫T T细胞细胞外来物质外来物质细胞内大分子物质细胞内大分子物质的合成增加的合成增加T T细胞形态变化细胞形态变化丝裂原：非抗原性刺激物丝裂原：非抗原性刺激物 PHAPHA、ConAConA、PWMPWM抗原性刺激物：抗原性刺激物：PPD(purified protein derivative)同位素法同位素法形态法形态法齐齐哈尔医

26、学院免疫标本：标本：外周血单个核细胞外周血单个核细胞37 72h37 72h+ +取培养细胞涂片染色镜检取培养细胞涂片染色镜检观察细胞形态学改变观察细胞形态学改变PHAPHA无无PHAPHA刺激物：刺激物：常用常用PHAPHA（1 1）形态学检查法）形态学检查法齐齐哈尔医学院免疫齐齐哈尔医学院免疫齐齐哈尔医学院免疫淋巴细胞标志及功能检测 龚道科 2002.4齐齐哈尔医学院免疫%100胞数转化和未转化的淋巴细转化的淋巴细胞数转化率正常转化率正常转化率:60%-80%;:60%-80%; 小于小于50%50%为降低为降低齐齐哈尔医学院免疫优点：优点：形态学方法形态学方法简便易行简便易行，适，适 于

27、基层实验室应用。于基层实验室应用。缺点：缺点：判断结果易受主观因素影判断结果易受主观因素影 响，响，重复性和准确性差重复性和准确性差。 方法学评价：齐齐哈尔医学院免疫外周血单个核细胞外周血单个核细胞37 56h37 56h +收集培养细胞收集培养细胞液体闪烁器计数液体闪烁器计数cpmcpm加入加入3 3H-TdRH-TdRPHA无无PHA37 16h（2 2）3 3H-TdRH-TdR掺入法掺入法齐齐哈尔医学院免疫优点优点：3H-TdR3H-TdR掺入法掺入法敏感性高敏感性高，客观，客观 强，重复性好。强，重复性好。缺点：缺点：但需一定设备条件，同时还存但需一定设备条件，同时还存 在放射性在放

28、射性核素污染核素污染问题。问题。SI=刺激指数刺激指数PHA刺激管刺激管cpm均值均值 对照管对照管cpm均值均值齐齐哈尔医学院免疫(3)MTT (3)MTT 比色法比色法 MTTMTT（噻唑盐）在活细胞内被线粒体琥珀（噻唑盐）在活细胞内被线粒体琥珀酸脱氢酶还原成酸脱氢酶还原成蓝黑色蓝黑色( (甲臢）甲臢）物质，与物质，与细胞增殖细胞增殖呈正相关呈正相关。均值A对照孔均值A试验孔570nm570mSI 齐齐哈尔医学院免疫方法学评价：方法学评价：优点：优点：操作简便，无放射性污染操作简便，无放射性污染缺点：缺点：敏感性敏感性不及不及放射性核素法放射性核素法 齐齐哈尔医学院免疫 感染性疾病，感染性

29、疾病，T T细胞会形成对病原微生物细胞会形成对病原微生物的免疫记忆，在体外分离到的免疫记忆，在体外分离到T T细胞后，培养增细胞后，培养增殖殖T T细胞的同时加入相应病原的特异抗原进行细胞的同时加入相应病原的特异抗原进行刺激，激活该细胞的记忆，有记忆的细胞会刺激，激活该细胞的记忆，有记忆的细胞会分泌分泌- -干扰素，通过检测干扰素，通过检测- -干扰素的量可以干扰素的量可以反映反映T T细胞情况。细胞情况。（二）抗原特异性（二）抗原特异性T T细胞增值试验细胞增值试验了解了解齐齐哈尔医学院免疫 通过通过TCRTCR与与MHC-MHC-肽的特异性相互肽的特异性相互作用，来检测抗原特异的作用，来检

