正交优选连翘中齐墩果酸的提取工艺

1、正交优选连翘中齐墩果酸的提取工艺         【摘要】  目的优选连翘中齐墩果酸的提取工艺。方法以齐墩果酸含量为指标，采用L9(34)正交设计实验，考察了提取时间、乙醇浓度、料液比对提取率的影响,优选出合理的提取工艺。用高效液相测定齐墩果酸的含量。结果优选出齐墩果酸的最佳提取工艺条件是：超声提取3次，40 min/次，90%乙醇溶液，料液比112。结论采用此工艺提取方法快速、简单，可以为进一步研究连翘提供参考。 【关键词】  正交实验 齐墩果酸 连翘Abstract：ObjectiveTo

2、optimize the extraction condition of oleanolic acid from  Fructus ForsythiaeMethodsWith oleanolic acid as index，extraction time、concentration of alcohol and amount of alcohol and were evaluated by L9(34)orthogonal design methodHPLC was used to analyze the content of oleanolic acidResultsThe opt

3、imum extraction condition was described as follow：ultrasonic extraction 3 times (once 40 min)，90% ethanol solution, and 12-fold solventConclusionThe optimized technology is quick and simple，and can be used for theoretical basicKey words：Orthogonal design;   Oleanolic acid;   Fruc

4、tus Forsythiae   中药连翘是木犀科连翘属植物的干燥果实，主产山西、河南、陕西,有广谱的抗菌作用，如对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎双球菌、绿脓杆菌等有不同程度的抑制作用，有镇吐、解热、抗炎以及保肝作用，含有连翘苷、牛蒡子苷、齐墩果酸等1。齐墩果酸具有降低谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性、促进细胞再生、防止肝硬化、抗炎等作用，是治疗肝炎的有效成分。近年有关研究证明其有抗癌活性。       中国药典2对连翘中的连翘苷进行了测定；孙国祥等3对连翘的HPLC指纹图谱进行了研究；张杲等4对不同采收期连翘进行了HPLC

5、指纹图谱研究；邹盛勤5对不同采收期连翘中的熊果酸和齐墩果酸含量进行了测定；张涛等6对连翘不同炮制品中连翘苷进行了HPLC测定。   本工艺以齐墩果酸的含量作为考察指标，采用单因素实验设计与正交实验设计相结合，用HPLC测定，优选连翘中齐墩果酸的提取工艺，以期为进一步研究连翘奠定基础。1   仪器与试药1   仪器日本Hitach公司高效液相色谱仪；L-2400型紫外检测器；Gold Spectrumlab 54 紫外可见分光光度计(上海棱光技术有限公司)；KQ2200E型超声仪(昆山市超声仪器有限公司)； PH-030干培两用箱（上海

6、一恒科技有限公司）；RE - 52AA型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）； Sartorius十万分之一电子天平(德国)。 2   试药药材连翘购自江西省药材公司(产地山西)，经江西医学院冯江教授鉴定为正品连翘；齐墩果酸对照品由中国药品生物制品检验所提供；甲醇为色谱纯,超纯水；其他试剂均为分析纯。2  方法与结果2.1   色谱条件Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm,5 m）；流动相为甲醇-水-0.1%冰醋酸（9280.1，V/V/V）；柱温：30；流速1 mL/min；检测波长215 nm。2.2

7、60;  检测波长的确定取对照品溶液，经紫外分光光度计在200500 nm范围内扫描得知，对照品溶液在203，207，210 nm等处有吸收，但由于流动相在短波长处有末端吸收，为了减少干扰, 因此选择最大的215 nm作为测定含量的吸收波长。2.3  对照品溶液的制备  取对照品105恒温干燥至恒重，精密称取10.3 mg齐墩果酸对照品，置10 ml容量瓶中，用流动相溶解，超声5 min，定容至10 ml，得到1.03 mg/ml的对照品溶液。2.4   标准曲线和线性范围的考察 依次精密吸取对照品溶液0.1，0.5，2，3，4 ml后，置10

8、 ml容量瓶中，再加10 ml流动相溶解稀释，分别取10 l进样3次，记录峰面积，以峰面积值(Y)对齐墩果酸的浓度(X )进行线性回归，得回归方程为Y=3 980 023X-28 536, r=0.999 8。结果表明齐墩果酸在0.010.4 mg/ml范围内线性关系良好。2.5  单因素实验         表1  因素水平（略）2.6   供试品溶液的制备及正交实验把连翘药材研碎，过40目筛，取恒温干燥至恒重的连翘药品，精密称取1g 9份，按表2设计先用石油醚脱脂2次，弃

9、去石油醚，烘干，然后把药渣用乙醇溶液冷浸1 h，超声提取3次，过滤，合并滤液，蒸干，用流动相溶解、超声，过0.45 m微孔滤膜，定容于10 ml容量瓶中，各取10 l分别进样3次，记录峰面积，用面积外标法测定齐墩果酸的含量。见表2。表2  正交实验结果(L9(34)及极差分析（略）从极差的分析结果知道，RARBRC，超声时间A的R值最大，也就是超声提取的时间影响最大，其次是浓度，影响最小的是料液比，因此较好的工艺条件是A2B3C3，即超声40 min，乙醇浓度是90，料液比为116，此时得到齐墩果酸的含量最大。为了进一步分析因素的可信度，还得进行方差分析。见表3。 

10、0;从方差分析结果来看，超声的时间是最显着因素，其次是乙醇浓度，最后是料液比。因此，提取过程中，应把超声时间作为关键因素考虑，然后是乙醇浓度和料液比。表3   方差分析（略）2.7  方法学考察3  讨论   从正交实验的结果及多次实验知道，料液比为112和116两者所得到的结果没多大区别，从考虑节约角度来说，选取112较好，因此最佳的提取工艺是超声3次，40 min/次，乙醇的体积分数是90%，料液比为112。   从热回流、冷浸、索氏提取几种提取方法比较来看，同样条件下，超声所得的含量最大，且简单易行，因此选择超声作为提取的研究方法。   因为连翘中还含有熊果酸，要分离齐墩果酸和熊果酸这对异构体，从Alltech ODS和KromasilC18分离的效果来看，C18分离效果较好，故选择了KromasilC18，加冰醋酸可提高两者的分离能力。【参考文献】  1 郑汉臣，蔡少青.药用植物学与生药学，第4版 M.北京：人民卫生出版社，2005:360.2 国家药典委员会. 中国药典, 2005，部S. 北京: 化学工业出版社,2005: 117.3 孙国祥,慕善学,侯志飞,等. 连翘的HPLC指纹图谱研究J.中成药，2007，29（2）：161.4 张 杲,李发荣,段 飞