30、测抗原特异的T T细胞，了细胞，了解机体的免疫状况。解机体的免疫状况。（三）（三）MHC-MHC-肽四聚体技术肽四聚体技术了解了解齐齐哈尔医学院免疫 免疫学、细胞生物学及分子生物免疫学、细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含量、生学技术分别检测细胞因子含量、生物学活性或基因表达水平。物学活性或基因表达水平。（四）（四）T T细胞分泌功能测定细胞分泌功能测定了解了解齐齐哈尔医学院免疫1.1.原理原理靶细胞抗原靶细胞抗原T T细胞细胞 观察杀伤活力观察杀伤活力致敏致敏CTLCTL靶细胞靶细胞（五）（五）T T细胞介导的细胞毒试验细胞介导的细胞毒试验熟悉熟悉齐齐哈尔医学院免疫形态学方法：形态学

31、方法：淋巴细胞淋巴细胞+ +肿瘤细胞肿瘤细胞 计数残留肿计数残留肿瘤细胞瘤细胞同位素法：同位素法：淋巴细胞（淋巴细胞（CTLCTL）+ +含含5151Cr Cr 的肿瘤细的肿瘤细胞胞 肿瘤细胞破坏肿瘤细胞破坏 5151Cr Cr 释放释放 计数计数仪测定仪测定5151CrCr放射活性放射活性意义：意义： 判断肿瘤患者判断肿瘤患者CTLCTL杀伤肿瘤细胞的能力杀伤肿瘤细胞的能力 2.2.方法方法齐齐哈尔医学院免疫( (一一) )特异性抗原皮肤试验特异性抗原皮肤试验(OT)(OT)( (二二)PHA)PHA皮肤试验皮肤试验 ( (六六) ) 体内试验体内试验了解了解齐齐哈尔医学院免疫溶血空斑试验溶

32、血空斑试验酶联免疫斑点试验酶联免疫斑点试验二、二、B B细胞功能检测细胞功能检测了解了解齐齐哈尔医学院免疫SRBC取出脾细胞，取出脾细胞， 加入加入SRBCSRBC及补体及补体4天天37 0.7%37 0.7%琼脂溶液琼脂溶液3737 溶血溶血溶血空斑试验溶血空斑试验1.1.原理原理齐齐哈尔医学院免疫一个溶血空斑表示一个抗体形成细胞。一个溶血空斑表示一个抗体形成细胞。溶血空斑的大小表示抗体形成的量。溶血空斑的大小表示抗体形成的量。齐齐哈尔医学院免疫测定测定药物药物或或手术手术对体液免疫功能的影响对体液免疫功能的影响评价评价免疫治疗免疫治疗或或免疫重建免疫重建后机体体液免后机体体液免疫状态疫状态

33、 临床应用与评价临床应用与评价齐齐哈尔医学院免疫染色计数染色计数离心取上清离心取上清测测LDHLDH形态学法形态学法酶释放法酶释放法放射性核放射性核 素释放法素释放法溶溶解解靶靶胞胞细细常用靶细胞常用靶细胞: :人人K562K562细胞株细胞株 鼠鼠YAC-1YAC-1 三、三、NKNK细胞活性测定细胞活性测定熟悉熟悉 测放射活性测放射活性齐齐哈尔医学院免疫方法及原理：方法及原理：靶细胞靶细胞效应细胞效应细胞 靶细胞死亡靶细胞死亡可被台可被台 盼兰染色盼兰染色形态法形态法释放胞内酶释放胞内酶酶释法酶释法乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶 碱性磷酸酶碱性磷酸酶简便易于操作简便易于操作 受主观因素响大受主观因素

34、响大 无法计数轻微损伤的细胞无法计数轻微损伤的细胞经济、快速、简便经济、快速、简便敏感度低敏感度低 本底较高本底较高 齐齐哈尔医学院免疫 一、中性粒细胞功能检测技术一、中性粒细胞功能检测技术 二、巨噬细胞功能检测技术二、巨噬细胞功能检测技术第五节第五节 其他免疫细胞功能检测技术其他免疫细胞功能检测技术了解了解齐齐哈尔医学院免疫 趋化趋化 吞噬吞噬 胞内杀灭作用胞内杀灭作用 吞噬细胞的功能吞噬细胞的功能熟悉熟悉齐齐哈尔医学院免疫 趋化功能检测趋化功能检测 吞噬和杀菌功能测定吞噬和杀菌功能测定一、中性粒细胞功能的检测一、中性粒细胞功能的检测了解了解齐齐哈尔医学院免疫1.原理中性粒细胞趋化因子：中性

35、粒细胞趋化因子：微生物细胞成分及其代谢产物微生物细胞成分及其代谢产物补体活性片段补体活性片段C5aC5a、C3aC3a( (一一) ) 细胞运动功能细胞运动功能趋化功能检测趋化功能检测齐齐哈尔医学院免疫琼脂糖平板法琼脂糖平板法 滤膜渗透法（滤膜渗透法（Boyden Boyden 小室法）小室法）2.2.方法学方法学齐齐哈尔医学院免疫 1 1显微镜检查法显微镜检查法100(%)计数的白细胞数吞噬细菌的白细胞数吞噬率100(%)计数的白细胞数数胞内含着染菌体的细胞杀菌率( (二二) )吞噬和杀菌功能测定吞噬和杀菌功能测定齐齐哈尔医学院免疫100min0min9060301(%)）菌落数菌落数或、作

36、用（杀菌率3 3NBTNBT还原试验还原试验6-6-磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖 戊糖戊糖 NADNAD- -+H+H+ + NADH NADHNBTNBT（硝基蓝四氮唑）（硝基蓝四氮唑） 甲臜颗粒甲臜颗粒2. 2. 溶菌法溶菌法6-6-磷酸葡萄糖脱氢酶磷酸葡萄糖脱氢酶齐齐哈尔医学院免疫( (一一) )炭粒廓清试验炭粒廓清试验( (二二) )吞噬功能检测吞噬功能检测( (三三) )巨噬细胞溶酶体酶的测定巨噬细胞溶酶体酶的测定( (四四) )细胞毒作用测定细胞毒作用测定( (五五) )巨噬细胞促凝血活性测定巨噬细胞促凝血活性测定二、巨噬细胞功能检测二、巨噬细胞功能检测了解了解齐齐哈尔医学院免疫反映机体反

37、映机体免疫功能免疫功能状态。状态。肿瘤、免疫缺陷病等疾病的肿瘤、免疫缺陷病等疾病的诊断和疾诊断和疾 病预后监测病预后监测。组织组织器官移植器官移植后对受者细胞免疫学功后对受者细胞免疫学功 能监测则有利于排斥反应早期发现。能监测则有利于排斥反应早期发现。第六节第六节 免疫细胞表面标志和功能检测免疫细胞表面标志和功能检测的临床应用的临床应用齐齐哈尔医学院免疫1.1.T T细胞增殖试验的原理、刺激物及方细胞增殖试验的原理、刺激物及方法？法？2.2.将细胞分离的方法有哪些？将细胞分离的方法有哪些？思考题思考题齐齐哈尔医学院免疫1.1.评价人评价人T T细胞功能的试验细胞功能的试验（ ）A.A.血清血清

38、IgIg的测定的测定 B.B.溶血空斑溶血空斑C.C.膜表面免疫球蛋白测定膜表面免疫球蛋白测定D.D.淋巴细胞转化淋巴细胞转化 E.EE.E花环试验花环试验2.2.吞噬细胞吞噬的三个阶段是（吞噬细胞吞噬的三个阶段是（ ）A.A.趋化趋化/ /吸附吸附/ /胞内杀灭胞内杀灭 B.B.趋化趋化/ /识别识别/ /吞噬吞噬 C.C.趋化趋化/ /识别识别/ /吸附吸附 D.D.趋化趋化/ /识别识别/ /胞内杀灭胞内杀灭 E.E.趋化趋化/ /吞噬吞噬/ /胞胞内杀灭内杀灭D DE E齐齐哈尔医学院免疫3. 3. 将将PBMCPBMC悬液加入尼龙毛柱内，充分反应后进悬液加入尼龙毛柱内，充分反应后进行灌洗，先洗脱下来的细胞是（行灌洗，先洗脱下来的细胞是（ ）A.TA.T细胞细胞